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Revista de Ciencias Farmacéuticas y Alimentarias.
RNPS: 2396 - Vol.1 / Nº.1 - 2015 pág.29-43
Artículo de Revisión
Recibido: 9 de enero 2015 - Aceptado: 20 de febrero 2015
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APLICACIONES DE LA C-FICOCIANINA: MÉTODOS DE OBTENCIÓN Y PROPIEDADES
FARMACOLÓGICAS
Javier Marín-Prida1, Alexey Llópiz-Arzuaga2, Nancy Pavón3, Giselle Pentón-Rol2, Gilberto L. Pardo-
Andreu1.
1 Centro de Estudios para las Investigaciones y Evaluaciones Biológicas (CEIEB), Instituto de
Farmacia y Alimentos (IFAL), Universidad de la Habana. Calle 222 No. 2317 entre 23 y 31, La
Coronela, La Lisa, La Habana, CUBA. CP 13600.
2 Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB). Ave. 31 e/ 158 y 190, Cubanacán, Playa, La
Habana, Cuba. CP 10600.
3 Centro Internacional de Restauración Neurológica (CIREN). Ave. 25 e/ 158 y 160, Cubanacán,
Playa, La Habana, Cuba. CP 11300.
Autor de correspondencia:
Javier Marín-Prida: (537) 271-8534, email: javier.marin@ifal.uh.cu
Resumen
La C-Ficocianina (C-FC), principal biliproteína de la cianobacteria Spirulina platensis, posee múltiples
propiedades farmacológicas. Su proceso de purificación puede estar influido por factores
relacionados con el crecimiento de la cianobacteria, tales como la intensidad luminosa y la agitación,
la forma de suministrar los nutrientes y su concentración, el pH y la temperatura. La combinación de
métodos con diferentes principios de separación, tales como las cromatografías de intercambio
iónico, por filtración en gel y la precipitación con sulfato de amonio, ha permitido obtener la C-FC con
grados de pureza adecuados para aplicaciones biofarmacéuticas. Entre las propiedades antioxidantes
descritas para esta proteína se encuentran su potente capacidad secuestradora de radicales
alcoxilos, hidroxilos y peroxilos, además de reaccionar con el peroxinitrito. La C-FC es un inhibidor
selectivo de la ciclooxigenasa-2. En varios modelos experimentales, la C-FC ha mostrado efectos
antiinflamatorios y ha reducido el daño en el tejido inflamado. Entre sus acciones se encuentran la
disminución de los niveles de citocinas y quimiocinas proinflamatorias, la inhibición de la actividad de
la mieloperoxidasa y de la activación del factor NF-κB. La C-FC ha mostrado efectos citoprotectores
en modelos de daño isquémico cerebral y cardíaco, y de daño tisular inducido por tóxicos, tales como
lesiones hepáticas, vasculares, renales, pancreáticas, oculares o frente a la hipertensión asociada al
síndrome metabólico. Esta proteína también ejerce efectos cicatrizantes en heridas de la piel. Se han
descrito, además, acciones antitumorales de la C-FC en diversas líneas celulares y modelos animales
de cáncer colorectal, epidérmico, de leucemia mieloide y de hepatocarcinoma. Estas evidencias
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sugieren que la C-FC podría constituir una promisoria alternativa terapéutica en el tratamiento de
diferentes enfermedades humanas.
Palabras clave: C-Ficocianina, purificación, antioxidante, antiinflamatorio, antitumoral
APPLICATIONS OF C-PHYCOCYANIN: METHODS OF PURIFICATION AND PHARMACOLOGICAL
PROPERTIES
Abstract
C-Phycocyanin (C-PC), the main biliprotein of the cyanobacteria Spirulina platensis, has a variety of
pharmacological properties. Its purification process may depends, among other factors, of the
parameters of cyanobacteria cultivation, such as light intensity, agitation, the method for nutrients
supply as well as their concentration in the medium, the pH and the temperature. The extraction of C-
PC with optimal purity ratios for biopharmaceutical applications have been achieved through the
combination of methods with different separation principles, such as the ion-exchange
chromatography, the gel filtration chromatography and the precipitation with ammonium sulfate. It has
been reported scavenger abilities of this protein for the alkoxyl, hydroxyl and peroxyl radicals, and its
capacity to react with peroxynitrite. C-PC is a selective inhibitor of cyclooxygenase-2. This biliprotein
has showed anti-inflammatory actions and has reduced the injury to the inflamed tissues in several
experimental models. It has been described that C-PC decreases the levels of pro-inflammatory
cytokines and chemokines, inhibits the activity of myeloperoxidase and the activation of the factor NF-
κB. C-PC has exerted cytoprotective effects in models of brain and heart ischemic damages, and in
tissue injuries induced by toxic compounds, such as in hepatic, vascular, renal, pancreatic and ocular
lesions, and against hypertension associated to metabolic syndrome. This biliprotein also exerts
healing actions in skin wounds, and anti-tumoral effects in several cell lines and animal models of
colon, skin, myeloid leukemia and hepatocellular carcinomas. These evidences suggest that C-PC
may constitute a promising therapeutic option for the treatment of different human diseases.
Keywords: C-Phycocyanin, purification, antioxidant, anti-inflammatory, anti-tumoral
Introducción
La C-Ficocianina (C-FC) pertenece a un grupo de polipéptidos denominados ficobiliproteínas
que se encuentran naturalmente en las cianobacterias y en las algas de los géneros
Rhodophyta y Cryptophyta
1
. Debido a sus propiedades colorantes y fluorescentes, las
ficobiliproteínas se han aplicado en las industrias alimentaria, cosmética y biotecnológica
2
.
Entre las fuentes naturales más comúnmente utilizadas para la extracción de la C-FC se
encuentra la cianobacteria Spirulina platensis, la cual es utilizada como un suplemento dietético
en Cuba y otros países por sus valores nutricionales y citoprotectores
3
. Las evidencias
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acumuladas hasta el presente indican, además, que tanto la espirulina, extracto que se obtiene
a partir de la biomasa de la cianobacteria y se comercializa bajo distintas marcas comerciales,
como la C-FC obtenida a distintos grados de pureza, poseen una variedad de aplicaciones
farmacológicas.
En el este trabajo se presenta una breve revisión de los métodos de obtención de la C-FC y sus
principales propiedades farmacológicas identificadas en estudios preclínicos.
Estructura de la C-FC
La C-FC forma parte del ficobilisoma, un complejo proteínico macromolecular cuya función es
utilizar la energía solar para el aparato fotosintético de las cianobacterias
4
. Las clases más
comunes de ficobiliproteínas son: Alo-Ficocianina, C-FC y Ficoeritrina. Todas están formadas
por dos cadenas polipeptídicas, una subunidad α y una β, con pesos entre 17-20 kDa, unidas
mediante interacciones no covalentes. Contienen grupos prostéticos tetrapirrólicos lineales
(grupo cromóforo o bilin) que difieren en cuanto a la disposición de sus dobles enlaces. Estos
grupos bilin están unidos mediante enlaces tioéter a residuos específicos de cisteína de las
cadenas polipeptídicas
5
. En la C-FC el grupo bilin se denomina Ficocianobilina (FCB), y
contiene tres en su estructura, uno de ellos unido a la cisteína 84 de la cadena α y los otros dos
a las cisteínas 84 y 155 de la cadena β, respectivamente
6
. En bases de datos de proteínas
(http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do) se encuentran disponibles por internet varias
estructuras tridimensionales de la C-FC extraídas de distintas fuentes.
Spirulina platensis como fuente natural de la C-FC
La Spirulina platensis es una bacteria fotoautotrófica localizada en medios acuosos salinos. Su
producción industrial tiene las siguientes ventajas sobre otros sistemas: (1) riesgo limitado de
contaminación debido a los componentes de los medios de cultivo empleados (altas
concentraciones salinas y elevado pH); (2) baja cantidad de ácidos nucleicos; (3) presencia de
componentes de gran interés: vitamina A, clorofila, esteroides, ácidos grasos poliinsaturados
7
;
(4) no es tóxica
8
; (5) las células crecen a una velocidad elevada y (6) la biomasa puede ser
extraída con relativa facilidad
9
.
El crecimiento de las células de Spirulina platensis puede estar influenciado por varios factores,
entre los que se encuentran: la intensidad luminosa y la agitación
10
, la forma de suministro de
los nutrientes y su concentración
11
, el pH y la temperatura
12
, así como la edad y la
concentración del inóculo
13
.
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Las ficobiliproteínas son moléculas coloreadas, por lo que sus máximos de absorción se
encuentran en la región visible del espectro. El proceso de purificación de la C-FC es
monitoreado por las absorbancias a 280, 620 y 650 nm. La absorbancia a 280 nm constituye
una medida de las proteínas totales presentes en la preparación, mientras que los máximos de
absorbancias para la C-FC y la Alo-Ficocianina se encuentran a 620 y a 650 nm,
respectivamente. La relación de absorbancia A620/A280 indica la cantidad de C-FC respecto a las
proteínas totales presentes en la mezcla. Cuando esta relación es mayor que cuatro se
considera que la preparación de la proteína es de grado analítico (alta pureza)
14
. El factor de
separación, medido como la relación de absorbancia A620/A650, es una medida de la cantidad de
C-FC respecto a la Alo-Ficocianina
15
. Alternativamente se puede realizar la cuantificación de
estas ficobiliproteínas teniendo en cuenta el coeficiente de extinción molar a determinadas
longitudes de ondas.
Debido al efecto perjudicial del calor en la integridad de la C-FC, el procedimiento más
adecuado para la purificación de esta proteína implica el uso de la biomasa fresca como
material de partida
16
. Para la ruptura de las células de Spirulina platensis se han empleado
varias técnicas como el ultrasonido
17
, la prensa de French
18
, la congelación-descongelación, la
extracción en medio ácido, la ruptura por ósmosis, los abrasivos, la extracción acuosa y otros
métodos mecánicos¡Error! Marcador no definido.. La ruptura celular se realiza a bajas temperaturas y en
el caso que sea posible en soluciones altamente desnaturalizantes. Estas condiciones
disminuyen la acción de las proteasas intracelulares que pueden modificar la estructura
primaria de las proteínas. La extracción en medio ácido no es un método conveniente para la
obtención de la proteína intacta debido a que este tratamiento afecta la integridad del enlace
tioéter del cromóforo FCB con las cadenas polipeptídicas. La extracción por tratamiento con
agua es un método lento, que puede tomar varios días para lograr una liberación eficiente de la
C-FC al medio. Por otra parte, el uso de métodos vigorosos de ruptura puede provocar la
liberación de mayor cantidad de contaminantes al medio
19
.
Métodos cromatográficos para la purificación de la C-FC
La purificación de C-FC se ha realizado mediante el empleo de técnicas cromatográficas,
aunque se han empleado métodos no cromatográficos como la precipitación con sulfato de
amonio y la extracción en sistemas de dos fases acuosas
20
.
La C-FC ha sido extraída por ejemplo a partir de la combinación de la precipitación con sulfato
de amonio con las cromatografías en hidroxiapatita y de intercambio aniónico en DEAE-
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Sephadex A-50. En esta estrategia las células se rompieron mediante dos procedimientos
diferentes: (1) el tratamiento con lisozima/EDTA y (2) mediante un homogeneizador mecánico.
El extracto obtenido en cada uno de los procedimientos fue tratado con sulfato de amonio al
50 % de saturación; luego de centrifugar, la CFC se obtuvo en el precipitado azul. Esta fracción
fue disuelta y absorbida en una columna de hidroxiapatita. Las fracciones ricas en CFC fueron
obtenidas a molaridades de fosfato entre 25 y 70 mM pH 7,0. Luego de la realización de este
proceso de purificación la relación A620/A280 fue igual a 4,15 (grado analítico de la C-FC),
mientras que la relación A620/A650 (medida de la pureza de la C-FC respecto a la Alo-
Ficocianina) tuvo un valor de 4,12
21
.
Esta proteína también ha sido purificada mediante la combinación de la cromatografía por
filtración en gel, la precipitación con sulfato de amonio y la cromatografía de intercambio
aniónico
22
. En este proceso las células se rompieron con ultrasonido bajo agitación en una
solución reguladora de pH de acetato de sodio 1 M pH 5,0; luego se centrifugó a 80 000 g,
durante una hora. Al sobrenadante azul obtenido se le añadió sulfato de amonio sólido hasta el
70 % de saturación. El material precipitado fue resuspendido en acetato de sodio 0,1 M pH 5,0
y dializado durante toda la noche. Esta solución fue luego aplicada en una columna Sephadex
G-100 y las primeras siete fracciones colectadas resultaron enriquecidas en C-FC, mientras
que las últimas cuatro fracciones estuvieron enriquecidas en Alo-Ficocianina; las tres fracciones
intermedias consistieron de una mezcla de ambas ficobiliproteínas. Las fracciones ricas en
C-FC fueron precipitadas independientemente con sulfato de amonio. El material insoluble
obtenido después de centrifugar fue resuspendido en fosfato de sodio 5 mM pH 7,0 y se aplicó
en una columna DEAE-Celulosa DE-52. La elución de la C-FC ocurrió en fosfato de sodio 0,29
M pH 7,0 y la de APC en fosfato de sodio 0,4 M pH 7,0. En esta estrategia de purificación las
relaciones A620/A280 y A650/A280 fueron igual a 4,0 y 3,5, respectivamente.
Patel et al.17 obtuvieron la C-FC con elevada pureza usando solamente un paso
cromatográfico. El extracto crudo fue precipitado de forma diferencial: (1) 20 % de saturación
de sulfato de amonio y (2) 50% de saturación de sulfato de amonio. El precipitado fue disuelto
en acetato de sodio 0,1 M pH 4,5 para eliminar contaminantes por cambios en el pH de la
solución. La C-FC fue posteriormente precipitada con sulfato de amonio. El material
resuspendido en fosfato de sodio 5 mM pH 7,0 fue colocado en una columna DEAE-Sepharose
CL-6B. La fracción enriquecida con C-FC eluyó entre 0,1-0,2 M de cloruro de sodio con una
A620/A280 igual a 4,42 y un rendimiento del 46 %.
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Recientemente se obtuvo la C-FC con un elevado grado de pureza combinando la precipitación
diferencial con sulfato de amonio, primero en 20 % y después en 50 % de saturación de esta
sal
23
. Luego la proteína fue cargada en un intercambiador iónico (Q-Sepharose Fast Flow). El
material obtenido se aplicó en una columna de filtración en gel (Sephacryl S-100). La pureza de
la C-FC fue de 4,0 con un factor de purificación de 6,35.
La C-FC también ha sido purificada mediante el uso de un sistema de lecho expandido (Phenyl-
Sepharose) acoplado con un intercambio iónico en hidroxiapatita
24
. En este procedimiento las
células se rompieron por tratamiento con sulfato de amonio 0,5 M. El sobrenadante obtenido
fue cargado en el sistema de lecho expandido. Las fracciones enriquecidas en C-FC fueron
aplicadas en un intercambiador iónico (Q-Sepharose) y eluida en fosfato de sodio 1 mM pH 7,0
con concentraciones crecientes de cloruro de sodio. Este sistema es escalable, aunque tiene
como desventaja que la C-FC obtenida posee una relación de A620/A280 menor que 4,0.
Purificación de la C-FC mediante el uso de sistemas de dos fases acuosas
El uso de los sistemas de dos fases acuosas ha demostrado ser una estrategia adecuada para
la purificación de C-FC a partir de varias especies de Spirulina. Con estos sistemas se han
alcanzado purezas elevadas y son escalables
25
. El uso de un sistema de dos fases acuosas
formado por PEG 4000/fosfato de potasio permitió obtener C-FC con una pureza de 3,23 en un
solo paso de extracción. Este parámetro se incrementó hasta 4,02 cuando se realizó un
segundo paso de extracción
26
. Estos sistemas han sido aplicados para la purificación de C-FC
a partir de otros organismos, obteniendo preparaciones con una pureza mayor que cuatro
27
.
Propiedades antioxidantes de la C-FC
Los estudios sobre las propiedades antioxidantes de la C-FC han utilizado tanto ensayos a
nivel de reacciones químicas, de moléculas biológicas, de organelos aislados y fracciones
subcelulares, como de sistemas celulares in vitro y de organismos vivos.
Ensayos de quimioluminiscencia demostraron la acción secuestradora de la C-FC sobre los
radicales alcoxilos e hidroxilos, además de la inhibición de hidrocloruro 2,2’ azobis 2-
amidinopropano (HAAP), un iniciador de la formación de radicales libres y de la peroxidación
lipídica
28
. La C-FC inhibe la formación de peróxidos lipídicos en microsomas de hígado de
ratas inducida por ácido ascórbico y hierro
29
. Basado en estos resultados también se ha
descrito que la C-FC protege los eritrocitos humanos de la lisis celular provocada por radicales
peroxilos
30
. La interacción de ambos, la C-FC y la FCB, con peroxinitro (ONOO-) fue estudiada
espectroscópicamente y se demostró que son eficientes secuestradores de esta especie
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reactiva del oxígeno
31
. Se ha demostrado también en dos sistemas experimentales (ensayo de
enzima aislada y ensayo sanguíneo completo) que la C-FC es un inhibidor selectivo de la
enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2)
32
.
Propiedades antiinflamatorias e inmunomoduladoras de la C-FC
Los estudios en animales de laboratorio han evidenciado una potente capacidad
antiinflamatoria e inmunomoduladora de la C-FC, aunque en muchos de ellos no se indica la
pureza del producto empleado. La ausencia de este dato pudiera ser una dificultad en la
interpretación y comparación de los resultados entre los diferentes estudios. La C-FC inhibe el
edema producido en modelos de inflamación de la pata inducida por carragenina y glucosa
oxidasa
33
, así como en el modelo de inflamación de la oreja del ratón inducida con ácido
araquidónico
34
. En un modelo de artritis inducida por zimosano en ratones, la C-FC (25, 50, 100
mg/kg), administrada por vía oral, una vez al día a partir del cuarto y hasta el duodécimo día
posterior a la aplicación del zimosano, disminuyó la actividad de la enzima β-glucuronidasa en
el líquido sinovial, así como las lesiones tisulares de la rodilla
35
. En ratones tratados intra-
traquealmente con lipopolisacárido (LPS), la C-FC administrada tres horas después, logró
disminuir en los pulmones los niveles de citocinas proinflamatorias (TNF-α, IL-6, IL-1β) y
quimiocinas (CINC-3), de especies reactivas del oxígeno y del nitrógeno (nitrito/nitrato, O2●‒),
así como la expresión de óxido nítrico sintasa inducible (iNOS, en inglés), COX-2 y del factor
nuclear de transcripción κB (NF-κB, en inglés), y la actividad de la enzima mieloperoxidasa.
Además, logró modular la expresión de factores mitocondriales antiapoptóticos (aumento de
Bcl-2 y Bcl-XL) y proapoptóticos (disminución de Bax) en el tejido pulmonar expuesto a la lesión
por LPS
36
. La C-FC también ha sido evaluada en un modelo de colitis inducida por ácido
acético en ratas, inhibiendo la actividad de la mieloperoxidasa y la infiltración de neutrófilos en
el tejido del colon
37
. Resultados obtenidos por nuestro grupo muestran el efecto protector de la
C-FC frente a la encefalomielitis autoinmune experimental en ratas, modelo animal de
esclerosis múltiple
38
. En este mismo estudio, se demostró la capacidad de la C-FC de inducir
células T reguladoras en cultivo de células mononucleares sanguíneas periféricas aisladas de
pacientes con esclerosis múltiple.
Mediante el empleo de una línea celular de macrófagos murinos (RAW 264.7) estimulados con
LPS, se ha podido demostrar que la C-FC inhibe significativamente la producción de nitritos, la
inducción de la enzima óxido nítrico sintetasa inducible y la formación de la citocina
proinflamatoria TNF-α, a la vez que atenuaba la activación del factor nuclear NF-κB
39
.
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Propiedades citoprotectoras de la CFC
Las propiedades citoprotectoras de la C-FC se han evaluado en múltiples modelos
experimentales frente al daño inducido en distintos órganos y tejidos por diversos eventos y
compuestos perjudiciales. Por ejemplo, se ha observado que la C-FC es un inhibidor de la
agregación plaquetaria
40
, lo cual sugiere sus posibles aplicaciones como agente antitrombótico
en enfermedades vasculares isquémicas. En este sentido, nuestro grupo ha demostrado un
efecto neuroprotector de la C-FC obtenida con grado analítico (A620/A280 > 4,0) en un modelo de
isquemia cerebral global en gerbos de Mongolia
41
. La C-FC mejoró la recuperación cardíaca
posterior el daño al miocardio inducido por una isquemia/reperfusión, mediado entre otros
mecanismos por la modulación de las enzimas ERK1/2 y p38 MAPK
42
. Otros resultados han
mostrado que la C-FC (obtenida con A620/A280 = 3,8) regula transcripcionalmente el factor
activador de plasminógeno tipo uroquinasa a través de la ruta de la proteína quinasa A
dependiente de AMPc e incrementa la proliferación y migración en una línea celular de
fibroblastos humanos (WI-38)
43
. Estas evidencias sugieren su empleo como agente cicatrizante
de heridas. En este sentido, la aplicación tópica de C-FC en heridas dérmicas en ratones
aceleró el ritmo de cicatrización
44
, mediante la modulación efectiva de proteínas totales, ácido
urónico y factores de crecimiento
45
.
En cultivos primarios de células granulosas cerebelares, la C-FC fue capaz de prevenir la
muerte neuronal causada por la ausencia de potasio y suero, lo cual sugiere una acción
neuroprotectora
46
. En otra línea celular de origen neuronal humano, SH-SY5Y, también se ha
evidenciado efectos protectores de la C-FC frente al daño inducido por el hidroperóxido de
terbutilo
47
y por una sobrecarga de hierro
48
,
49
, relacionado con sus capacidades antioxidantes.
El papel neuroprotector de la C-FC también ha sido examinado en un modelo de daño cerebral
inducido por ácido kaínico en ratas. Los síntomas clínicos de este modelo incluyen sacudidas,
temblores y alteraciones en el comportamiento. La incidencia de estos cambios fue
significativamente más baja en aquellas ratas que recibieron 100 mg/kg por vía oral de C-FC
50
.
En tejido hepático, la C-FC ha mostrado efectos protectores frente el daño inducido por CCl4
tanto en ratas
51
, como en ratones y en una línea celular de hepatocitos humanos (L02)
52
,
asociado a su capacidad de secuestrar eficientemente radicales libres e inducir la actividad de
enzimas antioxidantes (superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa). En un modelo de
encefalopatía hepática inducida con tioacetamida en ratas, la C-FC logró atenuar los daños
causados en el hígado y el cerebro con una dosis intraperitoneal de 50 mg/Kg, administrada
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inmediatamente después al tóxico dos veces en un intervalo de 24 horas
53
. Otros estudios
preclínicos de la C-FC incluyen su papel protector y antioxidante frente a la aterosclerosis
54
, la
hipertensión asociada al síndrome metabólico
55
, el daño renal inducido por HgCl2
56
y por
cisplatina
57
,
58
, así como en la catarata inducida por selenito de sodio (Na2SeO3) en ratas
59
y en
un modelo murino de diabetes mellitus
60
.
Propiedades antitumorales de la C-FC
Diversos estudios in vitro han mostrado que la C-FC limita la proliferación de líneas tumorales,
por ejemplo de origen leucemia mieloide
61
, y de hepatocarcinoma
62
. El cáncer colorectal
constituye una de las principales causas de muerte por tumores a nivel mundial, y entre sus
principales mediadores moleculares se encuentra la sobreexpresión de la enzima COX-2
63
. Se
ha demostrado los efectos positivos de la C-FC en la inducción de la apoptosis en una línea
celular humana de cáncer de colon (COLO 205), asociado además a la activación de las
caspasas 3, 8 y 9, y a la despolarización de la membrana mitocondrial
64
. En ratas con este tipo
de tumor inducido por dicloruro de 1,2-dimetilhidrazina (DMH), la administración de C-FC a 200
mg/kg (por vía oral una vez al día durante seis semanas) logró disminuir significativamente el
número de lesiones tumorales en comparación con el grupo DMH tratado con vehículo. La
combinación de C-FC con piroxicam, un inhibidor no selectivo de las ciclooxigenasas
65
, mostró
una reducción mayor en este parámetro respecto a los tratamientos individuales. Se evidenció
que la administración de C-FC/piroxicam media sus efectos a través de la inhibición de la
expresión de COX-2 y la disminución de los niveles de prostaglandina-E2 en la mucosa del
colon
66
. Esta combinación también moduló los niveles de mediadores de la apoptosis en el
tumor, como la disminución de la expresión de Bcl-2, el aumento de Bax, citocromo c libre,
caspasa 3, caspasa 9 y Apaf-1
67
. Recientemente, se ha demostrado también que la
combinación C-FC/piroxicam reduce la aparición de nuevas alteraciones neoplásicas en este
modelo experimental, asociado al aumento de la expresión de calpaína-9 y la modulación de la
cascada Wnt/β-catenina
68
.
En ratones expuestos al 12-O-tetradecanoil-13-acetato (TPA), un inductor del cáncer de la piel,
la C-FC (A620/A280 = 1,66) administrada a dosis de 0,25, 1 y 2 mg/mL en aplicación tópica
inmediatamente después del TPA, disminuyó la expresión de COX-2, pSTAT-3, IL-6 y la
enzima ornitina descarboxilasa luego de cinco horas posteriores a la aplicación del tóxico. La
modulación de estos genes se ha relacionado con un posible efecto preventivo frente a la
tumorigénesis epidérmica
69
.
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La purificación de C-FC se ha realizado fundamentalmente mediante técnicas cromatográficas,
aunque se han empleado métodos no cromatográficos como la precipitación con sulfato de
amonio y la extracción en sistemas de dos fases acuosas. Las evidencias indican que la
combinación de diferentes técnicas permite obtener preparaciones de C-FC con una pureza
adecuada para ser empleada con fines biofarmacéuticos. Los estudios preclínicos han
evidenciado que esta proteína posee múltiples propiedades farmacológicas, tales como
antioxidantes, antiinflamatorias, citoprotectoras y antitumorales. La C-FC podría constituir una
promisoria alternativa terapéutica en el tratamiento de diferentes enfermedades humanas, para
lo cual es necesaria la realización de ensayos clínicos futuros.
Literatura citada
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