Content uploaded by O. D. Nekrasova
Author content
All content in this area was uploaded by O. D. Nekrasova on Aug 13, 2016
Content may be subject to copyright.
Sci. Bull. Uzhgorod Univ. (Ser. Biol.), 2007. Vol. 21 79
Науковий вісник Ужгородського університету
Серія Біологія, Випуск 21, 2007: 79–84
© Межжерін С. В., та ін., 2007
ГЕРПЕТОЛОГІЯ
УДК 575.1:597.828
ЭВОЛЮЦИОННО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
ПОЛУКЛОНАЛЬНОГО ВОСПРОИЗВОДСТВА
ГИБРИДНОЙ ФОРМЫ RANA KL. ESCULENTA (AMPHIBIA, RANIDAE)
С. В. Межжерин, С. Ю. Морозов-Леонов, О. Д. Некрасова, Ф. Ф. Куртяк,
Д. А. Шабанов, А. В. Коршунов
Эволюционно-генетические аспекты полуклонального воспроизводства гибридной формы Rana kl. esculenta
(Amphibia, Ranidae). — С. В. Межжерин1, С. Ю. Морозов-Леонов1, О. Д. Некрасова1, Ф. Ф. Куртяк2, Д. А. Шабанов3,
А. В. Коршунов4. — Изучена изменчивость гена Ldh-B зеленых лягушек рода Rana: гибридной формы Rana kl.
esculenta и родительского вида – озерной лягушки Rana ridibunda. Показано снижение уровня наследствен-
ной изменчивости гибридной формы сравнительно с родительским видом. Причиной этого предполагает-
ся полуклональное воспроизводство гибридной формы рекомбинации при мейозе.
Ключевые слова: полуклональное наследование, мейоз, Rana kl. esculenta, гетерозиготность
Адреса: 1 Институт зоологии НАН Украины, ул. Б. Хмельницкого, 15, Киев-30, ГСП, 01601 Украина; e-mail: mor-
leone2000@hotmail.com; 2 Ужгородский национальный университет, ул. Волошина, 32, Ужгород, 88000 Украина,
e-mail: kurtyak@bk.ru; 3 Биологический факультет Харьковского национального университета
им. В.Н. Каразина, пл. Свободы, 4, Харьков, 61077, Украина, e-mail: d_sh@list.ru; 4НИИ Биологии Харь-
ковского национального университета им. В.Н. Каразина, пл. Свободы, 4, Харьков, 61077, Украина,
e-mail: alexey_korshunov@list.ru.
Evolutionary genetic aspects of the hybrid form Rana kl. esculenta (Amphibia, Ranidae) hemiclonal reproduction. —
S. V. Mezhzherin1, S. Yu. Morozov-Leonov1, O. D. Nekrasova1, F. F. Kurtyak2, D. A. Shabanov3, A. V. Korshunov4 —
The Ldh-B gene variation was studied within the green frogs genus Rana: the hybrid form Rana kl. esculenta
and the parental species – marsh frog Rana ridibunda. The decreasing of the heritable variation level within the
hybrid form comparatively to the parental species was shown. The cause of it is assumed to be the hybrid form
hemiclonal reproduction without the recombination.
Keywords: hemiclonal inheritance, meiosis, Rana kl. esculenta, heterozygosity
Address: 1 Institute of zoology NAN of Ukraine, B. Khmelnitsky st., 15, Kiev-30, GSP, 01601 Ukraine, e-mail:
morleone2000@hotmail.com; 2 Uzhgorod national Univerity, Voloshin st., 32, Uzhgorod, 88000 Ukraine, e-mail:
kurtyak@bk.ru; 3 Biology Department of V.N. Karazins` Kharkiv National University, Svobody sq., 4, Kharkiv,
61077, Ukraine, e-mail: d_sh@list.ru; 4 Biology Institute of V.N. Karazins` Kharkiv National University, Svobody
sq., 4, Kharkiv, 61077, Ukraine, e-mail: alexey_korshunov@list.ru.
Введение
Целью нашего исследования была оценка эволюци-
онно-генетических эффектов такого необычного
способа воспроизводства, как полуклональное на-
следование. В настоящее время существует множе-
ство фактов, указывающих на первостепенное эво-
люционное значение рекомбинации при половом
процессе [1, 2]. Мейотическое деление (включаю-
щее кроссинговер) является основным фактором,
порождающим и/или поддерживающим генетиче-
скую изменчивость. Последняя является матери-
альной основой эволюционного потенциала. Таким
образом, биологические таксоны, воспроизводя-
щиеся без нормального мейоза, являются весьма
перспективной моделью для оценки эволюционных
преимуществ полового размножения. Снижение
уровня наследственной изменчивости в случае об-
наружения его у асексуальных форм может быть
критерием утраты эволюционного потенциала. Од-
ним из вариантов воспроизводства без рекомбина-
ции является полуклональное размножение, извест-
ное к настоящему времени для межвидовых гибри-
дов у некоторых насекомых [3], рыб [4, 5], а также и
для зеленых лягушек рода Rana [6]. Суть полукло-
нального воспроизводства состоит в наследовании
лишь одного из родительских геномов. Гибридный
генотип потомства в каждом поколении воссоздает-
ся заново за счет возвратных скрещиваний с роди-
тельским видом, чей геном не наследуется. Поэтому
фактически наследуются гаплоидные генотипы од-
ного из родительских видов. Сравнение уровня из-
менчивости наследуемого генома в норме и при по-
луклональном воспроизводстве позволит оценить
Sci. Bull. Uzhgorod Univ. (Ser. Biol.), 2007. Vol. 21 80
скорость потери изменчивости в отсутствие нор-
мального полового процесса, сопровождающего ге-
нетической рекомбинацией.
Съедобная лягушка Rana kl. esculenta была вы-
брана нами в качестве объекта для проведения по-
добного исследования. Известно, что съедобная
лягушка является гибридом между прудовой Rana
lessonae и озерной Rana ridibunda лягушками [7].
Характерной особенностью Rana kl. esculenta яв-
ляется как раз полуклональное наследование, при
котором наследуется лишь один целостный роди-
тельский геном (в данном случае в этой роли вы-
ступает геном озерной лягушки) [8]. Рекомбина-
ция родительских геномов у Rana kl. esculenta
происходит лишь в популяциях бассейна Днепра и
затрагивает преимущественно ген Ldh-B [9]. Эта
особенность позволяет выделить внутри гибрид-
ной формы особей, гибридных по всем диагности-
ческим генам (в том числе и гибридов F1), и ре-
комбинантов (заведомо не являющихся гибридами
F1). Таким образом можно не только оценить
ожидаемое снижение уровня генетической измен-
чивости у гибридов в целом, но и степень ее сни-
жения в ходе многократного полуклонального во-
спроизводства.
Материалы и методы
Нами были проанализированы 65 выборок зеле-
ных лягушек из 4 разных водосборных бассейнов
Украины (Тиса, Днестр, Днепр и Северский До-
нец). Локализация выборок показана на рис. 1.
Выборки объемом менее 5 животных не анализи-
ровались. Лягушки живьем перевозились в лабо-
раторию, где анестезировались и умерщвлялись
для приготовления проб. Методика приготовления
проб и проведения электрофореза была описана
ранее [10]. Видовой состав каждой выборки был
описан с использованием традиционных обозна-
чений. Так, сокращение LER обозначало выборку,
состоящую из трех генетических форм: R. lessonae
(L), R. kl. esculenta (E) и R. ridibunda (R) и т.д.
Идентификация видовой принадлежности была
проведена на основе электрофоретического анали-
за диагностических генов. Были проанализирова-
ны гены, диагностичность которых известна: гены,
кодирующие В-субъединицу лактатдегидрогеназы
(Ldh-B), митохондриальную форму аспартатами-
нотрансферазы (mAat), альбумин (Alb), эстеразу
(Es-5) [10]. В качестве меры уровня наследствен-
ной изменчивости была выбрана ожидаемая гете-
розиготность (Hexp). Для вычисления ожидаемой
гетерозиготности был использован ген Ldh-B по
причине легкой идентификации генотипов и высо-
кого уровня полиморфизма в украинских популя-
циях Rana ridibunda [11]. Аллотриплоиды, обна-
руженные в бассейне Северского Донца как ранее
[12], так и в ходе выполнения данного исследова-
ния, не учитывались.
Результаты
Видовой состав гибридных популяций. Популяции
E-типа обнаружены только в бассейне Тисы (За-
карпатье). Популяции, содержащие оба родитель-
ских вида (LER), найдены в бассейнах Днестра и
Днепра. Популяции LE-типа отсутствуют в бас-
сейне Северского Донца, а популяции ER-типа ра-
спространены повсеместно (табл. 1).
Генетические формы зеленых лягушек. Гиб-
ридные лягушки представлены двумя генотипиче-
скими классами (табл. 1). Во-первых, во всех во-
досборных бассейнах обитают лягушки, гибрид-
ные по всем диагностическим генам (гибриды-
аллодиплоиды). Во-вторых, только в бассейне
Днепра обнаружены особи, гибридные по всем ди-
агностическим генам, кроме Ldh-B (гибриды-
рекомбинанты).
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-
B озерной лягушки у разных генетических форм.
Различия уровня изменчивости гена Ldh-B между
генетическими формами достоверны (рис. 2). Hexp
для озерной лягушки равна 0,371±0,011, для алло-
диплоидов 0,286±0,016 и для рекомбинантов всего
0,028±0,014, т.е. значения ожидаемой гетерозигот-
ности соотносятся как 13 : 10 : 1 (P<0,001).
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-
B озерной лягушки в разных водосборных бассей-
нах. Значения ожидаемой гетерозиготности гена
Ldh-B у аллодиплоидов обнаруживают межбас-
сейновые различия (рис. 3): Hexp низка в популя-
циях бассейнов Тисы, Днестра и Днепра (0,14–
0,25) и достоверно выше в популяциях Северского
Донца (0,55) (P<0,01). В популяциях из этого бас-
сейна значения Hexp для аллодиплоидов
(0,55±0,11) и озерной лягушки (0,60±0,03) не пока-
зывают различий. В прочих водосборных бассей-
нах значения этого показателя достоверно
(P<0,001) ниже для аллодиплоидов, нежели для
озерной лягушки.
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-
B озерной лягушки в популяциях разных типов.
Уровень изменчивости гена Ldh-B у аллодиплои-
дов зависит от наличия в популяции особей роди-
тельского вида (рис. 4). В популяциях, где озерная
лягушка отсутствует (E, LE), Hexp ниже (0,14-
0,15), нежели в популяциях, где озерная лягушка
обнаружена (LER, ER) (0,21-0,29). При этом раз-
личия между популяциями из этих двух групп не-
достоверны при сравнении E и LER (F=2,97,
P>0,05). Между E и ER, LE и ER, LE и LER разли-
чия достоверны (P<0,05-0,001). В популяциях, со-
держащих озерную лягушку, Hexp у гибридов дос-
товерно (P<0,001) ниже таковой у родительского
вида.
Sci. Bull. Uzhgorod Univ. (Ser. Biol.), 2007. Vol. 21 81
Таблица 1. Значения ожидаемой гетерозиготности гена Ldh-B Rana ridibunda
у трех генетических форм зеленых лягушек Украины
Генетическая форма
R. esculenta рекомб. R. esculenta аллодипл. Rana ridibunda
Тип популяции
M m n M m n M m n
N
Бассейн Тисы
E – –
0 0,15 0,03
197 – –
0 5
LE – –
0 0,04 0,03 44 – –
0 1
LER – –
0 – –
0 – –
0 0
ER – –
0 0,21 0,06 48 0,46 0,05 100 7
Суммарно – –
0 0,14 0,02
289 0,46 0,05 100 13
Бассейн Днестра
E – –
0 – –
0 – –
0 0
LE – –
0 0,21 0,10 17 – –
0 2
LER – –
0 0,42 0,16 10 0,38 0,24 4 1
ER – –
0 0,00 0,00 3 0,63 0,07 52 1
Суммарно – –
0 0,25 0,07 37 0,61 0,07 56 4
Бассейн Днепра
E – –
0 – –
0 – –
0 0
LE 0,00 0,00
62 0,17 0,03
122 – –
0 8
LER 0,06 0,03
64 0,21 0,03
254 0,34 0,01
1082 19
ER 0,00 0,00
17 0,28 0,04
117 0,28 0,02 426 15
Суммарно 0,03 0,01
143 0,21 0,02
493 0,32 0,01
1508 42
Бассейн Донца
E – –
0 – –
0 – –
0 0
LE – –
0 – –
0 – –
0 0
LER – –
0 – –
0 – –
0 0
ER – –
0 0,55 0,11 21 0,60 0,03 206 6
Суммарно – –
0 0,55 0,11 21 0,60 0,03 206 6
Украина в целом
E – –
0 0,15 0,03
197 – –
0 5
LE 0,00 0,00
62 0,14 0,03
190 – –
0 11
LER 0,06 0,03
64 0,21 0,03
264 0,34 0,01
1086 20
ER 0,00 0,00
17 0,29 0,03
189 0,41 0,02 784 29
Суммарно 0,03 0,01
143 0,29 0,02
840 0,37 0,01
1870 65
Примечание: n – число животных, N – количество выборок.
Обсуждение
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-B
озерной лягушки у разных генетических форм.
Существуют два объяснения снижения уровня из-
менчивости гена Ldh-B у гибридной формы срав-
нительно с родительским видом. Во-первых, в ре-
зультате действия отбора возможна селективная
гибель гибридных особей, что приводит к умень-
шению генетического разнообразия выживших.
Во-вторых, не исключено, что в производстве гиб-
ридов участвуют далеко не все особи родительско-
го вида. Точно так же можно объяснить практиче-
ски нулевую изменчивость гена Ldh-B у гибридов-
рекомбинантов.
Sci. Bull. Uzhgorod Univ. (Ser. Biol.), 2007. Vol. 21 82
Рис. 1. Локализация выборок зеленых лягушек (объяснение в тексте)
0,37
0,29
0,03
0,00
0,10
0,20
0,30
0,40
0,50
Озерная лягушка Аллодиплоиды Рекомбинанты
Генотипические классы особей
Ожидаемая гетерозиготность
Рис. 2. Уровень изменчивости гена Ldh-B озерной лягушки в украинских популяциях
Sci. Bull. Uzhgorod Univ. (Ser. Biol.), 2007. Vol. 21 83
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
Тиса Днестр Днепр Донец
Водосборные бассейны
Ожидаемая гетерозиготность
Рекомбинанты Аллодиплоиды Озерная лягушка
Рис. 3. Уровень наследственной изменчивости гена Ldh-B озерной лягушки в водосборных бассейнах
Украины
0,00
0,10
0,20
0,30
0,40
0,50
E LE LER ER
Видовой состав
Hexp
Рекомбинанты Аллодиплоиды Озерная лягушка
Рис. 4. Ожидаемая гетерозиготность (Hexp) гена Ldh-B озерной лягушки на Украине
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-B
озерной лягушки у разных генетических форм. Ра-
зличия уровня изменчивости гена Ldh-B между
генетическими формами достоверны (рис. 2). Hexp
для озерной лягушки равна 0,371±0,011, для алло-
диплоидов 0,286±0,016 и для рекомбинантов всего
0,028±0,014, т.е. значения ожидаемой гетерозигот-
ности соотносятся как 13 : 10 : 1 (P<0,001).
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-
B озерной лягушки в разных водосборных бассей-
нах. Значения ожидаемой гетерозиготности гена
Ldh-B у аллодиплоидов обнаруживают межбас-
сейновые различия (рис. 3): Hexp низка в популя-
циях бассейнов Тисы, Днестра и Днепра (0,14-
0,25) и достоверно выше в популяциях Северского
Донца (0,55) (P<0,01). В популяциях из этого бас-
сейна значения Hexp для аллодиплоидов
(0,55±0,11) и озерной лягушки (0,60±0,03) не пока-
зывают различий. В прочих водосборных бассей-
нах значения этого показателя достоверно
(P<0,001) ниже для аллодиплоидов, нежели для
озерной лягушки.
Уровень изменчивости гена Ldh-B у аллодип-
лоидов зависит от наличия в популяции особей
родительского вида (рис. 4).
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-
B озерной лягушки в разных водосборных бассей-
нах. Сравнение зеленых лягушек из разных бас-
сейнов показывает необычность состава популя-
ционных систем зеленых лягушек в среднем тече-
Sci. Bull. Uzhgorod Univ. (Ser. Biol.), 2007. Vol. 21 84
нии Северского Донца [14], где зарегистрированы
как гибриды, полуклонально передающие геном R.
lessonae, так и триплоидные гибриды.
Уровень генетической изменчивости гена Ldh-
B озерной лягушки в популяциях разных типов.
Анализ количественного видового состава гиб-
ридных популяций, проделанный нами ранее [13],
показал, что между популяциями E и LE, а также
между ER и LER типов не существует достовер-
ных разрывов в частотах генетических форм.
Проще говоря, все гибридные популяции зеленых
лягушек объективно делятся на две группы: со-
держащие примесь озерной лягушки и не содер-
жащие ее. Результаты, полученные в ходе выпол-
нения настоящей работы, подтверждают эту гипо-
тезу. В то время как в популяциях LE и E типов
гибридизация родительских видов, судя по всему,
не идет (уровень изменчивости гибридной формы
относительно низкий), в популяциях LER и ER ти-
пов она скорее всего происходит (уровень измен-
чивости гибридной формы выше).
Выводы
Установлено, что в ходе полуклонального воспро-
изводства гибридной формы R. kl. esculenta в ряду
поколений происходит многократное снижение
уровня генетической изменчивости родительского
генетического материала. Это подтверждает эво-
люционную значимость рекомбинации в ходе га-
метогенеза и свидетельствует о тесной генетиче-
ской зависимости данной гибридной формы от ро-
дительского вида.
____________________
1. J . evol. Biol. – 1999, 12. – P. 1003–1167.
2. Biol. J. Lin. Soc. V.79: Issue 1, 2003.
3. Mantovani B., Scali V., Tinti F. Allozyme analysis and phyletic
relationships of two new stick–insects from north–west Sicily:
Bacillus grandii benazzii and B. rossius –grandii benazzii ( In-
secta: Phasmatodea) // J . evol. Biol. – 1991, 4. – P. 279–290.
4. Cunha C., Coelho M. M., Carmona J. A., Doadrio I. Phy-
logeographical insights into the origins of the Squalius
alburnoides complex via multiple hybridization events //
Molecular Ecology. – 2004, 13. – P. 2807–2817.
5. Quattro J. M., Avise J. C., Vrijenhoek R. C. An ancient clonal
lineage in the fish genus Poeciliopsis (Atheriniformes:
Poeciliidae) // Proc. Nati. Acad. Sci. USA. – January 1992, Vol.
89. – PP. 348–352, .
6. Vorburger C. Non–hybrid offspring from matings between
hemiclonal hybrid waterfrogs suggest occasional recombination
between clonal genomes // Ecology Letters. – 2001, 4. – P. 628–
636.
7. Бергер Л. Является ли прудовая лягушка Rana esculenta
complex обыкновенным гибридом? // Экология. –1976, №2. –
C.37–43.
8. Vinogradov A. E., Borkin L. J., Günther R. Genome elimination
in diploid and triploid Rana esculenta males: cytological evidence
from DNA flow cytometry // Genome. – 1990, V.33. – P.619 –
627.
9. Морозов–Леонов С. Ю. Генетические процессы в гибридных
популяциях зеленых лягушек Rana esculenta complex Украи-
ны. Автореф... дис. канд. биол. наук. Киев. – 1998. – 24 с.
10. Межжерин С. В., Песков В. Н. Биохимическая изменчи-
вость и генетическая дифференциация популяций озерной
лягушки Rana ridibunda Pall. // Цитология и Генетика. – 1992,
Т.26, №1. – С. 43–48.
11. Межжерин С. В., Морозов–Леонов С. Ю., Некрасова О. Д.
Естественный перенос ядерных генов в гибридных популя-
циях зеленых лягушек Rana esculenta L., 1758 complex: ана-
лиз явления в пространстве и во времени // Генетика. –2004,
Т. 40. № 12. – С. 1364–1370.
12. Borkin L. J., Korshunov A. V., Lada G. A., Litvinchuk S. N.,
Rosanov J. M., Shabanov D. A., Zinenko A. I. Mass occurence of
polyploid green frogs (Rana esculenta complex) in Eastern
Ukraine // Russian Journal of Herpetology. – 2004, V. 11, №. 3.
– P. 194.
13. Морозов–Леонов С. Ю., Межжерин С. В., Некрасова О. Д.,
Куртяк Ф. Ф. Гибридные популяции европейских зеленых
лягушек: обзор данных по количественному генетическому
составу // Успехи совр. биол. – том 127, № 1, Январь-
Февраль 2007. — С. 97–105.
14. Шабанов Д. А., Зиненко А. И., Коршунов А. В., Кравчен-
ко М. А., Мазепа Г. А. Изучение популяционных систем зе-
леных лягушек (Rana esculenta complex) в Харьковской об-
ласти: история, современное состояние и перспективы //
Вісник Харківського національного університету імені
В.Н.Каразіна. Серія: біологія. – 2006., Випуск 3 (729). –
С. 208–220.
Отримано: 15 січня 2007 р.
Прийнято до друку: 1 квітня 2007 р.