Conference PaperPDF Available

Development of Fully Automated Multiplex Assay for Measurement of Thyroid-stimulating hormone, T4, 17-OHP, and IRT

Authors:

Abstract

Introduction: The variation in the incidence of diseases related to newborn screening is an imminent factor for differentiation in the process of implementation of existing programs and priorities. In Brazil, the Ministry of Health has been reinforcing the policy for implementation, in all states of Phase III (Cystic Fibrosis) and the inclusion of Phase IV (Congenital Adrenal Hyperplasia and Biotinidase Deficiency). INTERCIENTIFICA, in order to meet the needs of its market, developed a solution in a fully automated system with multiplex assay through NeoMAP 4 Plex kit (TSH/T4/17-OHP and IRT). Objective: To present the performance of NeoMAP 4 Plex product in a fully automated system for Newborn Neonatal Screening of congenital hypothyroidism, congenital adrenal hyperplasia, and cystic fibrosis in direct comparative with fluorimetric product which analyzes each parameter individually. Methods: The evaluation assays used samples of newborn screening laboratories with NeoMAP 4plex Kit, associating Nimbus reader equipment to Luminex 200/Magpix®. For direct comparative, kits and fully automated equipment using the fluorimetric method were used. Results: The results demonstrate the reproduction of sample results when compared to retrospective results with a high level of concordance for all parameters, in addition to advantages related to the use of multiplex analysis technology. Conclusion: The fully automated system associated with the use of the NeoMAP 4 Plex Kit has shown to be best option for Newborn Screening of congenital hypothyroidism, congenital adrenal hyperplasia, and cystic fibrosis.
automatizado y Multiplex para Pesquisa Neonatal de Hipotiroidismo
Introducción
Congénito, Hiperplasia Suprarrenal Congénita e Fibrosis Quística. El
La inclusión de nuevas enfermedades en Pesquisa Neonatal es una
nuevo sistema es totalmente configurable para satisfacer los
evolución esencial, un proceso continuo y de constante discusión. En
diferentes volúmenes y necesidades de cada uno de los laboratorios
Brasil el Ministerio de Salud ha estado aplicando políticas para la
que forman parte del Programa Nacional de Pesquisa Neonatal.
implementación total de la fase III (Fibrosis Quística) y la inclusión de
Las Pruebas (IRT/TSH/T4/17-OH) se ejecutan simultáneamente a
la fase IV (Hiperplasia Suprarrenal Congénita y Deficiencia de
través de la superficie de microesferas identificadas internamente
Biotinidasa). INTERCIENTIFICA, con el fin de satisfacer las
® ®
por color. Un lector, Luminex 200/Magpix , equipado con 2 láseres
necesidades de su mercado, ha desarrollado la solución de un
(532/635nm), sistema de flujo continuo y procesadores de alto
sistema totalmente automatizado con prueba multiplex a través del
®* rendimiento asociados con el software, realiza la cuantificación de
Kit NeoMAP 4 Plex (TSH/T4/17-OHP e IRT).
los parámetros (20-30 segundos por muestra). No hay ninguna
Todos los productos de INTERCIENTIFICA son fabricados en Brasil
interferencia del usuario durante todo el proceso. En el producto
dentro de la certificación de buenas prácticas de manufactura, clase
utilizado en la comparación no-multiplex con metodología
III y están debidamente registrados en la ANVISA.
fluorimétrica, una microplaca es preparada para cada prueba (TSH,
T4, 17-OH e IRT). El tiempo de procesamiento de ensayo con los
Objetivos
®tiempos de incubación para cada parámetro sería más de 15 horas.
Presentar el rendimiento del producto NeoMAP 4Plex en un sistema Para la evaluación comparativa de resultados fueron usados dos
totalmente automatizado para Pesquisa Neonatal de Hipotiroidismo laboratorios diferentes, con rutinas de 8 a 9 mil muestras por mes. Se
Congénito, Hiperplasia Suprarrenal Congénita y Fibrosis Quística en utilizaron 1101 muestras: 347 muestras de laboratorio privado y 754
comparación directa con el producto por detección fluorimétrica muestras de laboratorio público.
individualmente para cada parámetro.
Resultados
Los resultados muestran la reproducción de las muestras cuando se
comparan con resultados y clasificación retrospectivos, con alto
nivel de uniformidad para todos los parámetros y las ventajas
relacionadas con el uso de la tecnología de análisis múltiplex. Entre
los resultados, podemos destacar el tiempo de procesamiento
reducido por 4 veces, el menor uso de la muestra y el tiempo de
preparación de la microplaca con muestras.
Metodología
Fueron utilizados muestras de los laboratorios de Pesquisa Neonatal
® ®** ®***
usando el Kit NeoMAP 4Plex con el equipo Nimbus Luminex
®***
200/MagPix . Para la comparación directa se utilizaron los kits y
equipos totalmente automatizados que utilizan el todo por
detección fluorimétrica.
El sistema automatizado Multiplex (cuantificación de parámetros
®
simultáneamente) asociado con el producto NeoMAP 4Plex fue
diseñado para facilitar el aumento de la productividad con menor
carga de trabajo, minimizar el uso de la muestra y el tiempo del
proceso, toda vez que se realizan 4 análisis simultáneamente. Los
®
reactivos contenidos en el Kit NeoMAP 4Plex están listos para su
utilización y tienen compartimento y posición individual en el equipo.
Las microplacas son posicionadas en una ubicación específica y
automáticamente analizadas por la identificación de códigos de Conclusiones
barras que integran automáticamente la identificación de las Mejorar el tiempo de procesamiento es muy importante en la
muestras a través del sistema de interconexión. aplicación de nuevas enfermedades y el sistema ofrecido por
El tiempo medio de procesamiento de 8 microplacas es de 11-12 horas, INTERCIENTIFICA puede mejorar el tiempo de procesamiento
entregando los primeros resultados multiplex después de 3 horas mediante la introducción de 2 nuevos parámetros (17-OH y T4) en las
(TSH/T4/IRT/17-OH). rutinas ya realizadas de TSH e IRT dentro del Programa Nacional de
La prueba se realiza simultáneamente en el mismo pocillo para los 4 Pesquisa Neonatal. El resultado de este desarrollo es un conjunto de
parámetros (TSH/T4/IRT/17-OH). El resultado obtenido con el kit innovaciones a través de un sistema que permite duplicar la
®
NeoMAP 4Plex representa el promedio de 50 réplicas para cada capacidad de producción del laboratorio sin necesidad de modificar
parámetro, un nivel de precisión que no se puede comparar con los la estructura física y recursos humanos y garantizando la mayor
todos tradicionales que solo lo hacen una vez por pocillo y por calidad, precisión y seguridad. El sistema completamente
prueba. Para la automatización del sistema, INTERCIENTIFICA ®
automatizado asociado al uso del Kit NeoMAP 4 Plex es la mejor
desarrolló una solución basada en la plataforma de la compañía opción para la Pesquisa Neonatal de Hipotiroidismo Congénito,
Hamilton Corp, MICROLAB NIMBUS con las piezas, ajustes, protocolos Hiperplasia Suprarrenal Congénita y Fibrosis Quística.
de software y trabajo que se integraron como un sistema totalmente
Marcador Unidad CV% LoD
IRT ng/mL 4.1 1,00
17OH ng/ mL 7.1 2,50
TSH µIU/mL 3.8 0,90
T4 µg/dL 2.2 1,6
®
Fig. 4 - Kit NeoMAP 4plex, analisis cuantitativo IRT/17-OH/TSH/T4
®
* NEOMAP es una marca registrada de INTERCIENTIFICA
** NIMBUS es una marca registrada de Hamilton Corp.
*** Luminex/ MagPix es una marca comercial de Luminex Corporation.
INTERCIENTIFICA - Av. Shishima Hifumi 2911 – Urbanova, Parque Tecnológico UNIVAP - Mod. 306-309
12244-000 , São José dos Campos, SP – Brasil
Tel. 55 (12) 3949-9700
www.intercientifica.com.br
DESARROLLO DEL ENSAYO MÚLTIPLEX
COMPLETAMENTE AUTOMATIZADO PARA LA
CUANTIFICACIÓN DE TSH, T4, 17-OHP Y IRT
Fig. 3 - Análisis de correlación del producto NeoMAP 4 Plex en un sistema totalmente automatizado y Multiplex, frente al producto de
análisis individual, fluorimétrico de tiempo resuelto con equipo de acceso aleatorio.
Sampaio Filho, C.A.(1); Veturiano, R.(1); Luques, A.H(1).; Frias, F(1).; Silva, V(1).; Gil, G.P(1).;, Gallo, B(1)., Pires, J.S.C(1).;
(1) - Intercientifica
®
Fig. 1 Sistema Totalmente Automatizado Multiplex configurado para utilizar el Kit NeoMAP 4plex, (TSH/T4/17OH/IRT).
IRT (ng/ml) - Comparative Method
IRT (ng/ml) - Comparative Method
17-OHP (ng/ml) - Comparative Method
17-OHP (ng/ml) - Comparative Method
TSH (uIU/ml) - Comparative Method
TSH (uIU/ml) - Comparative Method
T4 (ug/dL) - Comparative Method
T4 (ug/dL) - Comparative Method
ResearchGate has not been able to resolve any citations for this publication.
ResearchGate has not been able to resolve any references for this publication.