Эмбрионы.pdf

Full text

13
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Том 71, № 4, 2022 Журнал акушерства и женских болезней
Все права защищены
© Эко-Вектор, 2022
УДК 618.146:578.827.1-07
DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
Опыт продленного культивирования
эмбрионов человека in vitro в питательной среде
с эндометрием. Пилотное исследование
О.Н. Беспалова, И.Ю. Коган, Е.М. Комарова, Е.А. Лесик, Г.Х. Толибова, Т.Г. Траль,
В.С. Загайнова, К.В. Объедкова, А.М. Гзгзян
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта, Санкт-Петербург, Россия
Обоснование. В настоящее время представление о начальных этапах эмбриогенеза человека ограничено периодом
от стадии зиготы до стадии бластоцисты. Основным способом изучения имплантации и постимплантационного пери-
ода является создание моделей взаимодействия эмбриона и эндометрия in vitro, максимально точно имитирующих
обозначенные процессы in vivo. На данный момент не существует модели, отражающей одновременно два процес-
са: взаимодействие эмбриона с субстратом, повторяющее многие аспекты нормальной имплантации, и раннее пост-
имплантационное развитие прикрепленного эмбриона. Создание такой релевантной модели позволит изучать процес-
сы имплантации и раннего постимплантационного развития в комплексе.
Цель исследования — оценить жизнеспособность и потенциал к развитию эмбрионов человека со стадии бласто-
цисты (6-го дня развития) при их длительном сокультивировании с эндометрием в питательной среде, предназначен-
ной для культивирования до стадии бластоцисты.
Материалы и методы. Эмбрионы, полученные в результате применения вспомогательных репродуктивных тех-
нологий, культивировали с 6-го дня (со стадии бластоцисты) до 14-го дня развития в питательной среде, предна-
значенной для культивирования до стадии бластоцисты, в присутствии эндометрия. На 14-й день развития эмбрионы
и фрагменты эндометрия сначала оценивали под инвертированным микроскопом с использованием модуляционного
контраста Хоффмана, затем переносили в специальную форму и заливали парафином для приготовления цитоблоков.
Из полученных блоков изготавливали срезы, окрашивали их гематоксилином и эозином и проводили морфологическую
оценку полученных препаратов.
Результаты. В случае 1 при визуальной оценке на 14-й день культивирования в питательной среде с эндометри-
ем зафиксирован жизнеспособный развивающийся эмбрион без признаков деградации. По данным гистологического
иссле дования, фрагмент эндометрия соответствовал секреторной фазе цикла. При морфологической оценке концеп-
туса детектированы клетки трофобласта. В случае 2 при визуальной оценке на 14-й день культивирования в питатель-
ной среде с эндометрием зафиксирован жизнеспособный эмбрион без признаков деградации, находящийся в непо-
средственном контакте с эндометриальным компонентом. По данным гистологического исследования, визуализируется
фрагмент поверхностного (люминального) эпителия секреторного эндометрия. При морфологической оценке эмбриона
детектированы клетки трофобласта.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о способности эмбриона к дальнейшему развитию с 6-го дня
(со стадии бластоцисты) до 14-го дня развития в питательной среде, предназначенной для культивирования до ста-
дии бластоцисты, в присутствии эндометриального компонента. Образец может служить экспериментальной моделью
как для оценки рецептивности эндометрия in vitro, так и для изучения межклеточных взаимодействий в процессе
имплантации.
Ключевые слова: эмбрион; культивирование; эндометрий; рецептивность; продленное культивирование; имплантация.
Как цитировать:
Беспалова О.Н., Коган И.Ю., Комарова Е.М., Лесик Е.А., Толибова Г.Х., Траль Т.Г., Загайнова В.С., Объедкова К.В., Гзгзян А.М. Опыт продленного куль-
тивирования эмбрионовчеловека in vitro в питательной среде с эндометрием. Пилотное исследование // Журнал акушерства иженских болезней.
2022.Т.71. №4. С.13–20. DOI:https://doi.org/10.17816/JOWD109215
Рукопись получена: 06.07.2022 Рукопись одобрена: 04.08.2022 Опубликована: 31.08.2022

14 ORIGINAL RESEARCH Vol. 71 (4) 2022 Journal of Obstetrics and Women’s Diseases
All rights reserved
© Eco-Vector, 2022
DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
The experience of extended in vitro human
embryo cultivation in a culture medium containing
endometrium cells. A pilot study
Olesya N. Bespalova, Igor Yu. Kogan, Evgenia M. Komarova, Elena A. Lesik,
Gulrukhsor Kh. Tolibova, Tatyana G. Tral, Valeria A. Zagaynova, Ksenia V. Obyedkova,
Alexandr M. Gzgzyan
The Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott, Saint Petersburg, Russia
BACKGROUND: At present, the knowledge on initial human embryogenesis stages is limited to the period of development
from zygote to blastocyst. The creation of models based on the interaction between the embryo and endometrium in vitro, which
accurately imitate the in vivo processes, represents the major way for implantation and post-implantation evaluation. Cur-
rently, no reports have been made on models reflecting the both processes simultaneously: the interaction of the embryo with
the substrate, which represents many aspects of normal implantation, and the early post-implantation embryo development.
The creation of a relevant model would allow investigation of implantation and early post-implantation processes as a whole.
AIM: The aim of this study was to evaluate the vitality and developmental potential of human embryos from the day 6 blas-
tocyst stage during their extended co-incubation with the endometrium in a culture medium specifically designed for cultivation
to the blastocyst stage.
MATERIALS AND METHODS: Embryos obtained in assisted reproductive technology programs were cultivated from the day
6 blastocyst stage up to 14 days of development in vitro in a culture medium designed for cultivation to the blastocyst stage, in
the presence of endometrium cells. On day 14 of development, embryos and endometrial samples were first evaluated under
an inverted microscope using Hoffman modulation contrast, then transferred to a special mold and impregnated with paraffin
for cytoblock preparation. Obtained blocks were sliced, stained with hematoxylin and eosin and morphologically assessed.
RESULTS: The first sample visual assessment on day 14 of cultivation in a culture medium with endometrium cells re-
vealed a viable developing embryo with no signs of degradation. During the histological examination, the endometrial sample
corresponded to the secretory phase of the cycle. The morphological assessment of the conceptus detected trophoblast cells.
The second sample visual assessment on the day 14 of cultivation in a culture medium with endometrium cells revealed a vi-
able embryo with no signs of degradation, which was in direct contact with the endometrial component. A histological examina-
tion detected a secretory endometrial fragment of the surface (luminal) epithelium. During the morphological assessment of
the embryo, trophoblast cells were detected.
CONCLUSIONS: The data obtained indicate the ability of the embryo to further develop from the day 6 blastocyst stage up to
14 days in a culture medium specifically designed for cultivation to the blastocyst stage, in the presence of endometrium cells.
The latter can serve as an experimental model for both in vitro endometrial receptivity evaluation and intercellular interactions
during implantation investigation.
Keywords: embryo; cultivation; endometrium; receptivity; extended cultivation; implantation.
To cite this article:
Bespalova ON, Kogan IYu, Komarova EM, Lesik EA, Tolibova GKh, Tral TG, Zagaynova VA, Obyedkova KV, Gzgzyan AM. The experience of extended in vitro
human embryo cultivation in a culture medium containing endometrium cells. A pilot study. Journal of Obstetrics and Women’s Diseases. 2022;71(4):13–20.
DOI:https://doi.org/10.17816/JOWD109215
Received: 06.07.2022 Accepted: 04.08.2022 Published: 31.08.2022

DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
15
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Том 71, № 4, 2022 Журнал акушерства и женских болезней
ОБОСНОВАНИЕ
В настоящее время представление о начальных этапах
эмбриогенеза человека ограничено периодом от стадии
зиготы до стадии бластоцисты. Этот период характери-
зует внутренняя способность эмбриона к самоорганиза-
ции без участия материнских тканей. Следующий период
эмбрио нального развития от имплантации до гаструляции
имеет решающее значение для эмбриогенеза млекопи-
тающих, в частности человека. В это время устанавли-
ваются связи между эмбриональными и материнскими
тканями, а также формируются первичные зародышевые
слои и план тела. Основным способом изучения импланта-
ции и постимплантационного периода является создание
моделей взаимодействия эмбриона и эндометрия in vitro,
максимально точно имитирующих обозначенные процес-
сы in vivo.
Для моделирования событий, происходящих как
во время, так и после имплантации, предложены раз-
личные культуральные системы. Монослойные двумер-
ные (2D) культуральные системы содержат ряд ограни-
чений, поскольку не имитируют сложную трехмерную
ткань [1–3]. Трехмерные культуральные системы (3D)
поддерживают сложные физиологические процессы,
в том числе межклеточные взаимодействия, имитиру-
ющие аналогичные процессы in vivo. Несмотря на оче-
видные преимущества трехмерных систем, они облада-
ют относительно коротким периодом культивирования
эмбрио на [4, 5]. На данный момент не существует мо-
дели, отражающей одновременно два процесса: взаи-
модействие эмбриона с субстратом, включающим в себя
клетки матки, повторяющее многие аспекты нормальной
имплантации, и раннее постимплантационное развитие
прикрепленного эмбриона. Создание такой модели по-
зволит изучать процессы имплантации и раннего постим-
плантационного развития в комплексе.
Изучение постимплантационного развития челове-
ка ограничено рядом проблем, в том числе этических.
Основным документом, регулирующим научную работу
с использованием эмбрионов человека, является «Ру-
ководство по проведению исследований стволовых кле-
ток эмбриона человека», выпущенное Международным
общест вом исследований стволовых клеток. Ранее эмбри-
он человека, в соответствии с международными нормами,
разрешали культивировать только до 14-х суток развития
или до первых признаков начала гаструляции, то есть
до образования первичной полоски [6]. Согласно послед-
ним рекомендациям эмбрион человека можно культи-
вировать и после 14 дней развития, если исследование
одобрено локальным этическим комитетом [7].
Культивирование эмбриона человека в постимплан-
тационный период в культуре после 14-ти суток разви-
тия или после начала образования первичной полоски
на данный момент ограничено в большинстве стран [8].
По этой причине такое культивирование исследуют
в промежутке от 8-х суток (прикрепления культивируемого
эмбриона к модельному субстрату) до 14-х суток развития.
Моделирование имплантации на искусственный субстрат
и раннее постимплантационное развитие эмбрио на чело-
века in vitro впервые осуществили в 2016 г. [9, 10].
Несмотря на определенные ограничения, в том числе
связанные с некоторыми отличиями эмбрионов, развива-
ющихся in vivo и in vitro, разными условиями импланта-
ции и фиксированным сроком культивирования эмбрио-
нов человека, продленное культивирование эмбрионов
человека имеет широкие перспективы для дальнейшего
развития.
Цель исследования — оценить жизнеспособность
и потенциал к развитию эмбрионов человека со стадии
бластоцисты (6-го дня развития) при их длительном сокуль-
тивировании с эндометрием в питательной среде, предна-
значенной для культивирования до стадии блас тоцисты.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследование одобрено этическим комитетом НИИ аку-
шерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта.
Материал для исследования предоставлен с письменного
информированного согласия пациентов.
Эмбрионы 6-го дня развития на стадии бластоцисты
помещали в 500 мкл питательной среды, предназначен-
ной для культивирования эмбрионов до стадии бластоци-
сты. Их сокультивировали с гетерологичным эндометрием
в условиях инкубатора при температуре 37 °C с понижен-
ным содержанием диоксида углерода (готовая газовая
смесь содержала диоксид углерода в концентрации 6 %,
кислород в концентрации 5 %, азот) до 14-го дня раз-
вития. В качестве контроля эмбрионы 6-го дня развития
на стадии бластоцисты помещали в 500 мкл питательной
среды, предназначенной для культивирования эмбрио-
нов до стадии бластоцисты, и культивировали в иден-
тичных условиях, но без добавления ткани эндометрия.
Образцы эндометрия получены методом пайпель-биопсии
в случае 1 на 14-й день цикла (день трансвагинальной
пункции фолликулов), в случае 2 — на 21-й день цик-
ла (день подтверждения овуляции, по данным ультра-
звуковой фолликулометрии). В обоих описанных случаях
и при контроле проводили индивидуальное культивиро-
вание эмбрионов.
На 14-й день развития эмбрионы и фрагменты эндо-
метрия сначала оценивали под инвертированным микро-
скопом с использованием модуляционного контраста
Хоффмана, затем переносили в специальную форму
и заливали парафином при температуре 66 °C на прибо-
ре модульной системы заливки TES 99 (Medite, Германия)
для приготовления цитоблоков. Из полученных блоков
изго тавливали срезы толщиной 2–3 мкм на микротоме
Rotary 3002 (PFM, Германия) и окрашивали их гематокси-
лином и эози ном (БиоВитрум, Россия). Исследование про-
водили на микроскопе Olympus CX31 (Япония).

DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
16 ORIGINAL RESEARCH Vol. 71 (4) 2022 Journal of Obstetrics and Women’s Diseases
РЕЗУЛЬТАТЫ
Случай 1
При визуальной оценке на 14-й день культивирова-
ния в питательной среде с эндометрием зафиксирован
жизнеспособный развивающийся эмбрион без признаков
деградации (рис. 1).
При гистологическом исследовании фрагмент эндо-
метрия соответствовал секреторной фазе цикла. Строма
представлена фибробластами с тонким ободком цитоплаз-
мы, наличием умеренно выраженного отека, моноцитами
и мелкоочаговыми кровоизлияниями. Железы эндометрия
извитые, эпителий высокий призматический со слабо вы-
раженной апокриновой секрецией. Ядра эпителиальных
клеток желез округло-овальной формы с гиперхромией
и компактным расположением хроматина (рис. 2). Следует
отметить, что при культивировании фрагмент эндометрия
сохраняет гистогенетические структуры — железу и строму.
При морфологической оценке 14-дневного концепту-
са детектированы клетки трофобласта, расположенные
компактно, округло-овальной формы с неравномерным
распределением хроматина в ядрах (рис. 3).
Случай 2
При визуальной оценке на 14-й день культивирования
в питательной среде с эндометрием зафиксирован жиз-
неспособный эмбрион без признаков деградации, находя-
щийся в непосредственном контакте с эндометриальным
компонентом (рис. 4).
При морфологической оценке концептуса визуализи-
рован контакт клеток трофобласта с эндометрием. По дан-
ным гистологического исследования, визуализируется
фрагмент поверхностного (люминального) эпителия секре-
торного эндометрия со слабо выраженными апикальными
выростами (пиноподиями) (рис. 5). При морфологической
оценке эмбриона визуализируются клетки трофобласта со
светлыми пузырьковидными ядрами (рис. 6).
Рис. 1. Рельефное микроскопическое изображение эмбриона
на 14-й день культивирования, увеличение ×450
Fig. 1. Relief microscopic image of the embryo on day 14 of culti-
vation, zoom ×450
Рис. 4. Рельефное микроскопическое изображение эмбриона
в контакте с эндометриальной тканью на 14-й день культиви-
рования, увеличение ×450
Fig. 4. Relief microscopic image of the embryo in contact with the
endometrial tissue on day 14 of cultivation, zoom ×450
Рис. 2. Эндометрий секреторного типа, окраска гематоксилином
и эозином, увеличение ×400
Fig. 2. Secretory endometrium. Hematoxylin-eosin stain, zoom ×400
50 мкм / 50 µm
Рис. 3. Эмбрион на 14-й день культивирования, окраска гема-
токсилином и эозином, увеличение ×600
Fig. 3. The embryo on day 14 of cultivation. Hematoxylin-eosin
stain, zoom ×600
50 мкм / 50 µm

DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
17
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Том 71, № 4, 2022 Журнал акушерства и женских болезней
ОБСУЖДЕНИЕ
Полученные данные свидетельствуют о возможности
реализации продленного культивирования эмбрионов че-
ловека в условиях in vitro в питательной среде, предна-
значенной для культивирования до стадии бластоцисты,
в присутствии гетерологичного эндометрия. Эмбрион, со-
культивируемый с эндометрием, сохраняет жизнеспособ-
ность и потенциал к развитию в отличие от эмбрионов,
культивируемых в идентичной питательной среде без эн-
дометриального компонента.
Сокультивирование эмбриона с монослоем клеток
эндо метрия представляет собой достаточно часто исполь-
зуемую модель для изучения имплантации. С помощью
подобной модели была показана роль стромы как био-
сенсора качества эмбрионов [11, 12]. У человека клетки
стромы эндометрия по-разному отвечают на сокульти-
вирование с нормальными эмбрионами и эмбрионами
низкого качества (замершими в развитии или с высоким
процентом фрагментации), что отражается на миграции,
экспрессии или секреции стромы. Это означает, что стро-
ма играет роль биосенсора, чувствительного к качеству
имплантируемого эмбриона, а не является пассивным суб-
стратом для внедрения [13].
По итогам сокультивирования эмбриона с эндо-
метрием описана секреторная трансформация эндомет-
рия, полученного на 14-й день менструального цик-
ла (день трансвагинальной пункции фолликулов),
что, возможно, связано или с гиперергическим харак-
тером овариального ответа на стимуляцию или с влия-
нием эмбриона.
Следует отметить, что при длительном сокультивиро-
вании в питательной среде, предназначенной для культи-
вирования до стадии бластоцисты, эндометрий сохранил
свою гистогенетическую структуру. Для моделирования
имплантации эмбриона важен тип субстрата, а именно его
жесткость — предположительно важный механический
сигнал, влияющий на развитие эмбриона in vivo [14, 15].
Эмбрион участвует в процессе имплантации наравне
с клетками эндометрия матки. Таким образом, представ-
ленная в иссле довании модель может быть использована
для оценки рецептивности эндометрия, что, несомненно,
будет иметь важное значение для развития вспомогатель-
ных репродуктивных технологий, в частности, при под-
готовке эндометрия в криопротоколах для повышения
частоты имплантации.
Кроме того, эксперименты по продленному куль-
тивированию эмбрионов человека могут внести вклад
как в понимание раннего эмбриогенеза человека,
а именно процесса имплантации и постимплантаци-
онных стадий развития, так и в решение проблемы
ранних репродуктивных потерь. Например, показано,
что вероятность естественной имплантации у человека
составляет около 25 % на менструальный цикл [15–17].
Сокультивирование эмбрионов с эндометрием может
быть использовано как экспериментальная модель
для изуче ния межклеточных взаимодействий, а также
станет важным этапом разработки новых культураль-
ных сред, созданных с учетом потребностей развива-
ющегося эмбрио на при продленном культивировании
in vitrо.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты исследования свидетельствуют о способно-
сти эмбриона к дальнейшему развитию с 6-го дня (со ста-
дии бластоцисты) до 14-го дня развития в питательной
среде, предназначенной для культивирования до стадии
бластоцисты, в присутствии эндометриального компонен-
та. Таким образом, сокультивирование эмбрио нов с эндо-
метрием может служить экспериментальной моделью
как для оценки рецептивности эндометрия in vitro, так
и для изучения межклеточных взаимодействий в процес-
се имплантации.
Рис. 5. Секреторный эндометрий (поверхностный эпителий),
окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400
Fig. 5. Secretory endometrium (surface epithelium). Hematoxylin-
eosin stain, zoom ×400
50 мкм / 50 µm
Рис. 6. Эмбрион 14-го дня культивирования, окраска гематок-
силином и эозином, увеличение ×400
Fig. 6. The embryo on day 14 of cultivation. Hematoxylin-eosin
stain, zoom ×400
50 мкм / 50 µm

DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
18 ORIGINAL RESEARCH Vol. 71 (4) 2022 Journal of Obstetrics and Women’s Diseases
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
Источник финансирования. Исследование выполнено
без использования спонсорских средств и финансового обеспе-
чения.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных
и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публика-
цией настоящей статьи.
Вклад авторов. О.Н. Беспалова, И.Ю. Коган, Е.Н. Комарова,
Е.А. Лесик, Г.Х. Толибова, Т.Г. Траль, В.А. Загайнова, К.В. Объ-
едкова, А.М. Гзгзян — формирование обзора литературы,
цели исследования, редактирование текста, подготовка ма-
териалов для публикации; Е.Н. Комарова, Е.А. Лесик, Г.Х. То-
либова, Т.Г. Траль, В.А. Загайнова, К.В. Объедкова — участие
в подготовке материала для исследования; Е.Н. Комарова,
Е.А. Лесик — выполнение эмбриологического этапа; Г.Х. То-
либова, Т.Г. Траль — выполнение гистологического исследо-
вания.
Все авторы внесли существенный вклад в проведение
исследования и подготовку статьи, пpoчли и одобрили
финальную версию перед публикацией.
ADDITIONAL INFORMATION
Funding. The study had no external funding.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of in terest.
Author contributions. O.N. Bespalova, I.Yu. Kogan, E.M. Koma-
rova, E.A. Lesik, G.Kh. Tolibova, T.G. Tral, V.A. Zagaynova, K.V. Obyed-
kova, A.M. Gzgzyan — drafting of the literature review and the
aim of the study, text editing, content generation for publication;
E.M. Komarova, E.A. Lesik, G.Kh. Tolibova, T.G. Tral, V.A. Zagaynova,
K.V. Obyedkova — preparation of study material; E.M. Komarova,
E.A. Lesik— completion of the embryological step; G.Kh. Tolibova,
T.G. Tral — accomplishment of the histological investigation.
All authors made a significant contribution to the study and the
article preparation, as well as read and approved the final version
before its publication.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Evans J., Walker K.J., Bilandzic M., et al. A novel “embryo-endo-
metrial” adhesion model can potentially predict “receptive” or “non-
receptive” endometrium // J. Assist. Reprod. Genet. 2020. Vol. 37.
No.1. P.5–16. DOI: 10.1007/s10815-019-01629-0
2. You Y., Stelzl P., Zhang Y., et al. Novel 3D in vitro models to evalu-
ate trophoblast migration and invasion // Am. J. Reprod. Immunol.
2019. Vol.81. No.3. P.e13076. DOI: 10.1111/aji.13076
3. Berneau S.C., Ruane P.T., Brison D.R., Kimber S.J.,
et al. Characterisation of osteopontin in an in vitro model
of embryo implantation // Cells. 2019. Vol. 8. No. 5. P. 432.
DOI: 10.3390/cells8050432
4. Zambuto S.G., Clancy K.B.H., Harley B.A.C. A gelatin hydrogel to
study endometrial angiogenesis and trophoblast invasion //Interface
Focus.2019. Vol.9. No.5. P.20190016. DOI: 10.1098/rsfs.2019.0016
5. Stern-Tal D., Achache H., Jacobs Catane L., Reich R., Tavor
Re’em T. Novel 3D embryo implantation model within macro-
porous alginate scaffolds // J. Biol. Eng. 2020. Vol. 14. P. 18.
DOI: 10.1186/s13036-020-00240-7
6. ISSCR. Guidelines for the Conduct of Human Embryonic Stem Cell
Research. 2006. Version 1: December 21, 2006. [дата обращения:
15.08.2022]. Доступ по ссылке: https://www.isscr.org/docs/de-
fault-source/all-isscr-guidelines/hesc-guidelines/isscrhescguide-
lines2006.pdf?sfvrsn=0
7. ISSCR. Guidelines for Stem Cell Research and Clinical Trans-
lation update. 2021. Version 1.0, May, 2021. [дата обращения:
15.08.2022]. Доступ по ссылке: https://www.isscr.org/docs/de-
fault-source/all-isscr-guidelines/2021-guidelines/isscr-guidelines-
for-stem-cell-research-and-clinical-translation-2021.pdf?sfvrsn=
979d58b1_4
8. Pera M.F., de Wert G., Dondorp W., et al. What if stem cells
turn into embryos in a dish?// Nat. Methods. 2015. Vol. 12. No.10.
P.917–919. DOI: 10.1038/nmeth.3586
9. Shahbazi M.N., Jedrusik A., Vuoristo S., et al. Self-orga-
nisation of the human embryo in the absence of mater-
nal tissues // Nat. Cell Biol. 2016. Vol. 18. No. 6. P. 700–708.
DOI: 10.1038/ncb3347
10. Deglincerti A., Croft G.F., Pietila L.N., et al. Self-organization of the
in vitro attached human embryo// Nature. 2016. Vol.533. P.251–254.
DOI: 10.1038/nature17948
11. Teklenburg G., Salker M., Molokhia M., et al. Natural selection
of human embryos: Decidualizing endometrial stromal cells serve
as sensors of embryo quality upon implantation// PLoS One. 2010.
Vol.5. No.4. P.2–7. DOI: 10.1371/journal.pone.0010258
12. Brosens J.J., Salker M.S., Teklenburg G., et al. Uterine selection
of human embryos at implantation// Sci. Rep. 2014. Vol.4. P. 4–11.
DOI: 10.1038/srep03894
13. Измайлова Л.Ш., Воротеляк Е.А., Васильев А.В. Моде-
лирование раннего развития эмбрионов мыши и человека
in vitro// Онтогенез. 2020. Т.51. №5. С.323–337. DOI: 10.31857/
S0475145020050043
14. Kolahi K.S., Donjacour A., Xiaowei L., et al. Effect of substrate
stiffness on early mouse embryo development // PLoS One. 2012.
Vol.7. No.7. P.e41717. DOI: 10.1371/journal.pone.0041717
15. Hiramatsu R., Matsuoka T., Kimura-Yoshida C., et al. External me-
chanical cues trigger the establishment of the anterior-posterior axis
in early mouse embryos// Dev. Cell. 2013. Vol.27. No. 2. P.131–144.
DOI: 10.1016/j.devcel.2013.09.026
16. Koot Y.E.М, Teklenburg G., Salker M.S., et al. Molecular aspects of
implantation failure// Biochim. Biophys. Acta. 2012. Vol.1822. No.12.
P.1943–1950. DOI: 10.1016/j.bbadis.2012.05.017
17. Weimar C.H., Post Uiterweer E.D., Teklenburg G., et al. In-vitro
model systems for the study of human embryo-endometrium in-
teractions // Reprod. BioMed. Online. 2013. Vol.27. No.5. P.461–476.
DOI: 10.1016/j.rbmo.2013.08.002
Убрали повторы. Проверьте, пожалуйста

DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
19
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Том 71, № 4, 2022 Журнал акушерства и женских болезней
REFERENCES
1. Evans J, Walker KJ, Bilandzic M, et al. A novel “embryo-endo-
metrial” adhesion model can potentially predict “receptive” or “non-
receptive” endometrium. J Assist Reprod Genet. 2020;37(1):5–16.
DOI: 10.1007/s10815-019-01629-0
2. You Y, Stelzl P, Zhang Y, et al. Novel 3D in vitro models to evalu-
ate trophoblast migration and invasion. Am J Reprod Immunol.
2019;81(3):e13076. DOI: 10.1111/aji.13076
3. Berneau SC, Ruane PT, Brison DR, et al. Characterisation of
osteopontin in an in vitro model of embryo implantation. Cells.
2019;8(5):432. DOI: 10.3390/cells8050432
4. Zambuto SG, Clancy KBH, Harley BAC. A gelatin hydrogel to study
endometrial angiogenesis and trophoblast invasion. Interface Focus.
2019;9(5):20190016. DOI: 10.1098/rsfs.2019.0016
5. Stern-Tal D, Achache H, Jacobs Catane L, et al. Novel 3D embryo
implantation model within macroporous alginate scaffolds. J Biol
Eng. 2020;14:18. DOI: 10.1186/s13036-020-00240-7
6. ISSCR. Guidelines for the Conduct of Human Embryonic Stem
Cell Research. 2006. Version 1: December 21, 2006. [cited 2022
Aug15]. Available from: https://www.isscr.org/docs/default-source/
all-isscr-guidelines/hesc-guidelines/isscrhescguidelines2006.
pdf?sfvrsn=0
7. ISSCR. Guidelines for Stem Cell Research and Clinical Trans-
lation update. 2021. Version 1.0, May, 2021. [cited 2022 Aug 15].
Available from: https://www.isscr.org/docs/default-source/all-
isscr-guidelines/2021-guidelines/isscr-guidelines-for-stem-cell-
research-and-clinical-translation-2021.pdf?sfvrsn=979d58b1_4
8. Pera MF, de Wert G, Dondorp W, et al. What if stem cells
turn into embryos in a dish? Nat Methods. 2015;12(10):917–919.
DOI: 10.1038/nmeth.3586
9. Shahbazi MN, Jedrusik A, Vuoristo S, et al. Self-organisation of
the human embryo in the absence of maternal tissues. Nat Cell Biol.
2016;18(6):700–708. DOI: 10.1038/ncb3347
10. Deglincerti A, Croft GF, Pietila LN, et al. Self-organization of
the in vitro attached human embryo. Nature. 2016;533:251–254.
DOI: 10.1038/nature17948
11. Teklenburg G, Salker M, Molokhia M, et al. Natural selection of
human embryos: Decidualizing endometrial stromal cells serve as
sensors of embryo quality upon implantation. PLoS One. 2010;5(4):2–7.
DOI: 10.1371/journal.pone.0010258
12. Brosens JJ, Salker MS, Teklenburg G, et al. Uterine selection of human
embryos at implantation. Sci Rep. 2014;4:4–11. DOI: 10.1038/srep03894
13. Izmailova LSh, Vorotelyak EA, Vasiliev AV. Modeling of early
development of mouse and human embryos in vitro. Ontogenez.
2020;51(5):323–337. (In Russ.). DOI: 10.31857/S0475145020050043
14. Kolahi KS, Donjacour A, Xiaowei L, et al. Effect of substrate stiff-
ness on early mouse embryo development. PLoS One. 2012;7(7):e41717.
DOI: 10.1371/journal.pone.0041717
15. Hiramatsu R, Matsuoka T, Kimura-Yoshida C, et al. External
mechanical cues trigger the establishment of the anterior-pos-
terior axis in early mouse embryos. Dev Cell. 2013;27(2):131–144.
DOI: 10.1016/j.devcel.2013.09.026
16. Koot YEМ, Teklenburg G, Salker MS, et al. Molecular aspects of
implantation failure. Biochim Biophys Acta. 2012;1822(12):1943–1950.
DOI: 10.1016/j.bbadis.2012.05.017
17. Weimar CH, Post Uiterweer ED, Teklenburg G, et al. In-vitro
model systems for the study of human embryo-endometri-
um interactions. Reprod BioMed Online. 2013;27(5):461–476.
DOI: 10.1016/j.rbmo.2013.08.002
ОБ АВТОРАХ AUTHORS INFO
Олеся Николаевна Беспалова, д-р мед. наук;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6542-5953;
eLibrary SPIN: 4732-8089;
ResearcherID: D-3880-2018;
e-mail: shiggerra@mail.ru
Olesya N. Bespalova, MD, Dr. Sci. (Med.);
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6542-5953;
eLibrary SPIN: 4732-8089;
ResearcherID: D-3880-2018;
e-mail: shiggerra@mail.ru
Игорь Юрьевич Коган, д-р мед. наук,
профессор, чл.-корр. РАН;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7351-6900;
Scopus Author ID: 56895765600;
eLibrary SPIN: 6572-6450;
e-mail: ikogan@mail.ru
Igor Yu. Kogan, MD, Dr. Sci. (Med.), Professor,
Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7351-6900;
Scopus Author ID: 56895765600;
eLibrary SPIN: 6572-6450;
e-mail: ikogan@mail.ru
Евгения Михайловна Комарова, канд. биол. наук;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9988-9879;
eLibrary SPIN: 1056-7821;
e-mail: evgmkomarova@gmail.com
Evgenia M. Komarova, Cand. Sci. (Biol.);
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9988-9879;
eLibrary SPIN: 1056-7821;
e-mail: evgmkomarova@gmail.com
Елена Александровна Лесик, канд. биол. наук;
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-1611-6318;
eLibrary SPIN: 6102-4690;
e-mail: lesike@yandex.ru
Elena A. Lesik, Cand. Sci. (Biol.);
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-1611-6318;
eLibrary SPIN: 6102-4690;
e-mail: lesike@yandex.ru

DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD109215
20 ORIGINAL RESEARCH Vol. 71 (4) 2022 Journal of Obstetrics and Women’s Diseases
ОБ АВТОРАХ AUTHORS INFO
Гулрухсор Хайбуллоевна Толибова, д-р мед. наук;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6216-6220;
Scopus Author ID: 23111355700;
ResearcherId: Y-6671-2018;
eLibrary SPIN: 7544-4825;
e-mail: gulyatolibova@yandex.ru
Gulrukhsor Kh. Tolibova, MD, Dr. Sci. (Med.);
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6216-6220;
Scopus Author ID: 23111355700;
ResearcherId: Y-6671-2018;
eLibrary SPIN: 7544-4825;
e-mail: gulyatolibova@yandex.ru
Татьяна Георгиевна Траль, канд. мед. наук;
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8948-4811;
Scopus Author ID: 37666260400;
eLibrary SPIN: 1244-9631;
e-mail: ttg.tral@yandex.ru
Tatyana G. Tral, MD, Cand. Sci. (Med.);
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8948-4811;
Scopus Author ID: 37666260400;
eLibrary SPIN: 1244-9631;
e-mail: ttg.tral@yandex.ru
Валерия Алексеевна Загайнова;
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-6971-7024;
Scopus Author ID: 57222615411;
eLibrary SPIN: 7409-4944;
e-mail: zagaynovav.al.52@mail.ru
Valeria A. Zagaynova, MD;
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-6971-7024;
Scopus Author ID: 57222615411;
eLibrary SPIN: 7409-4944;
e-mail: zagaynovav.al.52@mail.ru
Ксения Владимировна Объедкова, канд. мед. наук;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2056-7907;
Scopus Author ID: 57201161145;
ResearcherID: A-7258-2019;
eLibrary SPIN: 2709-2890;
e-mail: obedkova_ks@mail.ru
Ksenia V. Obyedkova, MD, Cand. Sci. (Med.);
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2056-7907;
Scopus Author ID: 57201161145;
ResearcherID: A-7258-2019;
eLibrary SPIN: 2709-2890;
e-mail: obedkova_ks@mail.ru
* Александр Мкртичевич Гзгзян, д-р мед. наук, профессор;
адрес: Россия, 199034, Санкт-Петербург,
Менделеевская линия, д. 3;
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3917-9493;
ResearcherID: G-7814-2015;
eLibrary SPIN: 6412-4801;
e-mail: agzgzyan@gmail.com
* Alexandr M. Gzgzyan, MD, Dr. Sci. (Med.), Professor;
address: 3 Mendeleevskaya Line, Saint Petersburg,
199034, Russia;
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3917-9493;
ResearcherID: G-7814-2015;
eLibrary SPIN: 6412-4801;
e-mail: agzgzyan@gmail.com
* Автор, ответственный за переписку / Corresponding author