Content uploaded by Banur Boynukara
Author content
All content in this area was uploaded by Banur Boynukara on Jul 25, 2024
Content may be subject to copyright.
142
✉ *Corresponding author: senemozturk48@gmail.com
This work is licensed under a Creative Commons Attribution -NonCommercial 4.0 International License which allows users to read,
copy, distribute and make derivative works for non -commercial purposes from the material, as long as the author of the original work is cited properly.
Van Vet J, 2024, 35 (2) 142-144
Van Veterinary Journal
https://dergipark.org.tr/tr/pub/vanvetj
Cite this article as: Öztürk Köse S, Boynukara B, Bıyık HH (2024). Fusarium fujikuroi, Mucor racemosus: Cockatiel
(Nymphicus hollandicus). Van Vet J, 35 (2), 142-144. DOI: https://doi.org/10.36483/vanvetj.1480168
ISSN: 2149-3359
Olgu Sunumu
e-ISSN: 2149-8644
Fusarium fujikuroi, Mucor racemosus: Sultan Papağanı (Nymphicus hollandicus)
Senem ÖZTÜRK KÖSE1, * Banur BOYNUKARA2Hacı Halil BIYIK1
1Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü, Aydın, Türkiye
2Tekirdağ Namık Kemal Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Tekirdağ, Türkiye
Geliş Tarihi: 07.05.2024
Kabul Tarihi: 25.06.2024
ÖZ
Bu çalışmada iştahsızlık, kilo kaybı ve dışkıda kötü koku şikayetleri ile getirilen Sultan papağanının
(Nymphicus hollandicus Kerr, 1972) dışkı örneği mikolojik yönden incelenmiştir. Dışkı örneğinin aseptik
şartlarda seri dilüsyonları yapılarak Dichloran Rose-Bengal Chloramphenicol Agar (DRBC) ve kanlı agar
besiyerlerine inokülasyonu yapılmıştır. İnkübasyon sonrası örnekler saf koloniler olarak ayrılmış ve bu saf
kolonilerden morfolojik, mikroskobik ve moleküler tanımlamalar yapılmıştır. Moleküler tanımlamalarda
fenol-kloroform izoamilalkol DNA izolasyon yöntemi kullanılmıştır. Fungus DNA’larından PCR amplikasyonu
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Biyoloji Bölümü Mikrobiyoloji Laboratuvarında ve hizmet alımı olarak
ticari firmalarda yaptırılmıştır. Sekanslama hizmetleri Innopenta Biyoteknoloji ve Macrogen Europe
tarafından yapılmıştır. ITS1 (50-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-30) / ITS4 (50-TCCTCCGCTTATTGATATGC-30)
primerleri kullanılmıştır. Fungusların tanımlanmasında nBLAST programı kullanılmış ve genetik benzerlik
oranlarına göre türler eşleştirilmiştir. Sekans sonuçları GenBank sisteminde kayıt altına alınmış ve kültür
koleksiyonuna eklenmiştir. Moleküler çalışmalar sonrasında Fusarium fujikuroi HBF578, Mucor racemosus
HBB579 suşları tanımlanmıştır. Literatür çalışmaları incelendiğinde Fusarium fujikuroi HBF578 suşunun
Sultan papağanı’ndan daha önce izole edilmediği ilk kez bu çalışmada raporlandığı görülmüştür.
Anahtar Kelimeler: Fusarium fujikuroi, Mucor racemosus, Sultan papağanı (Nymphicus hollandicus).
ABSTRACT
Fusarium fujikuroi, Mucor racemosus: Cockatiel (Nymphicus hollandicus)
In this study, the stool sample of a cockatiel (Nymphicus hollandicus Kerr, 1972), brought with complaints of
loss of appetite, weight loss and bad smell in the stool, was examined mycologically. Serial dilutions of the
stool sample were made under aseptic conditions and inoculated into Dichloran Rose-Bengal
Chloramphenicol Agar (DRBC) and blood agar media. After incubation, the samples were separated as pure
colonies and morphological, microscopic and molecular identifications were made from these pure colonies.
Phenol-chloroform isoamylalcohol DNA isolation method was used for molecular identification. PCR
amplification from fungal DNAs was carried out at Aydın Adnan Menderes University Biology Department
Microbiology Laboratory and by commercial companies as service procurement. Sequencing services were
provided by Innopenta Biotechnology and Macrogen Europe. Primers ITS1 (50-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-30)
/ ITS4 (50-TCCTCCGCTTATTGATATGC-30) were used. The nBLAST program was used to identify fungi and
species were matched according to their genetic similarity rates. Sequence results were recorded in the
GenBank system and added to the culture collection. After molecular studies, Fusarium fujikuroi HBF578 and
Mucor racemosus HBB579 strains were identified. When the literature studies were examined, it was seen
that the Fusarium fujikuroi HBF578 strain had not been isolated from the Cockatiel before and was reported
for the first time in this study.
Keywords: Cockatiel (Nymphicus hollandicus), Fusarium fujikuroi, Mucor racemosus.
GİRİŞ
Sultan papağanı (Nymphicus hollandicus Kerr, 1972),
Cacatuidae familyasına ait Avustralya kökenli bir kuş olup,
(Entegre Taksonomik Bilgi Sistemine göre) dünyanın en
küçük kakadu türünü temsil etmektedir (Brilhante ve ark.
2010). Hayvanlarda ve insanlarda bağışıklık sistemi
güçlüyse fungal hastalıklar tolere edilebilirken, bazı
durumlarda immünolojik ve fizyolojik hastalıklara neden
olabilir (Mirhosseini ve Khosravi 2023). Kuşlar, solunum
ve sinir sistemi anatomileri nedeniyle mikotik etkenlere
karşı hassastır ve serumları çok zayıf antifungal aktiviteye
sahiptir. Ancak kuşların gastrointestinal sistemi
yapısından dolayı mantarların gelişmesi için daha uygun
bir ortam olabilir (Shivachandra ve ark. 2004).
[Senem ÖZTÜRK KÖSE ve ark.] Van Vet J, 2024, 35 (2) 142-144
143
Yabani ve evcil kuşlar üzerine yapılan çalışmalarda,
gatrointestinal sistem mikrobiyotaları incelenmiş;
Saccharomyces, Cryptococcus, Candida, Trichosporon ve
Rhodotorula gibi maya türleri, Aspergillus, Penicillium,
Mucor, Fusarium, Rhizopus gibi filamentli funguslar tespit
edilmiştir (Brilhante ve ark. 2010; Simi ve ark. 2018;
Boynukara ve ark. 2019).
Kuşların barsaklarında, kloaklarında ve dışkılarında
bulunan mikrobiyota ile ilgili çalışmalar, patojen
mantarların yayılma yolları hakkında da yeni bilgiler
sunmuştur (Gómez-De-Anda ve ark. 2023). Araştırmalarda
kuşların yaklaşık %50'sinin, insanlar ve kendileri için
patojen olabilecek mantarların konakçısı ve taşıyıcısı
haline geldiği görülmüştür (Abbas ve ark. 2017). Taşıyıcı
kuşlar, patojen mantarların büyümesini engelleyen yüksek
vücut sıcaklıkları nedeniyle genellikle hastalanmazlar ve
bu mantarlar, bağışıklık sistemi zayıf olan insanların veya
diğer memelilerin vücut sıcaklıklarında tehlikeli hale gelir
(Dynowska ve Kisicka 2005).
Bu çalışmada; kilo kaybı, iştahsızlık, ilgisizlik ve dışkıda
ekşimsi kötü koku şikayetleri olan 6.5 yaşındaki bir Sultan
papağanı’nın dışkı örneği mikolojik yönden incelenmiş ve
izole edilen türlerin moleküler tanımlamaları yapılmıştır.
VAKANIN TAKDİMİ
Bu çalışmada iştahsızlık ve kilo kaybı olan Sultan
papağanına ait (Şekil 1) dışkı örneği kullanılmıştır. Çalışma
için hasta sahibinden bilgilendirme ve onam formu
alınmıştır.
Şekil 1: Dışkı örneği incelenen hasta papağan.
Figure 1: Sick parrot whose fecal sample were examined.
Dışkı örneklerinin fizyolojik tuzlu su (%0.85) kullanılarak
seri dilüsyonları hazırlanmış Dichloran Rose-Bengal
Chloramphenicol Agar (DRBC) ve kanlı agar besiyerlerine
inokülasyonu yapılmıştır. İnkübasyon sonrasında gelişen
koloniler malt ekstrat agar besiyerine tek koloni ekim
tekniği ile saflaştırılmıştır. Koloni morfolojileri ve
mikroskobik görüntüleri incelenerek morfolojik
tanımlamaları yapılmıştır (Boynukara ve ark. 2023).
Saf koloniler DNA izolasyonu için 1 ml’lik steril saf su
içerisine aktırılarak -20 °C’de 1 gece saklanmıştır. DNA
izolasyonu fenol-kloroform izoamil alkol yöntemi
kullanılarak yapılmıştır. DNA izolasyonu sonucunda elde
edilen DNA’lar jel elektroforezi yöntemi ile görüntülenmiş
ve Nanodrop spektrofotometresi (Thermo Fisher) ile saflık
ve miktar kontrolleri yapılmıştır. Örneklerin PCR
amplifikasyonu için ITS1 (50-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-
30) / ITS4 (50-TCCTCCGCTTATTGATATGC-30) primerleri
kullanılmıştır. PCR amplikasyonunda mastermix (Thermo
Fisher) kullanılmıştır. Bir fungal örneğin PCR
amplifikasyonu Aydın Adnan Menderes Üniversitesi’nde
yapılmış olup sekans hizmeti İnnopenta Biyoteknoloji
firmasından alınmıştır. Diğer örneğin PCR amplifikasyonu
ve sekans hizmeti Macrogen Europa şirketi tarafından
gerçekleştirilmiştir. Sekans sonuçları için nBLAST
(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/) adresindeki benzerlik
oranları karşılaştırılmış ve benzerlik oranları incelenerek
tür tanımlaması yapılmıştır.
TARTIŞMA VE SONUÇ
İzole edilen ve morfolojik olarak tanımlanan fungal türlere
ait DNA’ların Nanodrop spektrofotometresi (Thermo
Fisher) ile saflık ve miktar kontrolleri sonuçları Tablo 1’de
verilmiştir. Moleküler olarak tanımlaması yapılan türlerin
GenBank kayıtları oluşturulmuş ve aksesyon numaraları
alınarak kültür koleksiyonumuza eklenmiştir (Tablo 2).
Yapılan analiz sonuçlarına göre tanımlanan türler
Fusarium fujikuroi HBF578 ve Mucor racemosus
HBF579’dir.
Tablo 1: Nanodrop spektrofotometresi DNA saflık ve
miktar ölçüm sonuçları.
Table 1: Nanodrop spectrophotometer DNA purity and
quantity measurement results.
Tür adı
Nükleik asit
miktarı(ng/µl)
260/280
Abs
Fusarium fujikuroi
HBF578
38.4
1.95
Mucor racemosus
HBF579
181.7
1.90
Tablo 2: Tanımlanan türlerin sekans sonuçları.
Table 2: Sequence results of identified species.
Tür Adı
Aksesyon
numarası
Benzerlik
(%)
Fusarium fujikuroi
HBF578
OR583900
99
Mucor racemosus
HBF579
PP738383
100
Kuşlar kanatları ile fungal enfeksiyonları aeresol olarak
taşımaktadırlar. Özellikle pet cinsi olan kuşların
bulunduğu ortamlara duyarlı insanlarda da farklı
enfeksiyonlar oluşmaktadır (Boynukara ve ark. 2019)
Mucor cinsi üyeleri mukormikosise neden olan
funguslardır. Mucor türleri kuşlarda ve diğer hayvanlarda
hastalıklara neden olmaktadır (Abbas ve ark. 2017; Ciftci
ve ark. 2024). Kuşlar üzerine yapılan bir çalışmada, Mucor
racemosus türünün primer hastalık etkeni olmayıp
bağışıklığı düşmüş kuşlarda sekonder enfeksiyon
oluşturduğu belirtilmiştir (Galosi ve ark. 2022). Kuş
yumurtalarından izole edilen fungal türlerin tanımlandığı
çalışmada Mucor racemosus tespit edilmiştir (Otayoor ve
ark. 2024). Psittacinae alt familyasından Agapornis (aşk
papağanı) türünde sistemik bir mikozis görülmüştür.
İncelemeler neticesinde hastalığa sebep olan etkenler
Mucor racemosus ve Mucor circinelloides olarak
[Sultan Papağanı] Van Vet J, 2024, 35 (2) 142-144
144
tanımlanmıştır (Galosi ve ark. 2018). Ölü olarak bulunan
yabani bir kuş olan Cyanistes caeruleus’un kırmızı, şiş ve
sarkık göz kapaklarından Mucor racemosus izole edilmiştir.
Çalışmada, kuşun sirovirüs enfeksiyonu sonrasında Mucor
racemosus kaynaklı sekonder enfeksiyona yakalandığı
belirtilmiştir (Schmitz ve ark. 2018). Egzotik kuşların fekal
örneklerinden fungal izolasyonun gerçekleştiği bir diğer
çalışmada da Mucor racemosus tanımlanmıştır (Lozano ve
ark. 2023).
Fusarium cinsi funguslar genel olarak tahıllar ve yemlerde
bulunmakta ve fungal toksinler üretmektedir (Kabak ve
Var 2014). Sultan papağanı kanat ve dışkılarından alınan
örneklerden izole edilmiş fungus türleri incelendiğinde
dışkıdan Fusarium sp. izole edilmiştir (Köptcke ve ark.
2021). Orta Batı Brezilya’daki Psittacidae familyasındaki
kuşlar ve yırtıcı kuşların dışkıları incelendiğinde Fusarium
culmorum, Fusarium dimerum, Fusarium solani ve
Fusarium tabacinum tespit edilmiştir (Simi ve ark. 2018).
Fusarium cinsi tarafından üretilen (fumonisin,
moniliformin) toksinler hayvan ve insan sağlığı açısından
olumsuz etkilere sahiptir. Yapılan çalışmalarda bu
toksinlerin kas zayıflığı, solunum güçlüğü ve kalp kası
dejenerasyonu gibi etkilerinin olduğu tespit edilmiştir
(Altomare ve ark. 2021).
Bu çalışmada, Sultan papağanına (Nymphicus hollandicus
Kerr, 1972) ait dışkı örneğinde Mucor racemosus HBF 579
ve Fusairium fujikuroi HBF 578 iki farklı fungal tür
moleküler olarak tanımlanmıştır. Bu çalışmadan önce
yapılan ön çalışmada Mucor racemosus, morfolojik ve
mikroskobik özellikleri incelenerek Mucor piriformis
olarak tespit edilmesine karşın moleküler analiz sonuçları
morfolojik veriler ile incelendiğinde Mucor racemosus
olarak tanımlanmıştır. Morfolojik veriler moleküler veriler
ile birleştirilerek tür tanımlamasında en doğru sonuç elde
edilmiştir. Her iki türün de hayvana yemden bulaştığı ve
sistemik bir enfeksiyona sebep olduğu düşünülmektedir.
Literatür çalışmaları incelendiğinde ülkemizde ve
Dünya’da Sultan papağanı kaynaklı Fusarium fujikuroi
kaydına ulaşılamamıştır (Asan 2011). Bu çalışma Sultan
papağanı kaynaklı ilk Fusarium fujikuroi raporudur.
ÇIKAR ÇATIŞMASI
Yazarlar bu çalışma için herhangi bir çıkar çatışması
olmadığını beyan ederler.
TEŞEKKÜR VE BİLGİLENDİRME
Bu araştırmanın ön çalışmaları 5. International Food,
Agriculture and Veterinary Sciences Congress (17-19
March 2023-Kafkas University, Kars, Türkiye) isimli
kongrede kongre kitabına tam metin olarak basılmıştır.
Metin içinde bu ön çalışmaya atıf yapılmıştır.
YAZAR KATKILARI
Fikir/Kavram: BB
Denetleme/Danışmanlık: BB, HHB
Veri Toplama ve/veya İşleme: BB
Analiz ve/veya Yorum: SÖK
Makalenin Yazımı: SÖK
Eleştirel İnceleme: BB, HHB
KAYNAKLAR
Abbas MS, Yassein SN, Khalaf JM (2017). Isolation and identification of
some important mycological isolates from dropping of birds in
Baghdad. J Entomol Zool Stud, 5 (53), 671-673.
Altomare C, Logrieco AF, Gallo A (2021). Mycotoxins and mycotoxigenic
fungi: ris k and management. A challenge for future global food safety
and security. Encyclopedia of Mycology, 1, 64-93.
Asan A (2011). Checklist of Fusarium species reported from
Turkey. Mycotaxon, 116 (1), 479.
Boynukara B, Gülhan T, Kurç MA (2019). Komplike mantar enfeksiyonu:
muhabbet kuşu. Doğanın Sesi Dergisi, 2 (4), 24- 32.
Boynukara B, Gülhan T, Öztürk Köse S, Albayrak AK (2023). Sultan
papağanından Mucor piriformis, Rhizopus stolonifer ve Fusarium sp.
izolasyonu. 5th International Food, Agricult ure and Veterinary
Sciences Congress, Kars, Turkey.
Brilhante RSN, Castelo-Branco DDS CM, Soares GDP et al. (2010).
Characterization of the gastrointestinal yeast microbiota of cockatiels
(Nymphicus hollandicus): a potential hazard to human health . J Med
Microbiol, 59 (6), 718-723.
Ciftci A, Bıyık HH, Arslan S et al. (2024). Morphological and molecular
characterization of mucormycosis and other fungal agents in
cattle. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 30 (2), 243.
Dynowska M, Kisicka I (2005). Participation of birds in the circulation of
pathogenic fungi descend from w ater environments: a case study of
two species of Charadriiformes birds. Int J Ecohydrol Hydrobiol, 2 (05),
173-178.
Galosi L, Danesi P, Fal caro C et al. (2018). Systemic mucormycosis in two
lovebirds (Agapornis fischeri and Agapornis roseicollis). 72nd SISVet
Congress, Torino, Italy, 370.
Galosi L, Falcaro C, Danesi P et al. (2022). Atypical mycosis in psittacine
birds: A retrospective study. Front Vet Sci, 9, 883276.
Gómez-De-Anda F R, Flores-Jiménez NG, De-la-Rosa-Arana JL et al.
(2023). Isolation and identification of filamentous fungi and yeasts
with zoonotic potential obtained from cattle egret (Bubulcus ibis)
droppings. Vet Res Forum, 14 (10), 525.
Kabak B, Var İ (2014). Fusarium toksinleri. Gıda ve Yem Bilimi Teknol ojisi
Dergisi, 8, 30-42.
Köptcke FBN, de Assunção Pint o L, Moraes TT et al. (2021).
Determinação d a micobiota e micotoxinas em rações comerciais
destinadas para calopsitas (Nymphicus hollandicus) no Rio de Janeiro,
Brasil. BJAER, 4 (3), 4385-4394.
Lozano J, Louro M, Almeida C et al. (2023). Isolation of saprophytic
filamentous fungi from avian fecal samples and assessment of its
predatory activity on coccidian oocysts. Sci Rep, 13 (1), 8965.
Mirhosseini Z, Khosravi A (2023). Fungal pathogens: emerging threats to
birds and human health, assessment the relative frequency of
pathogenic fungi in ornamental bird feces. JPSAD, 1 (4), 20-24.
Otayoor RA, Dieware GK, Akpa n UM, Oku IY (2024) . Fungal culture and
bioinformatics analysis of selected eggs of domestic birds in Bayelsa
state, Nigeria. IJIBMR, 12 (1), 20-28.
Schmitz A, Korbel R, Rinder M (2018). Zygomycosis due to mucor
racemosus associated with a circovirus ınfection in a blue tit (Cyanistes
caeruleus). J Comp Pathol, 165, 67-71.
Shivachandra SB , Sah RL, Singh SD et al . (2004). Comparative
pathological changes in aflatoxin fed broilers infected with
hydropericardium syndrome. Indian J Anim Sci , 74 (6).
Simi WB, Leite-Jr DP, Paula CR et al. (2018). Yeasts and filamentous fungi
in psittacidae and birds of prey droppings in midwest region of Brazil:
a potential hazard to human health. Braz J Biol, 79, 414-422.