Estudo sobre a propagacao de virus da febre amarela vacinal 17D e producao de vacina em culturas primarias de fibroblastos.

Abstract

A tecnologia basica para a producao de vacinas contra a febre amarela em embrioes de galinha permanece inalterada,desde 1940.Descreve um metodo economico e eficiente,de producao de vacina contra febre amarela da cepa 17DD,em culturas de fibroblasto de embriao de galinha(CEF),com titulos de 6,3 a 6,7 log10 PFU/mL.A metodologia foi utilizada com sucesso na producao de lotes sementes de virus 17D/204/DD a partir de cDNA clonado e na producao de lotes vacinais com o virus 17DD.A termoestabilidade de 2 diferentes formulacoes(5 e 50 doses)da vacina produzida em CEF com o virus 17DD demonstraram ser tao alta quanto a das vacinas atualmente em uso.A producao em CEF nao levou a selecao de variacoes geneticas.O virus 17DD produzido em CEF tambem foi indistinguivel do seu virus semente parental em termos de tamanho de placa de lise e imunogenicidade em camundongos e macacos.A comparacao do virus produzido em CEF com o virus do lote semente preparado em embriao,no teste em macacos revelou um escore clinico mais elevado para o virus de CEF.As diferencas nos escores histologicos do sistema nervoso central para macacos inoculados com o virus de embriao e com a vacina experimental de CEF ficaram no limite da significancia estatistica.O sistema do interferon foi identificado como sendo o fator de interferencia levando a baixa produtividade viral em CEF.Esta identificacao foi realizada atraves de diversas abordagens experimentais utilizando-se culturas de CEF em alta e baixa densidade e incluiram:a influencia de sobrenadantes de culturas de CEF infectadas com virus 17DD,tratados ou nao por exposicao ao acido ou calor,na replicacao de virus Sindbis,a analise da atividade da enzima 2[vbar]-5[vbar]oligoadenilato sintetase,cuja expressao e controlada ao nivel transcricional pelo sistema de interferon e a deteccao por transcricao reversa seguida de amplificacao por reacao em cadeia da polimerase(RT-PCR)da expressao de genes de interferon e do gene da propria 2[vbar]-5[vbar]oligoadenilato sintetase.Embora experimentos com culturas de CEF em baixa densidade nao tenham sido extensivamente realizados,os resultados sugerem que tanto em alta como em baixa densidade o IFN esta sendo produzido.Devido a diluicao do IFN no meio e ao espacamento celular na cultura de baixa densidade,este nao e capaz de estabelecer o estado anti-viral nas celulas ainda nao infectadas a tempo de impedir a replicacao do virus.(AU). Biologia Parasitaria. Doutor -- Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2004.