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1 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
INFORME TÉCNICO:
LOS POLISACÁRIDOS MUCILAGINOSOS DE
ALOE VERA (AVMP):
ESTABILIDAD
Las Palmas de G.C., 15 de Enero del año 2003.
Universidad de Las Palmas de G.C.
Departamento de Química
Laboratorio de Química Orgánica II
Prof. Dr. Francisco Javier Toledo Marante
ACEMANANO
R1OO
OH
OAc
OO
O
OAc
OH O
HO
OAc
OAc
O
OOR2
OH
OH
HO
HO
AcO
2 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
INTRODUCCIÓN
Los hidratos de carbono incluyen los azúcares, los almidones, las celulosas y los
productos relacionados con ellos, como los glicolípidos y los glicopéptidos. El examen
de las fórmulas de algunos hidratos de carbono importantes revela que sus estructuras
moleculares pertenecen a una de las clases siguientes:
a) un polihidroxialdehído (o el tautómero hemiacetálico de tal molécula);
b) una polihidroxicetona (o su tautómero hemicetálico);
c) un compuesto que produce por hidrólisis sustancias del tipo a), del tipo b) o de
ambos.
Los hidratos de carbono se clasifican en:
a) Los monosacáridos.- Son los azúcares sencillos que no pueden hidrolizarse a
sustancias de peso molecular menor. Son ejemplos la D-(+)-glucosa,
denominada también dextrosa (es una aldohexosa) y la D-(-)-fructosa,
denominada también levulosa (una cetohexosa).
b) Los disacáridos.- Pueden hidrolizarse mediante enzimas o por la acción de una
disolución acuosa ligeramente ácida, a ebullición, a dos monosacáridos (Figura
1).
Figura 1
c) Los polisacáridos.- Tienen estructuras moleculares complejas en las que muchas
unidades de monosacárido (centenares o incluso millares) están unidas
configurando una macromolécula. Son ejemplos corrientes el almidón y la
celulosa, que producen por hidrólisis ácida, en caliente, D-(+)-glucosa (figura 2).
Los oligosacáridos son fragmentos moleculares de éstos que se obtienen por
hidrólisis química y/ó enzimática de los anteriores. El almidón está distribuido
ampliamente en las plantas, que lo almacenan en granos y en tubérculos como
reserva alimenticia para el momento de la germinación. La hidrólisis del
almidón catalizada por ácidos lo convierte en varias clases de dextrinas
(oligosacáridos), en maltosa y, por último, en D-(+)-glucosa. Los grupos
C12H22O11 + H3O+ ---------------> C6H12O6 + C6H12O6
C12H22O11 + H3O+ ---------------> C6H12O6 + C6H12O6
Lactosa D-(+)-glucosa D-(-)-galactosa
C12H22O11 + H3O+ ---------------> 2 C6H12O6
Maltosa D-(+)-glucosa
Sacarosa D-(+)-glucosa D-(-)-fructosa
3 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
funcionales existentes en el almidón y en la celulosa son los grupos hidroxilo y
acetal. Estos polisacáridos tienen diferente configuración siendo el almidón un
α-glucósido y la celulosa un β-glucósido. También difieren en el tamaño
teniendo la celulosa un peso molecular medio mucho mayor que el del almidón.
Figura 2
La forma aldehído de la glucosa puede adoptar una estructura hemiacetálica por
interacción tautomérica con el grupo alcohólico de la posición 5 de la propia molécula.
La estructura resultante, que es predominante, posee un nuevo centro quiral en el
carbono número 1. De aquí que la estructura hemiacetálica se presente en dos formas
diastereoisoméricas, el epímero–β (II) y el epímero–α (III) (Figura 3). Obsérvese que la
migración de un protón con ruptura del enlace O-C formado ocasiona que el carbono 1
recupere de nuevo la estructura típica de aldehído manifestando sus propiedades
químicas, como reducir los reactivos de Tollens, de Fehling ó de Benedict, a semejanza
de los aldehídos alifáticos sencillos.
Sin embargo, si se calienta la glucosa con un alcohol (R-OH) en medio ácido
(H+), por ejemplo CH3OH / H+, la estructura de hemiacetal se convierte en una molécula
de tipo acetal que carece de poder reductor porque el átomo de hidrógeno móvil, que es
el responsable de la regeneración del grupo aldehído, ha sido sustituido por un grupo
alquilo inmóvil (-CH3). Las sustancias de esta clase obtenidas a partir de la glucosa se
denominan glucósidos. El término más general de glicósido incluye los glucósidos y
otras sustancias de estructura análoga formados a partir del resto de azúcares. La
naturaleza biosintetiza y acumula en los tejidos de los organismos vegetales y animales
una gran variedad de éstos, con diferentes funciones biológicas. El grupo R,
denominado aglicón, puede ser uno cualquiera de los muchos tipos de compuestos R-
OH que se presentan en la naturaleza, como los esteroles. Al formarse los di- y los
polisacáridos, la fórmula R-OH representa a otra unidad de mono-, di- ó polisacárido.
Las cetosas, como la fructosa, son más reactivas que las cetonas sencillas y
también poseen propiedades reductoras. Al igual que las aldosas, forman sustancias
análogas a los hemiacetales y a los acetales, que se conocen con los nombres
respectivos de hemicetales y cetales. Así, mientras que los hemicetales (-α y –β) de la
D-fructosa son reductores, los cetales metil-α-D-fructósido (VI) y metil-β-D-fructósido
(VII) no lo son (Figura 4).
Hemos visto que un azúcar reductor tiene un grupo aldehído o cetona libre en
equilibrio tautomérico con un grupo hemiacetal o hemicetal cíclico. La sacarosa (el
azúcar de la caña / remolacha), un disacárido, no tiene ni un grupo aldehído potencial ni
uno cetónico, debido a que ambas unidades están bloqueadas en la estructura acetal. La
consecuencia es que la sacarosa no es un azúcar reductor. La maltosa, por el contrario,
es un disacárido que retiene en una de las unidades de glucosa una estructura
hemiacetálica que está en equilibrio tautomérico con un grupo aldehído libre; de aquí
que tenga propiedades reductoras en esta parte de la molécula.
Los azúcares disueltos forman con frecuencia jarabes (líquidos siruposos y/ó
geles) de los que no es fácil obtener compuestos cristalinos. Un procedimiento típico
(C6H10O5)n + n H3O+ ----------------> n C6H12O6
Almidón o D-(+)-glucosa
Celulosa
4 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
supone disminuir la polaridad del medio disolvente, lo que se consigue por adición
progresiva de disolventes miscibles con el agua (alcohol ó acetona).
Figura 3
OH
OHH
HHO
OHH
OHH
CH2OH
C
O
O
H
H
HO
HO HO
HOH2C
1
5
1
5
6
O
HO
HO
HO
HOH2C
H
OH
O
OH
H
HO
HO
HO
HOH2C
6
11
+
I
II III
HOCH3, H+
O
OCH3
HO
HO
HO
HOH2C
H
O
OCH3
H
HOH2C
HO
HO
HO
IV V
11
5 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
Figura 4
REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
El conocimiento actual sobre los polisacáridos mucilaginosos de Aloe vera es el
resultado de unos sesenta y un años de investigación que se inician con un trabajo de
Rowe T. D. and Parks L.M. (1941)1 quienes ponen de manifiesto el contenido en
ácidos urónicos de la porción insoluble en alcohol del mucílago de la hoja. Además se
detectaron azúcares reductores, azúcares hidrolizables y fructosa. Roboz E. and
Haagen-Smit A.J. (1948)2 elucidan un hidrato de carbono a partir del mucílago
obtenido a partir del tejido asimilador de la hoja de Aloe vera cultivado en las islas
Hawai. Tras extensiva purificación, obtienen un polvo blanco con la fórmula molecular
(C6H10O6)n, que se descompone a 271-276 ºC, que por hidrólisis rindió
aproximadamente las mismas cantidades de glucosa y manosa, así como pequeñas
cantidades de ácidos urónicos. Los intentos para identificar pentosas, fructosa, galactosa
y ramnosa resultaron infructuosos.
Farkas A. (1963)3 patenta un polisacárido –poliurónido- aislado de Aloe vera
con un peso molecular de 275000 – 374000 para el tratamiento de heridas superficiales.
Similarmente, Farkas A. y Mayer R.A. (1968)4 patentan otro polisacárido, constituido
por cantidades iguales de glucosa y manosa, con un tamaño molecular de 420–520 kD,
para el tratamiento de heridas y Marsh J.R. (1969)5 patenta, en nombre de Aloe Créme
Labs. Inc., un gel de Aloe cristalino que se reconstituye por adición de agua en un gel
que conserva las mismas propiedades -físicas y químicas- que el gel fresco inicial. Este
gel es útil para fabricar preparaciones farmacéuticas, cosméticas y de baño.
El problema de la estabilización es abordado, en primer lugar, por Cobble, H.
H. (1975)6, quien patentó, en nombre de Aloe “99” Inc., una fórmula para estabilizar el
gel de Aloe vera. Ghanem A.H. y col. (1977)7 estudian el efecto de distintos
conservantes usuales en la estabilización de dicho gel concluyendo que las disoluciones
de ácido benzoico (0.2-0.3 %) son las más efectivas (para los mucílagos de Aloe sin
aloína); el conservante inhibió el mal olor y retrasó la pérdida de su aspecto coloidal.
Sin embargo, durante las primeras cuatro semanas decreció significativamente la
viscosidad, al mismo tiempo que glucosa y ácido galacturónico decrecieron en la
fracción insoluble y tanto glucosa como manosa aumentaron en la fracción soluble,
hasta llegar a hacerse constantes. El pH se fijó, en este proceso, en el rango 4.5 ±0.5.
Coutts, B. C. (1979)8 patentó un nuevo procedimiento para estabilizar el mismo gel
consistente en calentar (35-80 ºC), adicionar ácido ascórbico como antioxidante y ácido
cítrico hasta fijar el pH en 4-6.
OH
H
H
CH2OH
OHH
O
CH3
O
HOCH2OH
CH2OH
OH
H
H
OH
O
CH3
HOCH2
VI VII
6 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
Los estudios estructurales continuan por parte de distintos grupos. Así, Gowda
D.C. y col. (1979)9 identificaron en la gelatina mucilaginosa de las hojas de A. vera
cuatro glucomananos parcialmente acetilados que se diferenciaron en sus relaciones
manosa / glucosa y contenido en grupos acetilo. Los estudios de derivatización química
(metilación) y oxidación química (con periodato) revelan que estos glucomananos son
polímeros lineales que contienen enlaces (1.fwdarw.4)-glicosídicos. Haq, Q.N. y
Hannan, A. (1981)10 dan cuenta de que la extracción de hojas frescas de A. vera con
acetona acuosa a temperatura ambiente rindió un polisacárido que por hidrólisis dió D-
glucosa, D-manosa y D-galactosa en proporciones molares de 2:2:1, junto con muy
pequeñas cantidades de arabinosa y ramnosa. Fraccionamiento del polisacárido dió un
glucogalactomanano puro. La metilación del glucogalactomanano seguido de
metanólisis, hidrólisis y cromatografía en papel aporta evidencias de que el polímero es
lineal y las unidades de D-glucosa, D-manosa y D-galactosa están unidas mediante
enlaces 1,4-. Este descubrimiento también fue soportado por los resultados de la
oxidación con periodato, pues el polisacárido consumió 1.001 moles de periodato por
residuo de hexosa.
El problema de la estabilización sigue planteado y, por ello, Ashleye A.D.
(1983)11 discute los efectos indeseables del procesado en caliente del gel de Aloe vera
sobre la integridad de sus productos naturales, así como diferentes aspectos que se
plantean en el procesamiento y almacenamiento del gel y, finalmente, el efecto de los
aditivos. Observa que las proteínas sufren desnaturalización cuando se calientan a 100
ºC y podrían reaccionar con los azúcares reductores presentes en el gel. Además, los
hidratos de carbono, ceras y vitaminas sufrieron degradación. Análogamente, la
empresa Homcare Iberica S.A. (1983)12 patenta un nuevo procedimiento para
estabilizar el gel de Aloe vera que supuso la adición de un catalizador de la oxidación
(no tóxico) como H2O2 y calentamiento a 35-80 ºC, frenado de esta oxidación por la
adición del antioxidante sorbato de potasio, adición de un agente neutralizante no tóxico
como el ácido ascórbico (o H3PO4) y un surfactante no tóxico que impida la coagulación
del gel. Para prevenir el crecimiento bacteriano se añadió sorbitol y, para prevenir la
acumulación de oxígeno en el gel, se añadió 2,6-di-(ter-butil-α-dimetilamino)-p-cresol,
que lo suprime. Conejos tratados, bien con este gel estabilizado, bien con el gel fresco,
no presentaron irritación, mientras que los tratados con un gel no estabilizado,
envejecido durante 24 horas, produjeron irritación de la piel y necrosis. Maughan R.G.
(1984)13 registra otra patente sobre un nuevo procedimiento para estabilizar el gel de
Aloe vera de modo que no se coloree con el tiempo. Consiste en añadir un antioxidante
(Na2SO3, NaHSO3, metabisulfito sódico, edetato de calcio, galato de praseodimio ó
glicina), ajustar el pH en 3.0-3.5, adición de NaHCO3 (0.05-5.00 %), Ca3(PO4)2 (0.1-1.0
%) y Na4-EDTA (0.001-0.200 %) y, finalmente, enfriar a t≤23 ºC durante un período
inferior a15 min.
Los trabajos de productos naturales de Aloe vera continúan y Hikino H. y
Hayashi T. (1985)14 patentan varios polisacáridos hipoglicémicos. Así, 2 kg de A.
barbadensis seca se pulverizaron y extrajeron con metanol acuoso (1:1); el extracto fué
concentrado, filtrado y dializado frente a agua durante tres días, concentrado y secado
para dar 4.9 g de polisacáridos en forma de un polvo marrón. La actividad
hipoglicémica de esta fracción se demostró mediante ensayos en ratones de laboratorio.
También Madis V.H. y col. (1986)15 inscribieron, a nombre de Dr. Madis Labs.,
varias patentes sobre la fabricación y aplicaciones de aloeferona, un nuevo polisacárido
7 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
de Aloe vera. Se dan los espectros de IR y NMR, así como su análisis elemental. La
fórmula molecular deducida para este polisacárido fué (C322H620NS3O336P)7 (tamaño
molecular de aproximadamente 70000 daltones). Este polisacárido presentó actividad
estimuladora del crecimiento de los fibroblastos y actuó como un antídoto para el curare
y la atropina en el ratón a concentraciones de 10-25 mg / Kg.
Anon (1989)30 patenta una fórmula para fabricar bebidas basadas en los
polisacáridos mucilaginosos de Aloe vera.
Wang S. y col. (1989)16 describen un estudio de los polisacáridos de A. vera,
variedad chinensis. Se purificaron tres constituyentes con columnas de Sepharose 6B-
CL. Los pesos moleculares de los polisacáridos fueron respectivamente de 12000,
47000 y 12000. Uno contuvo sólo manosa y otro contuvo glucosa y manosa en relación
3:4. La degradación de Smith, el análisis de los productos metilados y métodos
espectroscópicos (IR) indicaron que los monosacáridos se unen mediante enlaces -β. El
glucomanano está enlazado de la forma β-(1.fwdarw.4)-. No se observó actividad de
estos frente al sarcoma S-180 implantado en el ratón, si bien se observó estimulación de
su sistema inmunológico. ´T Hart y col. (1989)17 realizaron un estudio que trató sobre
la purificación de un extracto acuoso de A. vera, guiado por su actividad
antiinflamatoria en suero humano. Por cromatografía de cambio aniónico y de “gel-
permeation” se aisló una fracción de polisacáridos altamente activa, con varias
longitudes de cadena. Los polisacáridos están constituidos por varios monosacáridos de
los que manosa resultó mayoritario. Estos polisacáridos inhiben la opsonización de
zimosano en el suero humano y presentan actividad adjuvante sobre la producción de
anticuerpos específicos, así como hipersensibilidad tardía en el ratón.
El problema de la estabilidad continua y Kopolow S. L. y col. (1993)18
describen que un nuevo polímero cruzado PVM / MA (Poli(metil-vinil éter/anhídrido
maleico), que forma un gel con etilenglicol/glicerina -también con propilenglicol/etanol-
, permite estabilizar cosméticos y aplicarlos fácilmente sobre la piel y el pelo.
Reynolds T. (1994)19 compara por cromatografía muestras antiguas –de museo-
con extractos frescos de Aloe vera. Cualitativamente, las muestras con más de 150 años
se diferenciaron poco, en lo que se refiere al número de zonas cromatográficas, del
material fresco. Sin embargo, desde el punto de vista cuantitativo, se observaron
diferencias. Las condiciones adversas durante la recolección y almacenamiento se
consideran responsables de tales diferencias.
Cohen R. (1996)20 se queja de que, a pesar de que los productos de Aloe vera
han llegado a ser favoritos en cosmética, su reputación está en peligro debido a dudas
sobre la calidad de las materias primas y los niveles de incorporación. Como haciéndose
eco de este problema, Diehl B. y Teichmuller E. E. (1998)21, en un interesantísimo
trabajo, discuten el control de calidad de los productos comerciales de Aloe vera por
espectroscopia de NMR. Mediante esta técnica se resuelven los componentes naturales
(glucosa, ácido málico y acemanano) de los artificiales (benzoato sódico, sorbato
potásico y/ó maltodextrina), de los de degradación microbiológica (fermentación) y
enzimática durante el período posterior a la cosecha (ácidos láctico, fumárico, succínico,
y pirúvico) y, finalmente, de los de degradación química (ácidos acético y fórmico). Se
pone de manifiesto, pues, un potente método para controlar la calidad de las materias
primas de Aloe vera al definirse la “huella dactilar” de las auténticas como la señal que
8 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
acemanano (VIII, Figura 5) desplaza en el espectro de 1H-NMR correspondiente a los
grupos acetilo (Ac) a δ 2.1.
Figura 5
Ni Y. y col. (1999)22 patentan, en nombre de Carrington Labs. Ltd., nuevas
macromoléculas extraídas del jugo y paredes celulares de la piel de Aloe vera. Las
pectinas del aloe formaron un gel en presencia de calcio y de cationes monovalentes a
baja temperatura; estos últimos se disolvieron al dejarlos alcanzar la temperatura
ambiente. Ambos geles presentan aplicaciones farmacológicas diversas.
Lai D. (2000)23 realiza una revisión sobre el acemanano que producen los
laboratorios Carrington, con multitud de citas bibliográficas. Lo presentan como un
inmunoestimulador para el tratamiento potencial de AIDS, colitis ulcerosa y
cicatrización de heridas. Se trata de un complejo polisacárido formado por una larga
cadena polimérica de manosa β-enlazada y salpicada con grupos acetilo que se aisla de
Aloe vera (ellos lo denominan como el “long-chain polydispersed β-(1,4)-acetilated
polymannose with interspersed O-acetyl groups with a mannose monomer/acetyl ratio
≈1:1 extracted from Aloe vera” (Figura 5). Se describen ensayos clínicos en pacientes
infectados del HIV y se informa que los laboratorios Carrington recibieron permiso del
US FDA para comercializar el “hidrogel de acemanano” en Marzo del 2000 para el
tratamiento de incisiones post-quirúrgicas, quemaduras de primer y segundo grado,
úlceras en arterias y venas y, finalmente, úlceras de presión y de pies. Ha alcanzado la
fase clínica III para el tratamiento de colitis ulcerosa, si bien el procedimiento se
paralizó en Marzo del 2000 debido a que no se observó beneficio terapéutico con esta
indicación.
Ni Y. and Yates K.M. (2001)24 presentan en el “28th International Symposium
on Controlled Release of Bioactive Materials and 4th Consumer & Diversified Products
Conference” un nuevo polisacárido con propiedades químicas y gelificantes
diferenciadas de los previamente obtenidos de Aloe vera que se denominó CR1013.
Resultó ser un ácido poligalacturónico con pequeñas cantidades de azúcares neutros. Su
composición y análisis estructural reveló que se trata de un polisacárido de la clase de
las pectinas con un bajo indice de metoxilos (LM). Por otra parte, fué capaz de formar
dos diferentes tipos de geles: un gel de calcio, como otras LM pectinas, que es
acrecentado por la presencia de NaCl y un gel sódico (4 ºC, NaCl 0.15M) reversible.
Yaron A. (1991)25 aporta datos sobre las propiedades reológicas del gel de Aloe
vera (A. barbadensis), su composición química y los efectos de las condiciones de
crecimiento, fecha de cosecha y tratamientos post-cosecha sobre las propiedades del gel.
VIII
R1OO
OH
OAc
OO
O
OAc
OH O
HO
OAc
OAc
O
OOR2
OH
OH
HO
HO
AcO
9 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
Se encontró variabilidad en el contenido de polisacáridos y otros componentes -como
antraquinonas-, así como en la viscosidad aparente. Ésta última propiedad se relacionó
con el contenido de polisacáridos. La composición del gel varió ampliamente en las
plantas que crecieron bajo estrés acuoso y fué más uniforme en condiciones de regadío.
La composición de polisacáridos resultó poco afectada por las condiciones de
crecimiento y fecha de la cosecha. El gel fresco pierde su viscosidad durante un tiempo
corto después de la extracción debido a la degradación enzimática y la velocidad de
degradación es afectada tanto por las condiciones de cultivo como por la fecha de la
cosecha. Para prolongar la vida media del gel se desarrolló un método que no afecta sus
propiedades naturales que consistió en la adición de polisacáridos naturales que
provocan sinergismo en las características reológicas. En otra, aunque relacionada
publicación, Yaron A. y col. (1992)26 profundizan en este último procedimiento y
llegan a estabilizar el gel de Aloe vera con los polisacáridos sulfatados extraidos de las
microalgas rojas Porphyridium sp., Porphyridium aerugineum y Rhodella reticulata, así
como con la goma de xanthano. Ello se comprueba por un incremento en las
viscosidades aparentes, histéresis, etc. La adición de un polisacárido natural extraido de
una especie de microalgas rojas (2% del polisacárido sulfatado de P. aerugineum -50%
del gel de A.vera) produjo un gel pseudoplástico blando cuyas propiedades reológicas
mostraron sinergismo. La adición del polisacárido algal conservó las propiedades físicas
de los polisacáridos naturales de áloe, seguramente inhibiendo el comienzo de la
degradación de sus polisacáridos (acemanano y demás). Métodos químicos se usaron
también para retrasar la degradación microbiana. El mismo Yaron A. (1993)27, publica
la conferencia impartida en el “First International Congress of Phytotherapy (Seoul)”,
donde de nuevo dió cuenta de que los polisacáridos presentes en el gel de Aloe vera
juegan un papel clave en la actividad clínica del mismo. Mientras que algunos estudios
clínicos confirman la contribución del gel en reducir la inflamación y acelerar la
cicatrización, en algunos casos no se observa esta actividad. Esta variabilidad podría
deberse a diferencias en el origen del gel, condiciones de cultivo y tratamientos post-
cosecha. En consecuencia, el contenido en el polisacárido y consistencia del gel se
estudiaron en función de las condiciones de crecimiento en los geles obtenidos de
plantas de Aloe barbadensis Miller cultivadas en la región del Negev, en Israel. La
autodegradación de los polisacáridos en el gel recientemente producido también se
caracterizó, y se desarrolló un método para retrasar este proceso. Los polisacáridos
resultaron ser glucomananos y constituyeron el 0.2-0.3% del gel fresco y 0.8-1.2% del
material seco. La irrigación tuvo una mayor influencia sobre la composición del gel que
la edad de la hoja ó la estación. El gel fresco mostró un comportamiento pseudoplástico
que se volvió newtoniano, como resultado de la autodegradación, después de su
producción. Los polisacáridos que permanecieron después de la degradación fueron
principalmente mananos. Los azúcares totales se analizaron mediante el método del
ácido sulfúrico-fenol.
Eberendu A.N.R. y McAnalley B.H. (1994)28 patentaron, en nombre de
Carrington Labs. Ltd., un procedimiento analítico (colorimetría) para identificar y
determinar el polisacárido bioactivo –acemanano- en los productos comerciales de Aloe
vera. El método usa un agente complejante, por ejemplo rojo congo, que reacciona con
el polisacárido bioactivo presente en la bebida para dar un cambio de color. El cambio
de color detectado se compara con los cambios de color de los patrones preparados por
reacción del agente complejante con diferentes, pero conocidas, cantidades del
polisacárido bioactivo. Diferencias entre los cambios de color dependen de la cantidad
de polisacárido bioactivo en el producto. El procedimiento puede corroborarse
10 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
detectando un segundo cambio de color producido por otra alícuota del producto
comercial con otro agente complejante.
Coats B.C. (1994)29 describe un nuevo método –en frío- para producir un gel de
Aloe vera estabilizado. Éste incluye separar el gel claro a partir de la hoja entera de la
planta de Aloe vera por molienda seguida de la adición de un compuesto que disuelve la
celulosa. El gel claro de Aloe vera se obtiene a través de una serie de etapas de
filtración. Una cantidad determinada de un enzima consumidor de oxígeno, como el
glucosa-oxidasa, se adiciona a la mezcla para aminorar el O2 presente en el gel y, por
tanto, inhibir el crecimiento de bacterias aeróbicas y, luego, se aplica la luz UV para
esterilizar el gel sin necesidad de calentarlo. El material resultante se pasa a través de un
filtro orgánico para eliminar cualquier bacteria que permanezca. El producto se puede
usar en esta fase tanto para aplicaciones tópicas como internas.
Moore D.E. y McAnalley B.H. (1995)31a,b, recogiendo la previamente
comentada idea de Anon (1989)30, formalizan varias patentes sobre el procedimiento
para preparar bebidas a base de los polisacáridos mucilaginosos de Aloe vera. Se
describe la preparación de una bebida que contiene los polisacáridos mucilaginosos de
Aloe vera –incluido acemanano- precipitados con una disolución concentrada de alcohol
a partir del jugo de Aloe vera. El tratamiento completo incluye la adición de
componentes endulzantes y aromatizantes para producir una agradable bebida, tanto
carbonatada como no. Otra bebida del mismo tipo se preparó disolviendo el derivado de
Aloe vera “Mucipol” en agua. En otra variante, el procedimiento incluyó aditivos como
un conservante, un antioxidante, un endulzante y un aromatizante. La bebida resultante
no resultó amarga al paladar.
De nuevo, varios grupos siguen trabajando sobre la estabilización. Así, Seo H.-
W. y col. (1996)32 patentan, en nombre de la empresa Pacific Co. Ltd., un nuevo
método para estabilizar el color del jugo de Aloe vera. El procedimiento incluye 1)
mezclar al 0.02-0.05 % en peso el ácido L-ascórbico con el jugo de Aloe vera, 2)
calentar la mezcla a 75-85 ºC durante 5-15 minutos, 3) filtrar a vacío hasta obtener una
disolución clara, 4) tratar con carbón activo, y 5) ajustar el pH a 4.2-4.7. Jang J.-S. y
col. (1996)33 patentan, también en nombre de la empresa Pacific Co. Ltd., otro
procedimiento para preparar un jugo concentrado de Aloe vera con vitamina C y
catequina. Éste supuso: 1) pelado de las hojas de Aloe para obtener el gel, 2) adición de
vitamina C, 3) calentamiento del gel a 75-85 ºC durante 5-15 min., 4) eliminación de la
pulpa por filtración, 5) tratamiento del filtrado con carbón activo, 6) concg. a una
temperatura inferior a 50 ºC, 7) adición de un ácido orgánico para ajustar el pH a 4.2-
4.7, y 8) adición de catequina como antioxidante natural (0.03-0.10 % en peso).
Análogamiente, Byun M.-W. y col. (1997)34 realizan un estudio comparativo de
los efectos del tratamiento con radiación gamma y ozono (O3) de los “polvos de Aloe”.
La irradiación gamma a 10 kGy redujo las bacterias aerobias en su totalidad, y los
mohos / coliformes por debajo de los niveles detectables, mientras que el tratamiento
con ozono (>18 ppm, 8 horas) no fue suficiente para conseguir el mismo efecto. Por otra
parte, la irradiación gamma no afectó a los ácidos grasos, aminoácidos, minerales, valor
TBA, barbaloína y pigmentos, mientras que el tratamiento con ozono sí produjo
cambios significativos en la composición de ácidos grasos / lípidos, barbaloína y
pigmentos naturales.
11 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
También los trabajos de productos naturales continuan y Yagi A. y col. (1997)35
aislan y caracterizan una nueva glicoproteína a partir de Aloe vera con actividad
estimuladora de la proliferación celular in vitro, tanto de tejidos de hamster como
humanos. Las diferentes fracciones del gel de la hoja de Aloe barbadensis Mill. se
obtuvieron por “gel permeation” usando columnas empaquetatas con DEAE Shephadex
A-25, Sepharose 6B y Sephadex G-50. Éstas se ensayaron in vitro para su capacidad de
proliferación celular. Mientras que la fracción glicoproteínica promovió el crecimiento
celular, la fracción del polisacárido neutro no. Una fracción glicoproteínica activa (82%
de proteína y 11% de hidrato de carbono), analizada por “gel-electroforesis” sobre
poliacrilamida (PAGE y SDS-PAGE) presentó una sola banda, su tamaño molecular
resultó ser de 29 kD (en columna de Sephadex G-50) y su punto isoeléctrico fue de pH=
6.8. La deglicosilación mediante ácido trifluorometansulfónico dió una banda proteínica
con un tamaño molecular de 13 kD (por SDS-PAGE). Por otra parte, una fracción
glicoproteínica más polar y coloreada inhibió los ensayos de proliferación celular in
vitro, mostró un tamaño molecular de 15-18 kD y, por hidrólisis con H2SO4 al 10%,
liberó fragmentos moleculares de naturaleza fenólica. Por otra parte, las actividades
contrapuestas entre la glicoproteína pura, estimuladora de la proliferación celular, y la
glicoproteína mixta que, enlazada a restos fenólicos, es citotóxica, puede explicar la
variabilidad descrita en los experimentos de actividad terapéutica de los extractos de
Aloe vera. En este trabajo se dan interesantes datos experimentales, como que la
fracción no dializable de A. vera (20 g) se disuelve en 1200 ml de una disolución de
NH4HCO3 0.02 M (pH=7.8). El mismo Yagi A. (1997)36 realiza una revisión, con 19
referencias, sobre los metabolitos bioactivos de Aloe vera. Así, habla de las actividades
anti-tyrosinasa y anti-inflamatoria de aloeresin E, de la actividad inhibidora de la
peroxidación lipídica de isoaloeresin D (un fenol), así como de la actividad fisiológica
de sus geles, los efectos terapéuticos de acemanano y el aislamiento a partir del gel del
enzima glutationa-peroxidasa y de la glicoproteína aceleradora del crecimiento de los
fibroblastos de la epidermis humana.
Lee S. Y. y col. (1997)37 aislan y caracterizar de nuevo el polisacárido bioactivo
acemanano a partir de Aloe vera. El polisacárido se mostró constituido en este caso por
manosa (67%), grupos acetilo (23%) y el resto (10%) de glucosa y galactosa. Su
estructura consistió en un polímero de manosa de cadena larga con enlaces β-
(1.fwdarw.4). El azúcar y el grupo acetilo se encontraron enlazados en la
macromolécula en relación 3:1. Este polisacárido de Aloe vera se propone como un
complemento alimenticio con propiedades antivirales e inmunomoduladoras.
Joshi, S. P. (1998)38 realiza una revisión, con 35 referencias, sobre los
componentes químicos de Aloe barbadensis y su actividad biológica. Aloe Linn (familia
Liliaceae) es un género originario del trópico e introducido en la India con fines
ornamentales y medicinales. De las cuatro especies introducidas en la India, Aloe
barbadensis Miller (Aloe vera Linn) se ha adaptado a todas las regiones del estado,
incluidas las condiciones de sequía. Los “Aloes” ó jugo que fluye de las bases cortadas
transversalmente de las hojas grandes de varias especies del género Aloe, desecado, ha
sido ampliamente utilizado en la medicina tradicional de la India para el tratamiento de
diversas enfermedades relacionadas con el aparato digestivo. También se ha usado para
el tratamiento de heridas, quemaduras y trastornos de la piel. Los “aloes” que se
obtienen de A. barbadensis son conocidos en el comercio como “aloes barbados” ó
“aloes curacao”. Las propiedades purgantes de estos “aloes” se atribuyen a la presencia
de una mezcla de glicósidos que se denomina “aloína”. El gel mucilaginoso que se
12 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
obtiene de las hojas de A. barbadensis tiene buena reputación por su efecto terapéutico
en desórdenes inflamatorios. Los polisacáridos que componen dicho gel juegan,
presumiblemente, un papel clave en la actividad del mismo al contribuir tanto a la
reducción de la inflamación como a la aceleración de la curación.
Roach J. S. y col. (1997)39 presentan una conferencia en el “213th ACS National
Meeting (San Francisco)”, en nombre de Carrington Labs. Ltd., donde dan cuenta del
fraccionamiento, por tamaño molecular, de los extractos de Aloe vera para aplicarlos
como potenciales fármacos. La separación preliminar para los bioensayos previos se
obtuvo por ultrafiltración. Esta ultrafiltración se realizó mediante filtros de membrana
de polisulfona con flujo tangencial, lo que nos suministró una guía sobre qué fracciones
recoger y ensayar. El propósito final de separación se ejecutó usando cromatografía de
exclusión por tamaño molecular. Este procedimiento supuso un nuevo método para
fraccionar un extracto de Aloe vera en orden a la realización de posteriores ensayos
biológicos. El componente principal resultó ser un manano parcialmente acetilado con
enlaces de tipo β-1,4 que, en general, se denomina acemanano.
Ross, S.A. y col. (1997)40 describen un método cuantitativo que usa
cromatografía de exclusión por tamaño molecular (SEC) para determinar la
concentración del polisacárido mucilaginoso de Aloe vera (AVMP) en las preparaciones
comerciales del mismo. De las 18 preparaciones estudiadas, 9 contuvieron cantidades de
AVMP en el intervalo 0.22 – 1.30 mg/ml, 2 mostraron trazas (<0.2 mg/ml) y 7 no
dieron cantidades detectables del polisacárido. El método podría adaptarse para
estandarizar este tipo de preparaciones. El procedimiento usó patrones obtenidos de
Aloe vera, como “AVMP” y “Manapol” de los laboratorios Carrington, galactosa,
manosa, manitol y sucrosa de Fluka Chemical Corp. y dextranos de tres diferentes pesos
moleculares (580000, 2000000 y 5000000-40000000) de Sigma Chemical Co. Como
eluyente se usó agua deionizada de calidad HPLC con el conservante azida sódica
(0.05%). El equipo cromatográfico incluyó, además de un equipo HPLC, un detector de
indice de refracción –modelo 401-, un integrador HP –modelo 3396A- y una columna
“Shodex Ohpak KB-800 series SEC” instalada en un módulo controlador de la
temperatura a 30 ºC. Los tiempos de retención obtenidos se muestran en la Tabla 1.
Compuesto Tiempo de retención (minutos)
Dextrano de 5000000-40000000 5.5
AVMP 5-7 (pico ancho)
Hidroxietilcelulosa 5.4-7.2 (pico ancho)
Dextrano de 2000000 8.2
Dextrano de 580000 9.5
Manosa y/ó Manitol 10.0
Sucrosa 10.1
Galactosa 10.2
Tabla 1.- Tiempos de retención a los que salen AVMP y patrones.
La ausencia del pico del AVMP en los productos comerciales de Aloe vera
puede atribuirse a depolimerización (hidrólisis) del polisacárido ó a una fabricación
incorrecta. Los mono- y disacáridos usados normalmente como aditivos para regular el
gusto no interfieren con el análisis del AVMP. Por otra parte, los dextranos con pesos
moleculares de 500000 a 2000000 tampoco interfieren por salir en el intervalo 8.2-9.5
13 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
minutos. Sin embargo, los dextranos de alto peso molecular (5000000-40000000) y las
hidroxialquilcelulosas (hidroximetil-, hidroxietil-, hidroxipropil-celulosa, etc.)
interfieren este análisis por eluirse en la misma región que AVMP (5.4-7.2).
Observación: este método analítico se ha puesto en marcha en los laboratorios del
Departamento de Química de la ULPGC con una columna de mayor resolución,
alcanzándose progresos hacia la resolución de las señales que se superponen.
Om P.A. (1997)41 describe las diferencias entre los dos tipos de gel de Aloe vera
que hay en el comercio: los que se obtienen a partir de la hoja completa (whole leaf aloe
gel) por un lado y los que se obtienen a partir de la pulpa (standard aloe gel) por otro.
Se concluye que la concentración de los componentes químicos en los geles de aloe
comerciales pueden variar ampliamente según el campo donde se realizó el cultivo, el
mes del año en que se cosechó, la estación anual (lluviosa vs. seca) y el proceso
industrial aplicado para producirlo. Se propusieron distintos métodos analíticos para el
control de calidad de estos productos y distinguirlos de los adulterados. Se concluyó que
es necesario fijar estándares (al igual que en la leche, cuyos precios dependen del
contenido en grasa, independientemente de la época ó el campo en que las vacas hayan
pastado).
Goux W.J. and Chow J.T. (1998)42 presentan en una conferencia en el 215th
ACS National Meeting (Dallas) la caracterización de los componentes
inmunoestimuladores de Aloe barbardensis miller. Acemanano presenta una variedad
de efectos biológicos / actividades fisiológicas (curación de quemaduras, tumores,
úlceras e inflamaciones bacterianas ó fúngicas de piel). El objetivo principal de este
estudio fué definir la estructura del biopolímero activo y determinar su longitud, peso
molecular y secuencia de los hidratos de carbono y otros compuestos que configuran el
esqueleto carbonado, así como identificar la posición de sus componentes
inmunoestimuladores, como los ácidos galacturónico y glucurónico. Diferentes
aproximaciones a estos objetivos implicaron degradar el acemanano en oligosacáridos
de bajo peso molecular (DP1-DP11) usando reacciones como la hidrólisis ácida parcial
con ácido trifluoroacético, metanólisis y/ó digestión enzimática. Después de separar la
mezclas resultantes de oligosacáridos por cromatografía de exclusión de tamaño y
cambio iónico se estudiaron por NMR al objeto de poner de manifiesto la composición
total de mososacáridos y sus modos de enlazamiento.
Strickland F.M. y col. (1998)43 patentan una mezcla de oligosacáridos
obtenidos por transformación enzimática de los polisacáridos de Aloe vera que
conservan las propiedad de éstos de proteger al sistema inmunológico de la piel de
daños provocados por la radiación UV.
Yagi A. y col. (1998)44 describen un procedimiento inmunoquímico para
distinguir los geles de Aloe vera, A. arborescens and A. chinensis. El antígeno
producido en el suero del conejo por verectina, una glicoproteína estimuladora de la
proliferación de las células de la piel humana, se inmunoprecipitó con la fracción no
dializable del gel de Aloe vera. El anticuerpo de verectina mostró diferentes
inmunoreactividades frente a las fracciones no dializables de A. arborescens, A.
chinensis y A. vera: 1) En el ensayo de inmunodifusión, una linea de immunoprecipitina
se formó frente al gel de A. vera, pero no frente a los de A. arborescens ni A. chinensis.
2) En “immunoblotting” se detectó una banda inmunopositiva en la fracción no
dializable de A. vera y A. chinensis, pero no en la de A. arborescens.
14 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
Yang M.-R. y col. (1998)45 identifican un nuevo metabolito bioactivo,
denominado G1G1M1DI2, a partir del gel de Aloe vera. Evidencias químicas y
espectroscópicas indican que dicha sustancia es un glicopéptido con un tamaño de 5500
daltones (estimado por SDS-PAGE), siendo su composición en hidratos de carbono y
proteína del 20.9 % y 32.6 % respectivamente. La oxidación con periodato y la
degradación enzimática con pronasa E produjeron ambas partes moleculares, la
peptídica y el hidrato de carbono respectivamente. Este último estuvo formado por
fucosa, galactosa, glucosa y manosa en una relación molar de 0.5:2.4:48.8:48.3. La
mitad peptídica estuvo compuesta por quince aminoácidos, entre los que resultaron ser
mayoritarios el ácido glutámico y la glicina. El glicopéptido estimuló la proliferación de
las células de la piel. Se dan aquí interesantes datos experimentales, como los datos de
IR y RMN (en D2O con TSP [3-(Trimethyl-silyl)propanoic-2,2,3,3-d4 acid, sodium salt]
como patrón interno). Los reveladores en TLC sobre gel de sílice que se usaron son 1)
Disolución acuosa de Ce(SO4)2 (1%) y H2SO4 (10%) seguido de calentamiento a 110 ºC
y 2) Reactivo de Dragendorff; el revelador en TLC sobre celulosa fué una disolución
acuosa al 5% de ftalato de anilinio. Los Rf de la glicoproteína fueron, después de eluir
con n-butanol-etanol-agua (5:5:7) de 0.67 en silicagel y 0.35 en celulosa.
Shand, D.G. y col. (1999)46 patentan en nombre de Carrington Labs. Ltd.
nuevos factores bioactivos mixtos que resultan de mezclar varios componentes puros
extraídos bien de la hoja de Aloe vera, bien de algún producto resultante del procesado
de éstas, como el “gel de aloe vera bruto”, el “gel de aloe vera bruto desecado en frío”,
“manano acetilado bruto” ó el “manano de calidad farmacéutica bruto”. La separación
por tamaño molecular se acompañó de centrifugación, filtración, ultrafiltración,
cromatografía, diálisis, precipitación selectiva, ajuste del pH, irradiación,
homogeinización ó una combinación de dichos procesos. Mezclando dos o más factores
bioactivos de Aloe a diferentes concentraciones fué posible obtener un nuevo factor
bioactivo con los deseados efectos sumados o realzados por sinergismo. Así se
consiguió un factor con la óptima capacidad estimuladora de macrófagos y otro con una
potente actividad antiinflamatoria.
Femenia A. y col. (1999)47 realizaron una completa caracterización química de
la planta Aloe vera (Aloe barbadensis Miller) por disección de las hojas completas en
“pulpa” y “piel”. Un “gel mucilaginoso” extraído de la pulpa también se caracterizó. La
precipitación con etanol seguida de liofilización de dichas partes produjo las
denominadas fracciones AIRs (residuos insolubles en alcohol), lo que permitió
identificar la fracción principal como compuesta por hidratos de carbono en más del
80%. Se determinó la composición de los tipos de polisacáridos mayoritarios presentes
en las distintas fracciones AIRs. Manosa y glucosa celulósica fueron los componentes
mayoritarios en todas las AIRs. También se detectaron cantidades significativas de
polisacáridos peptídicos. La extracción secuencial de los polisacáridos presentes en las
distintas partes de la planta revelaron que dos tipos mayoritarios de polímeros de
manosa estuvieron presentes en la planta de Aloe vera. El polisacárido detectado en las
porciones “pulpa” y “gel” correspondió a un polisacárido localizado en el protoplasto de
las células parenquimatosas. Sus características estructurales y composicionales
correspondieron a los del polisacárido bioactivo previamente descrito como acemanano.
Al contrario, en el tejido de la piel, los residuos manosídicos se encuentran en un
polisacárido estructural que forma parte de las paredes celulares. Las diferencias
estructurales y composicionales entre ambos polímeros se confirmaron por análisis de
15 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
sus O-metil derivados respectivos. El hecho de que acemanano sea un polisacárido de
reserva podría ayudarnos a explicar las variaciones composicionales aportadas en la
literatura para los hidratos de carbono de Aloe vera. Por otra parte, la extracción
secuencial permitió identificar varios polisacáridos peptídicos, ricos en ácidos urónicos,
con una composición similar a la de diversos polímeros antitumorales encontrados
previamente en diferentes plantas. Se describen interesantes métodos analíticos de
humedad, lípidos, azucares solubles, proteínas, lignina, ceniza, elementos minerales
(Ca, Mg, K, Na, Fe, P, Mn, Zn, Cu), almidón, azúcares, grado de esterificación de las
sustancias pépticas y metilación. Los amplios datos analíticos describen en profundidad
la composición de las distintas partes de la planta y apoyan la anunciada actividad
antitumoral de Aloe vera. Así, un nuevo polisacárido extraido de la piel y la pulpa es
análogo en composición al descrito anteriormente en Pinus parviflora, con actividad
antitumoral, y el extraido de la pulpa y gel, acemanano, es similar al encontrado
previamente en el hongo Candida utilis, que presentó inhibición del crecimiento del
sarcoma 180 en el ratón.
Yasuda K. y col. (1999)48 describen algunas propiedades de algunos
componentes de Aloe arborescens Miller, Aloe barbadensis Miller and Aloe africana
Miller con actividad mitogénica. Previamente habían aportado que las fracciones KS-F2
(fracción no dializable de los extractos con agua caliente de la piel de Aloe arborescens
Miller), BF-F1 (fracción dializable de los extractos con agua caliente de Aloe
barbadensis Miller), AF-F1 (fracción dializable de los extractos con agua caliente), AF-
F3 (fracción no dializable de los extractos con NaOH 0.1M de Aloe africana Miller),
AS-F2 (fracción no dializable de los extractos con agua caliente de la piel de Aloe
africana Miller) y AS-F3 (fracción no dializable de los extractos con NaOH 0.1M de la
piel de Aloe africana Miller) mostraron actividad mitogénica hacia las células de ratón.
En esta publicación se aporta que un polisacárido obtenido de KS-F2 y AS-F2
que mostró fuerte actividad mitogénica fué purificado por cromatografía de cambio
iónico sobre DEAE-Toyopearl 650M. Cada una de las dos fracciones obtenidas de KS-
F2 contuvieron mayoritariamente un azúcar neutro y ácido urónico. Las tres fracciones
obtenidas de AS-F2 contuvieron un azúcar neutro y, una de ellas, contuvo ácido
urónico. Los ensayos de actividad mitogénica sugieren que la actividad se encuentra en
la fracción que contiene ácido urónico. Uno de los polisacáridos, obtenido a partir de
seis fracciones, se investigó en lo que se refiere a su composición de azúcares por
cromatografía en fase gaseosa, lo que reveló que estuvieron compuestas por grandes
cantidades de arabinosa y galactosa.
Nusrat S. Y col. (2000)49 describieron un procedimiento, comercialmente
viable, para preparar un material cristalino a partir de la hoja de Aloe vera estable y
farmacológicamente activo en lo que se refiere a la curación de heridas, quemaduras y,
en general, daños de la piel. Es compatible con otros ingredientes de cosméticos a pH =
6-8. Sin embargo, el producto se volvió susceptible de ataque microbiológico cuando se
disolvió en agua, por lo que, en este último caso, requirió emplear conservantes
químicos. A partir de 4.3 kg de pulpa de Aloe vera se obtienen 7.9 g del producto en
cuestión.
Simal S. y col. (2000)50 simularon curvas de desecación con aire de cubos de
Aloe vera y evaluaron varias de sus propiedades funcionales como 1) Capacidad de
retención de agua (WRC), 2) Hinchamiento (SW) y 3) Capacidad de adsorción de cera
(FAC). Se dió un modelo matemático que permite realizar predicciones. Las tres
16 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
propiedades funcionales presentaron un valor máximo cuando la temperatura de secado
fué 40 ºC, y decrecieron tanto a temperaturas superiores como inferiores a ésta.
Leyes E.A. y col. (2000)51 desarrollaron un proceso industrial para producir un
gel líquido de Aloe que podría usarse como materia prima en diferentes preparaciones
farmacéuticas y dietéticas. Para establecer un control de calidad de este materia prima se
desarrolló un método analítico por espectrofotometría visible (490 nm) en orden a la
determinación de los polisacáridos totales. El método se basó en la formación de
furfural por hidrólisis-deshidratación en presencia de H2SO4 y posterior generación de
un color amarillo-naranja con un reactivo de naturaleza fenólica. El método propuesto
resultó más fácil y rápido que el método gravimétrico tradicional y mostró las
necesarias especificidad, precisión, exactitud y linealidad.
Yagi A. y col. (2000)52 usaron inmunoquímicamente el antígeno producido en el
suero del conejo como respuesta a dosis progresivas de verectina, una glicoproteína de
29 kD aislada previamente de Aloe vera y cuya actividad es la de inducir la
proliferación celular de las células normales de la epidermis humana, para determinar la
distribución de la misma –verectina- en las hojas de Aloe vera durante las estaciones de
crecimiento y floración, así como para cuantificar su presencia en las plantas
regeneradas clónicamente y en geles comerciales de A. vera. Se observó que verectina
es estable en los polvos del gel de Aloe vera durante, al menos, 4 años a 4 ºC en un
desecador.
Pasco, D.S. y col. (2000)53 aislaron de Aloe vera una fracción de polisacáridos
compleja e hidrosoluble, con potente actividad inmunoestimuladora. La fracción de
polisacáridos mostró un peso molecular de unos 2.000.000 daltones y sus principales
componentes glicosídicos fueron glucosa, galactosa, manosa y arabinosa. Se abordó su
preparación farmacéutica con diferentes disolventes y excipientes. La fracción de estos
polisacáridos es útil como suplemento dietético, así como un componente para la
estandarización de los productos comerciales de Aloe vera.
Qiu Z.H. y col. (2000)54 modifican el polisacárido de Aloe barbadensis por
digestión con el enzima celulasa y su producto de reacción se purificó por diálisis,
precipitación progresiva con etanol y cromatografía de exclusión por tamaño molecular.
El polisacárido de áloe modificado y crudo (MAP) reactivó las células macrófagas y
estimuló el crecimiento de los fibroblastos. En las mismas condiciones, el gel de Aloe
barbadensis no tuvo efecto en la activación de macrófagos. MAP tuvo un tamaño
molecular de 80000 daltones, contuvo manosa, galactosa y glucosa en la relación
40:1.4:1.0 y parece ser una molécula lineal altamente acetilada. MAP previno la
supresión del sistema inmunitario, así como la liberación de factores inductores de
tumorización provocados por la radiación UVB. El oligosacárido MAP se purificó por
diálisis frente a agua destilada, seguido de precipitación por etapas con etanol al 25%,
50% y 80%. Los precipitados con etanol al 50% y 80% se purificaron por cromatografía
en columna sobre Sepharose Cl-4B (Pharmacia) y Sephadex G-100 (Pharmacia).
Elución con agua destilada dió una muestra de MAP puro que se detectó
colorimétricamente mediante el método del fenol-sulfúrico. El peso molecular
aproximado se determinó mediante una columna de Superose 12 (HR 10/30,
Pharmacia). MAP fué hidrolizado y sus monómeros se analizaron por cromatografía de
cambio aniónico de alta resolución (columna CarboPac PA1). También se analizó su
derivado metilado por GC-MS y abordó su elucidación estructural por espectroscopia de
17 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
13C-NMR la cual pone de manifiesto que se trata de una molécula poliacetilada (δ
175.5-176.6; δ 22.7-23.3). La integración de las señales correspondientes al grupo
acetilo (δ 2.41-2.06) y los protones anoméricos (δ 4.69-5.80) en el espectro 1H-NMR -se
encuentran en relación 3:1- reveló que se trata de un polisacárido con un 25% de
acetilación. También se puso de manifiesto que la mayor parte de la acetilación ocurre
en el grupo hidroxílico enlazado al carbono-6 de la manosa. El análisis NMR del
derivado metilado revela que MAP es una molécula lineal con enlaces de tipo β-1,4
como los otros polisacáridos aislados previamente de especies de Aloe.
Yasuda K. y col. (2000)55 abordaron la elucidación estructural de los
componentes con actividad mitogénica de Aloe arborescens Miller, Aloe barbadensis
Miller y Aloe africana Miller. Préviamente se había aportado que las fracciones KS-F2
(fracción no dializable de los extractos de agua caliente de la piel de Aloe arborescens
Miller) y AS-F2 (fracción no dializable de los extractos con agua caliente de la piel de
Aloe africana Miller) mostraron una elevada actividad mitogénica hacia las células de
ratón. Los polisacáridos hidrosolubles obtenidos se fraccionaron y purificaron por
cromatografía de cambio iónico sobre una columna DEAE-Toyopearl 650M. Se
analizaron las estructuras químicas de K-1, el componente con actividad mitogénica de
KS-F2 y de A-1, el de AS-F2. Arabinosa y galactosa compusieron a ambas sustancias,
tanto K-1 como A-1. La relación molar arabinosa /galactosa fué 1:1 en K-1 y 1:2 en A-1
antes de la reducción y 1:3 en ambos, K-1 y A-1 después de la reducción (el porcentaje
de galactosa se incrementó, por tanto, en K-1 y en A-1). La relación de contenidos de
azúcar neutro a ácido urónico en K-1 y A-1 fué de 1:1 y 5.6:1 respectivamente. K-1 y
A-1 se comportaron en “gel-filtration” como fracciones de alto peso molecular
(1700000 y 1750000 respectivamente). Los componentes principales en K-1 fueron
arabinosa y galactosa, lo que se dedujo de su [α]D =+127 (H2O) y un pico a ν = 890 cm-
1 en IR. También la sustancia A-1 mostró arabinosa y galactosa, lo que se dedujo de su
[α]D =-33 (H2O) y un pico a ν = 830 cm-1 en IR. Así, ambas sustancias, K-1 y A-1 están
constituidas por enlaces β-glicosídicos. Después de su hidrólisis controlada se investigó
su forma de enlazamiento por cromatografía en capa fina. Se sugirió que arabinosa y
ácido urónico se colocan en el exterior de la molécula mientras que arabinosa y
galactosa constituyen el corazón de ambas estructuras moleculares, K-1 y A-1.
Yagi A. y col. (2001)56 informaron que aloemanano marcado (F-AM) fué
metabolizado hasta pequeñas moléculas por el homogeneizado de la mucosa del
intestino delgado del ratón. El producto degradado se cromatografió a través de un
polímero altamente poroso y una columna de Sephadex LH-20 para dar un producto de
degradación con un tamaño molecular de 800 daltones, lo cual se comprobó por “gel-
permeation” a través de Sephadex G-25. Otros productos de degradación fueron
identificados por FAB-MS como hexosas (marcadas ó no). Aloemanano marcado (F-
AM) también fué metabolizado hasta pequeñas moléculas por un homogeneizado de
heces de ratón (10%). En este caso, tras seis horas de incubación y cromatografía en
columna a través de Sephadex G-25 se obtuvo una mezcla de polisacáridos (hexosa)9 y
(hexosa)12 marcados, lo que se demostró por TOF-MS.
Pugh N. y col. (2001)57 caracterizaron un nuevo polisacárido inmuno-
estimulador, denominado aloerido, aislado del jugo de Aloe vera comercial. Su tamaño
fué de 4-7 millones de daltones y el grado de acetilación de 0.91 grupos acetilo por
monómero. Sus componentes incluyeron glucosa (37.2%), galactosa (23.9%), manosa
(19.5%) y arabinosa (10.3%). Acemanano, el hidrato de carbono mayoritario de Aloe
18 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
vera, usado a la concentración de 200 µg/ml en el bioensayo de activación de
macrófagos, resultó prácticamente inactivo, mientras que aloerido, usado a la
concentración de 0.5 µg/ml en el mismo bioensayo resultó fuertemente activo. Aunque
aloerido se presentó sólo a la concentración del 0.015% del peso seco del jugo de aloe,
su potente actividad inmunoestimuladora equivale a la actividad total que mostró el
jugo crudo. Se describen métodos analíticos para acemanano y aloerido basados en
cromatografía de exclusión de tamaño (Shodex Ohpak KB-800 series SEC column, 30
ºC, 1 ml/min. de agua) y un detector diferencial de índice de refracción (modelo 401).
Los patrones fueron AVMP y Manapol, ambos de los laboratorios Carrington. Las
fracciones se separaron inicialmente por tamaño molecular mediante ultrafiltración con
membranas de tamaño de poro de 100000 y 500000 daltones. Los autores propusieron
el análisis de aloerido como un procedimiento más válido que el de acemanano en la
estandarización de los productos comerciales de Aloe vera y subrayan que las
investigaciones futuras deben de orientarse en la dirección de estabilizar este y otros
principios activos en el gel de A. vera.
Song, Y. y col. (2001)58 aislaron e identificaron el polisacárido neutro de Aloe
vera. El polisacárido se aisló del zumo fresco extraido de la pulpa de las hojas de A.
vera por cromatografía líquida sobre EDAE-Sephadex A-25 y se identificó por HPLC,
IR, TGA, 13C-NMR y análisis elemental. Por hidrólisis alcohólica se mostró que el
polisacárido es un polímetro lineal y neutro de un parcialmente acetilado β-1,4-D-
manopiranosa de alta pureza. La relación molar de D-manosa / grupo acetilo fue de
1.64:158.
Choi S.W. y col. (2001)59 usaron métodos cromatográficos, espectroscópicos y
electroforesis para aislar y caracterizar un principio activo implicado en la curación de
heridas. Resultó ser una glicoproteína, G1G1M1DI2, que mostró una sola banda en
electroforesis sobre SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel
electrophoresis), donde se reveló con un tamaño molecular de 5.5 kD. Los ensayos
biológicos indicaron que este componente está implicado en la curación de heridas del
Aloe vera por favorecer tanto la proliferación como la migración celular.
Izumi N. (2002)60 patentó en nombre de la empresa Dairy Foods K.K un nuevo
procedimiento para fabricar un jugo de Aloe vera incoloro-transparente y sin aditivos.
El jugo de Aloe vera, útil para cosmética, alimentaria, etc., se preparó por lavado,
esterilización y pelado de las hojas de A. vera seguido de eliminación de la aloina,
fibras, metales pesados, etc, a partir del gel resultante. En este proceso, el tratamiento
con calor se redujo a 60 ºC durante 30 minutos para prevenir la descomposición de los
principios activos de A. vera (polisacáridos, aminoácidos, ácido málico, etc.).
Wang L. y col. (2002)61 estudiaron los efectos de un extracto de polisacáridos
de Aloe vera (AP) sobre los peróxidos lipídicos de alto nivel (LPO) en el suero y en el
tejido hepático de ratas de laboratorio al objeto de poner de manifiesto las propiedades
antioxidantes de AP. Los resultados indicaron que dosis de AP en el intervalo 10-50 mg
/ Kg disminuyeron la concentración de LPO, tanto en el suero como en el tejido
hepático y, por tanto, se puso de manifiesto una clara actividad antioxidante del mismo.
Maeder T. (2002)62 informan sobre el interés que está adquiriendo la glucómica.
En este sentido, afirman que los glúcidos modifican muchas proteínas y lípidos de las
superficies celulares y participan en los procesos relacionados con la inmunidad y la
19 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
comunicación intercelular, desempeñando también una función activa en numerosas
patologías, tanto infecciones víricas como el cáncer. Al irse superando los obstáculos
que dificultan el desciframiento de las estructuras de los hidratos de carbono complejos
se va abriendo la puerta que conduce a nuevas medicinas.
CONCLUSIONES
1.- Estructuras moleculares.- Los hidratos de carbono que constituyen el gel de Aloe
vera cambian de estructura molecular, según se deduce de lo descrito hasta ahora:
1.1.- Mananos:
* El acemanano de los laboratorios Carrington es un polisacárido formado por una larga
cadena polimérica de manosa β-enlazada y salpicada con grupos acetilo (long-chain
polydispersed β-(1,4)-acetilated polymannose with interspersed O-acetyl groups with a
mannose monomer/acetyl ratio ≈1:1 extracted from Aloe vera) (Figura 5 y portada)23.
* Por hidrólisis alcohólica se mostró que el polisacárido es un polímetro lineal y neutro
de un parcialmente acetilado β-1,4-D-manopiranosa de alta pureza; la relación molar de
D-manosa / grupo acetilo fue de 1.64:158.
1.2.- Glucomananos:
* Un polvo blanco con la fórmula molecular (C6H10O6)n que se descompone a
271-276 ºC y que por hidrólisis rinde aproximadamente las mismas cantidades de
glucosa y manosa, así como pequeñas cantidades de ácido urónico2.
* Un polisacárido, constituido por cantidades iguales de glucosa y manosa, con
un tamaño molecular de 420 – 520 kD4.
* Cuatro glucomananos parcialmente acetilados que se diferenciaron en sus
relaciones manosa / glucosa y contenido en grupos acetilo9.
* Tres polisacáridos con pesos moleculares de 12000, 47000 y 12000; uno
contuvo sólo manosa y otro contuvo glucosa y manosa en relación 3:4. Los
monosacáridos se unen mediante enlaces –β; el glucomanano está enlazado de la forma
β-(1,4)16.
* Los polisacáridos resultaron ser glucomananos27.
* Se aisló una fracción de polisacáridos con varias longitudes de cadena; los
polisacáridos están constituidos por varios monosacáridos de los que manosa resultó
mayoritario17.
1.3.- Glucogalactomananos:
* Un polisacárido que por hidrólisis dió D-glucosa, D-manosa y D-galactosa en
proporciones molares de 2:2:1, junto con muy pequeñas cantidades de arabinosa y
ramnosa; fraccionamiento de la mezcla de polisacáridos dió un glucogalactomanano
puro10.
* Un polisacárido que se mostró constituido por manosa (67%), grupos acetilo
(23%) y, el resto (10%), de glucosa y galactosa. Su estructura consistió en un polímero
de manosa de cadena larga con enlaces β-(1,4). El azúcar y el grupo acetilo se
encontraron enlazados en la macromolécula en relación 3:137.
1.4.- Otros:
* Un polisacárido –poliurónido- con un peso molecular de 275000 – 3740003.
* Un nuevo polisacárido con propiedades químicas y gelificantes diferenciadas
de los previamente obtenidos, que se denominó CR1013, resultó ser un ácido
poligalacturónico con pequeñas cantidades de azúcares neutros24.
* Aloeferona, un nuevo polisacárido cuya fórmula molecular fué
(C322H620NS3O336P)7 (tamaño molecular de aproximadamente 70 kD)15.
20 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
* Aloerido, un nuevo polisacárido minoritario. Su tamaño fué de 4.000-7.000 kD
y el grado de acetilación de 0.91 grupos acetilo por monómero. Sus componentes
incluyeron glucosa (37.2%), galactosa (23.9%), manosa (19.5%) y arabinosa (10.3%)57.
1.5.- Glicopéptidos.-
* Dos nuevas glicoproteínas. Una de ellas coloreada, más polar (tamaño
molecular de 15-18 kD) que, por hidrólisis con H2SO4 al 10%, liberó fragmentos
moleculares de naturaleza fenólica35.
* Un glicopéptido con un tamaño de 5,5 kD, siendo su composición en hidratos
de carbono y proteína del 20.9 % y 32.6 % respectivamente45.
* Una glicoproteína, G1G1M1DI2, con un tamaño molecular de 5.5 kD59.
* Verectina, una glicoproteína de 29 kD52
2.- Actividad biológica.- Los hidratos de carbono que constituyen el gel de Aloe vera
presentan una actividad biológica variada, según se deduce de lo descrito hasta ahora:
2.1.- Actividad hipoglucémica:
* Patentan varios polisacáridos con acción hipoglucemiante14.
2.2.- Actividad estimuladora del crecimiento de fibroblastos y proliferación celular:
* Aloeferona, presentó actividad estimuladora del crecimiento de los
fibroblastos y actuó como un antídoto para el curare y la atropina en el ratón a
concentraciones de 10-25 mg / Kg15.
* Una nueva glicoproteína con actividad estimuladora de la proliferación celular
in vitro, tanto de tejidos de hamster como humanos y otra glicoproteína más polar y
coloreada con fragmentos estructurales fenólicos inhibió los ensayos de proliferación
celular in vitro. Las actividades contrapuestas entre la glicoproteína pura, estimuladora
de la proliferación celular, y la glicoproteína mixta que, enlazada a restos fenólicos, es
citotóxica, puede explicar la variabilidad descrita en los experimentos de actividad
terapéutica de los extractos de Aloe vera35.
* Un glicopéptido que estimuló la proliferación de las células de la piel45.
* Una glicoproteína, G1G1M1DI2, que está implicada en la curación de heridas
por favorecer la proliferación y la migración celular59.
2.3.- Actividad estimuladora del sistema inmunológico:
* Tres polisacáridos que producen estimulación del sistema inmunológico en el
ratón16.
* Un polisacárido de Aloe vera se propone como un complemento alimenticio
con propiedades antivirales e inmunomoduladoras37.
* Una fracción de polisacáridos compleja e hidrosoluble, con actividad
inmunoestimuladora53.
* Un nuevo polisacárido inmunoestimulador, denominado aloerido. Acemanano,
el hidrato de carbono mayoritario, usado a la concentración de 200 µg/ml en el
bioensayo de activación de macrófagos, resultó prácticamente inactivo, mientras que
aloerido, usado a la concentración de 0.5 µg/ml resultó fuertemente activo en el mismo
bioensayo57.
* Con respecto a su actividad biológica, los polisacáridos inhiben la
opsonización de zimosano en el suero humano y presentan actividad adjuvante sobre la
producción de anticuerpos específicos, así como hipersensibilidad tardía en el ratón17.
2.4.- Actividad antiinflamatoria:
Mezclando dos o más factores bioactivos de Aloe a diferentes concentraciones
fué posible obtener un nuevo factor bioactivo con los deseados efectos sumados o
21 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
realzados por sinergismo. Así se consiguió un factor con la óptima capacidad
estimuladora de macrófagos y otro con una potente actividad antiinflamatoria46.
2.5.- Actividad antitumoral:
* Los amplios datos analíticos describen en profundidad la composición de las
distintas partes de la planta y apoyan la conocida actividad antitumoral de Aloe vera;
así, un nuevo polisacárido extraído de la piel y la pulpa es análogo en composición al
descrito anteriormente en Pinus parviflora, con actividad antitumoral, y el extraído de la
pulpa y gel, acemanano, es similar al encontrado previamente en el hongo Candida
utilis, que presentó inhibición del crecimiento del sarcoma 180 en el ratón47.
2.6.- Actividad antioxidante:
* La actividad antioxidante se demostró por aplicación de un extracto de
polisacáridos a ratas de laboratorio, en dosis de 10-50 mg / Kg, lo que rebajó la
concentración de los peróxidos lipídicos de alto nivel (LPO), tanto en el suero como en
el tejido hepático61.
3.- Actividad terapéutica.-
El acemanano que producen los laboratorios Carrington es un
inmunoestimulador para el tratamiento potencial del SIDA, la colitis ulcerosa y la
cicatrización de heridas23; los laboratorios Carrington recibieron permiso del US FDA
para comercializar el “hidrogel de acemanano” en Marzo del 2000 para el tratamiento
de las heridas quirúrgicas, quemaduras de primer y segundo grado, úlceras arterio-
venosas y, finalmente, úlceras de presión y de los pies. Ha alcanzado la fase clínica III
para el tratamiento de la colitis ulcerosa, si bien este último procedimiento se paralizó
en Marzo del 2000 debido a que no se observó beneficio terapéutico para esta
indicación23. El acemanano presenta una variedad de efectos biológicos / actividades
fisiológicas (curación de quemaduras, tumores, úlceras e inflamaciones de piel de
etiología infecciosa (bacteriana ó fúngica)42.
4.- Condiciones de cultivo y de procesado del gel.-
* Se observó que las proteínas sufren desnaturalización cuando se calientan a
100 ºC. Similarmente, los hidratos de carbono y las vitaminas sufrieron degradación11.
* Los efectos de las condiciones de cultivo durante el crecimiento de la planta de
Aloe vera, la fecha de cosecha y los tratamientos post-cosecha sobre las propiedades del
gel se han estudiado, encontrándose variabilidad en el contenido de polisacáridos y
otros metabolitos -como antraquinonas-; también en la viscosidad aparente (esta última
propiedad se relacionó con el contenido de polisacáridos). La composición de
polisacáridos resultó poco afectada por las condiciones de crecimiento y fecha de la
cosecha, varió ampliamente en las plantas que crecieron bajo estrés acuoso y fué más
uniforme en condiciones de regadío25,26. Los polisacáridos constituyeron el 0.2-0.3% del
gel fresco y 0.8-1.2% del material seco, y la irrigación tuvo una mayor influencia sobre
su concentración que la edad de la hoja ó la estación27.
* La concentración de los componentes químicos en los geles de aloe
comerciales pueden variar ampliamente según la plantación donde se realizó el cultivo,
el mes del año en que se cosechó, la estación anual (lluviosa vs. seca) y el proceso
industrial aplicado para producirlo41.
5.- Estabilización.- El gel fresco de Aloe vera pierde su viscosidad durante un tiempo
corto después de la extracción debido a la degradación microbiana, enzimática y
química, y la velocidad de degradación es afectada tanto por las condiciones de cultivo
22 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
como por la fecha de la cosecha25,26. El gel fresco mostró un comportamiento
pseudoplástico que se volvió newtoniano, como resultado de la autodegradación,
después de su producción; los polisacáridos que permanecieron después de la
degradación fueron principalmente mananos27. Se han descrito diversos procedimientos
para estabilizar dicho gel consistentes en frenar la degradación microbiológica
(fermentación) y enzimática postcosecha, tanto en caliente como en frio, mediante
aditivos químicos como sin ellos. Alternativamente, se han preparado diversos tipos de
materiales sólidos (“Spray dried”, “freeze dried”, etc.).
5.1.- Preparación de materiales líquidos:
* Las disoluciones de ácido benzoico (0.2-0.3 %) son las más efectivas (para los
mucílagos de Aloe sin aloína); el conservante inhibió el mal olor y retrasó la pérdida de
su aspecto coloidal; sin embargo, durante las primeras cuatro semanas decreció
significativamente la viscosidad, al mismo tiempo que glucosa y ácido galacturónico
decrecieron en la fracción insoluble y tanto glucosa como manosa aumentaron en la
fracción soluble, hasta llegar a hacerse constantes. El pH se fijó en el rango 4.5 ±0.57.
* Se calentó (35-80 ºC), adicionar ácido ascórbico como antioxidante y ácido
cítrico hasta fijar el pH en 4-68.
* Se adicionó un catalizador de la oxidación (no tóxico) como H2O2 y calentó a
35-80 ºC, se añadió el antioxidante sorbato de potasio, un agente neutralizante (no
tóxico) como el ácido ascórbico (o H3PO4) y un surfactante (no tóxico) que impida la
coagulación del gel. Para prevenir el crecimiento bacteriano se añadió sorbitol y, para
prevenir la acumulación de oxígeno en el gel, se añadió 2,6-di-(ter-butil-α-
dimetilamino)-p-cresol12.
* Se añadió un antioxidante (Na2SO3, NaHSO3, metabisulfito sódico, edetato de
calcio, galato de praseodimio ó glicina), ajustó el pH en 3.0-3.5, adicionó NaHCO3
(0.05-5.00 %), Ca3(PO4)2 (0.1-1.0 %) y Na4-EDTA (0.001-0.200 %) y enfrió a t≤23 ºC
durante un período inferior a15 min13.
* Se adicionaron polisacáridos naturales que provocan sinergismo en las
características reológicas25, 26. La adición de un polisacárido natural extraido de una
especie de microalgas rojas (2% del polisacárido sulfatado de P. aerugineum y 50% del
gel de A.vera) produjo un gel pseudoplástico blando cuyas propiedades reológicas
mostraron sinergismo. La adición del polisacárido algal conservó las propiedades físicas
de los polisacáridos naturales de áloe, seguramente inhibiendo el comienzo de la
degradación de sus polisacáridos (acemanano y demás). También se recurrió a métodos
químicos para retrasar la degradación microbiana27.
* Un método –en frío- incluyó separar el gel claro a partir de la hoja entera de la
planta de Aloe vera por molienda y adición de un producto que disuelve la celulosa, una
serie de filtraciones, adición de un enzima consumidor de oxígeno, como el glucosa-
oxidasa, e irradiación con luz UV. El material resultante se pasó a través de un filtro
orgánico para eliminar cualquier bacteria que sobreviva. Este producto se puede usar
tanto para aplicaciones tópicas como internas29.
* Un nuevo método incluyó 1) mezclar al 0.02-0.05 % en peso el ácido L-
ascórbico con el jugo de Aloe vera, 2) calentar la mezcla a 75-85 ºC durante 5-15
minutos, 3) filtrar a vacío hasta obtener una disolución clara, 4) tratar con carbón activo,
y 5) ajustar el pH a 4.2-4.732.
* Un procedimiento para preparar un jugo concentrado de Aloe vera con
vitamina C supuso: 1) pelado de las hojas de Aloe para obtener el gel, 2) adición de
vitamina C, 3) calentamiento del gel a 75-85 ºC durante 5-15 min., 4) eliminación de la
pulpa por filtración, 5) tratamiento del filtrado con carbón activo, 6) concg. a una
23 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
temperatura inferior a 50 ºC, 7) adición de un ácido orgánico para ajustar el pH a 4.2-
4.7 y 8) adición de catequina como antioxidante natural (0.03-0.10 % en peso)33.
* Un nuevo procedimiento que no emplea aditivos consistió en lavado,
esterilización y pelado de las hojas de A. vera seguido, eliminación de la aloina, fibras,
metales pesados, etc., y tratamiento con calor (60 ºC durante 30 minutos)60.
5.2.- Preparación de materiales sólidos:
* Un material de Aloe cristalino que se reconstituye por adición de agua para
formar en un gel que conserva las mismas propiedades -físicas y químicas- que el gel
fresco inicial. Este gel es útil para fabricar preparaciones farmacéuticas, cosméticas y de
baño5.
* Un estudio comparativo de los efectos del tratamiento con radiación gamma y
ozono (O3) de los “polvos de Aloe”. La irradiación gamma a 10 kGy redujo las bacterias
aerobias en su totalidad, y los mohos / coliformes por debajo de los niveles detectables,
mientras que el tratamiento con ozono (>18 ppm, 8 horas) no fue suficiente para
conseguir el mismo efecto. Por otra parte, la irradiación gamma no afectó a los ácidos
grasos, aminoácidos, minerales, valor TBA, barbaloína y pigmentos, mientras que el
tratamiento con ozono sí produjo cambios significativos en la composición de ácidos
grasos / lípidos, barbaloína y pigmentos naturales34.
* Un material cristalino estable y farmacológicamente activo en lo que se refiere
a la curación de heridas, quemaduras y, en general, daños de la piel, compatible con
otros ingredientes usuales de los cosméticos a pH = 6-8 fue descrito. Sin embargo, el
producto se volvió susceptible de ataque microbiológico cuando se disolvió en agua, por
lo que, en este último caso, se requirieron conservantes químicos49.
* Se observó que el glicopéptido verectina es estable en los polvos del gel de
Aloe vera durante, al menos, 4 años a 4 ºC en un desecador52.
* 5.3.- Lo que queda por hacer.-
Nada se ha realizado para evitar la degradación química. Sorprende el hecho de
que muchos procedimientos de estabilización suponen fijar el pH en valores ácidos
(pH<7), que catalizan la hidrólisis de los di- y polisacáridos hasta los correspondientes
monosacáridos. Diferentes datos bibliográficos indican que los polisacáridos de Aloe
vera se pueden disolver en otras condiciones. Así, los laboratorios Carrington ya han
fabricado un hidrogel de acemanano23, también bebidas30, 31; por otra parte, se ha
descrito que la fracción no dializable de A. vera (20 g) se disuelve en 1200 ml de una
disolución de NH4HCO3 0.02 M (pH=7.8)35 y se han abordado preparaciones
farmacéuticas de los polisacáridos de A. vera con diferentes disolventes y excipientes53.
Según Pugh N. Y col. (2001)57, las investigaciones futuras deben de orientarse en la
dirección de estabilizar los principios activos (aloerido, acemanano, etc.) en el gel de A.
vera 57. El principio de estos trabajos suponen, sin duda, buscar el pH al que dichos
metabolitos son más estables y tendrían que comenzar por la obtención de curvas del
tipo Caloerido = f (t, pH), Cacemanano = f(t, pH), etc., para a continuación fabricar un
gel de Aloe vera con aquel disolvente (pH) que mejor conserve la integridad de todos y
cada uno de sus principios activos.
24 Informe técnico AVMP. Francisco Javier Toledo Marante Ruggero Zeni
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