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Copyright Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 69451 Weinheim, 2014
Recognition of the DNA Minor Groove by Thiazotropsin
Analogues
Hasan Y. Alniss ,[a, d] Marie-Virginie Salvia,[b] Mykhailo Sadikov,[b] Igor Golovchenko,[b]
Nahoum G. Anthony,[c] Abedawn I. Khalaf,[b] Simon P. MacKay,[c] Colin J. Suckling,[b] and
John A. Parkinson*[b]
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*%5+&5* #
"
"
/" != * + " 6 C9
Chemical Shift:
1
H (ppm)
H8
H6
H2
H5
CH
3
H1´
H2´
H2´´
H3´
H4´
H5´
H5´´
GH1/TH3
H41
H42
Base
C1 7.635 5.941 5.763 1.893 2.384 4.711 4.078 3.728 3.728
G2 7.980 5.456 2.742 2.811 5.015 4.322 3.983 3.983 13.01
A3 8.244 7.920 6.275 2.729 2.928 5.080 4.497 4.242 4.176
C4 7.203 5.237 5.603 1.939 2.339 5.081 4.281 4.162 4.162 8.196 6.509
G5 7.839 5.889 2.618 2.738 4.983 4.367 4.133 4.051 12.90
C6 7.297 5.318 5.691 2.075 2.415 4.856 4.194 4.145 4.145 8.324 6.509
G7 7.908 6.005 2.655 2.815 4.978 4.394 4.149 4.088 12.88
T8 7.286 1.458 6.058 2.093 2.475 4.880 4.222 4.141 4.141 13.80
C9 7.521 5.739 5.731 2.049 2.397 4.871 4.141 4.081 4.081 8.690 7.077
G10 7.980 6.199 2.441 2.766 4.708 4.085 4.085 4.085
"
/" != * +" C 9
E:6
Chemical Shift:
1
H (ppm)
H8
H6
H2
H5
CH
3
H1´
H2´
H2´´
H3´
H4´
H5´
H5´´
GH1/TH3
H41
H42
H21
H22
Base
C1 7.660
5.951
5.795
1.926
2.424
4.745
4.103
3.755
3.755
G2 8.008
5.624
2.769
2.879
5.063
4.366
4.012
4.012
12.95
A3 8.312
7.937
6.093
2.684
2.794
5.094
4.465
4.231
4.231
C4 7.387
5.322
5.909
1.893
2.087
4.944
4.187
4.190
4.190
7.725
6.119
G5 7.920
5.390
2.458
2.604
4.677
2.247
3.847
3.501
13.20 8.022
8.497
C6 7.065
5.659
5.469
1.555
2.304
4.642
2.214
3.810
3.625
8.465
6.295
G7 7.847
5.304
2.180
2.745
4.688
3.845
3.502
3.502
13.36 8.031
8.499
T8 6.931
1.678
5.528
1.721
1.900
4.579
2.262
3.886
3.652
13.90
C9 7.459
5.726
5.676
2.165
2.393
4.899
4.174
4.021
3.591
8.808
6.962
G10 8.006
6.223
2.439
2.675
5.064
4.136
4.136
4.136
"
/ " != C∆δ9 C∆δ9 GδC*% +" 9δC* +" 9 6 C9
*
8:#
4H % % + " # *7A* % ∆δI # 7%F%*#
:5 ** ∆δI # #
Chemical shift differences:
1
H (ppm)
H8
H6
H2
H5
CH
3
H1´
H2´
H2´´
H3´
H4´
H5´
H5´´
GH1/TH3
H41
H42
H21
H22
Base
C1
0.025 0.010 0.032 0.033 0.040 0.034 0.025 0.027 0.027
G2
0.028 0.168 0.027 0.068 0.048 0.044 0.029 0.029 -0.060
A3
0.068 0.017
-0.182 -0.045 -0.134 0.014 -0.032 -0.011 0.055
C4
0.184 0.085 0.306 -0.046 -0.252 -0.137 -0.421 0.027 0.027 -0.471 -0.390
G5
0.081 -0.499 -0.160 -0.134 -0.306
-
2.120
-0.286
-
0.550
0.300 n/a n/a
C6
-0.232 0.341 -0.222 -0.520 -0.111 -0.214
-
1.980
-0.335
-
0.520
0.141 -0.214
G7
-0.061
-
0.701
-0.475 -0.070 -0.290
-
0.892
-0.304
-
0.586
0.480
T8
-0.355 0.220
-
0.530
-0.372
-
0.575
-0.301
-
1.960
-0.255 -0.489 0.110
C9
-0.062 -0.013 -0.055 0.116 -0.004 0.028 0.033 -0.060 -0.490 0.118 -0.115
G10
0.026 0.024 -0.002 -0.091 0.356 0.035 0.051 0.051
"
/" != * +" C 9
E&#>146
Chemical Shift:
1
H (ppm)
H8
H6
H2
H5
CH
3
H1´
H2´
H2´´
H3´
H4´
H5´
H5´´
GH1/TH3
H41
H42
H21
H22
Base
C1
7.630
5.927
5.772
1.887
2.386
4.724
4.075
3.275
3.250
G2
7.987
5.567
2.740
2.816
5.047
4.340
4.104
3.984
13.001
A3
8.395
8.005
5.983
2.617
2.927
5.111
4.505
4.260
4.178
C4
7.677
5.466
6.283
1.868
2.249
4.635
4.268
3.319
3.853
7.498
6.500
T5
7.268
1.725
4.535
1.902
2.198
4.721
2.771
3.711
3.558
13.12
A6
8.045
7.906
5.406
2.257
2.752
4.707
2.692
3.848
3.259
G7
7.686
5.260
2.105
2.612
4.678
2.580
3.882
3.552
12.79 8.515
6.172
T8
6.834
1.566
5.452
1.630
1.716
4.469
2.166
3.661
3.529
13.85
C9
7.394
5.638
5.553
2.120
2.308
n.a. 4.014
n.a. n.a. 8.712
6.883
G10
7.964
6.203
2.640
2.410
4.699
4.216
4.069
4.069
##H*
@
"
/ C∆δ9C∆δ9GδC*% +" 9δC*+ " 9 6 C 9
*>14#
Chemical Shift:
1
H (ppm)
H8
H6
H2
H5
CH
3
H1´
H2´
H2´´
H3´
H4´
H5´
H5´´
GH1/TH3
H41
H42
H21
H22
Base
C1
0.011 0.011 0.027 0.016 0.014 0.026 0.008 n/a n/a
G2
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A3
0.155 -0.301 -0.148 -0.003 0.043 -0.006 0.023 -0.017
C4
0.409 0.260 -0.484 -0.072 -0.219 -0.058 0.055 -0.482
-
0.505
-0.150
T5
-0.065 0.132
-
1.149
-0.200 -0.277 -0.156
-
1.354
-0.440 n/a n/a
A6
-0.187
0.72
0
-
0.652
-
0.515
-0.152 -0.346
-
1.743
-0.242
-
0.916
G7
0.092
-
0.607
-0.367 -0.101 -0.189
-
1.800
-0.373
-
0.729
0.060
T8
-0.426 n/a 0.304
-
0.586
-0.436
-
0.727
-0.392
-
2.057
-
0.695
0.150
C9
-0.118 -0.285 -0.182 0.061 -0.082 -0.085 0.080 -0.140
G10
0.011 0.035 0.003 0.020 0.005 0.015
4H % % + " # *7A* % ∆δI # 7%F%*#
:5 ** ∆δI # #
"
/" != * >14 6 C9
Chemical Shift:
1
H (ppm)
H1 H2 H3 H5 H7 H9 H11 H14 H16 H18 H21
8.455
7.532
7.436
8.764
9.738
6.045
7.637
10.930
6.426
7.882
10.65
0
Chemical Shift:
1
H (ppm)
H25 H29 H30 H31 H32 H33 HM1 HM2 HM3 HM4 HM
(6&7)
3.583
8.279
3.421
2.068
3.231
4.820
3.971
3.872 1.082
1.197
3.029
N
CH
3
O
N
S
N
O
N
CH
3
N
N
O
H
3
C
N
H
3
C
N
O
CH
3
H
3
C
N
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
1
2
3
7
9
5
11
HM1
14
16
18
HM2
21
HM4
HM3
29
HM6 HM7
33
30
30
31
31
32
32
25
0
" $ * * % C9
7 6 >1#
Structure
free DNA Complex
NOE peak assignments
DNA intra-residue
265 336
DNA inter-residue
126 123
DNA inter-strand
- 21
DNA-ligand
- 173
Intra-ligand
- 62
Inter-ligand
- 41
Total NOE peak assignments 391 756
Amber input after conversion based on
duplex symmetry
a
603 968
Interproton distances 433 798
Interproton distances used after error
checking 418 766
Average atomic rmsd
b
(Å) 0.88 ± 0.12 2.20 ± 0.6
Distance restraint violations:
≥ 0.05 Å
c
7 5
≥ 0.10 Å
d
48 3
≥ 0.20 Å
e
36 0
> 0.50 Å
f
1 0
*D-%D% *-J D
" ? $ #
%
&* & &
%!+ #
+&& *
-∆ # K≤∆L # K#
# K≤∆L # K#
# K≤∆≤ # K#
∆I # K#
,
" %7 * * % C9
7 6 8:#
Structure
Free DNA Complex
NOE Assignments
DNA intra-residue
137 318
DNA inter-residue
68 141
DNA inter-strand
2 16
DNA-ligand
- 176
Intra-ligand
- 63
Inter-ligand
- 26
Total NOE peak assignments 207 740
Amber input after conversion based on
duplex symmetry
a
425 958
Interproton distances 253 791
Interproton distances used after error
checking 239 749
Average atomic rmsd
b
(Å) 1.82 ± 0.52 1.72 ± 0.34
Distance restraint violations:
≥ 0.05 Å
c
17 12
≥ 0.10 Å
d
55 73
≥ 0.20 Å
e
77 48
> 0.50 Å
f
7 3
*D-%D% *-J D
" ? $ #
%
&* & &
%!+ #
+&& *
-∆ # KL∆L # K#
# K≤∆L # K#
# K≤∆≤ # K#
∆I # K#
1
& ' ( !(
.!+ - 8E% * #
C9 & 8 +" * %5
D
K
C -+-C5G 9 %5
)**- 9- * % K C9- %5 C%G9F
&5 C9#C9 +" *
& 5 C -+-C5
G 9 %5 )**- 9- * % K C9-
%5 C%G9#C9$E% " ? $
# 5 * " M % (*& 5
E5
>& #!+&&" M %
C > -&59 *
/>$
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# ) 5 * ) &* % !+
*5 5 &*# !+
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" != 8 :C 9
>14C9
6&% #
' !#) !#!
O#.#=5D-# /#: *$$+ - ,H@#" *
$E!5 7!+5 D#
10
-
mer DNA
-
ligand complex: initial minimization prior to MD
&cntrl
imin = 1,
maxcyc = 500,
ncyc = 250,
ntb = 0,
igb = 0,
cut = 12
/
10
-
mer DNA
-
ligand
complex: MD in
-
vacuo, 12 angstrom cut off
&cntrl
imin = 0, nmropt=1, ntb = 0,
igb = 0, ntpr = 100, ntwx = 100,
ntt = 3, gamma_ln = 1.0,
tempi = 300.0, temp0 = 300.0
nstlim = 50000, dt = 0.001,
cut = 12.0
&end
&wt type='REST', istep1=0,istep2=1000,value1=1.0,
value2=1.0, &end
&wt type='END' &end
DISANG=filename.rest
LISTOUT=POUT
;
" != 8 : C9
>14C9
66&#
' , #
' -, -)
./"
Initial minimization fix solute minimized solvent+ions 12.0 cut
&cntrl
imin =1,
maxcyc =1000,
ncyc =500,
ntb = 1,
ntr = 1,
cut = 10
/
Hold The solute fixed
500.0
RES 1 20
END
END
initial minimization whole system
&cntrl
imin = 1,
maxcyc = 2500,
ncyc = 1000,
ntb = 1,
ntr = 0,
cut = 10.0
/
10
-
mer DNA
-
ligand complex: 20ps MD
with res on DNA
&cntrl
imin = 0,
irest = 0,
ntx = 1,
ntb = 1,
cut = 10,
ntr = 1,
ntc = 2,
ntf = 2,
tempi = 0.0,
temp0 = 300.0,
ntt = 3,
gamma_ln = 1.0,
nstlim = 10000, dt = 0.002
ntpr = 100, ntwx = 100, ntwr = 1000
/
Keep DNA fixed with weak restraints
10.0
RES 1 20
END
END
' ! 0 ) !1 #! (
10
-
mer DNA
-
ligand complex: Production run
&cntrl
imin = 0, nmropt=1, irest = 1, ntx = 7,
ntb = 2, pres0 = 1.0, ntp = 1,
taup = 2.0,
cut = 10.0, ntr = 0,
ntc = 2, ntf = 2,
tempi = 300.0, temp0 = 300.0,
ntt = 3, gamma_ln = 1.0,
nstlim = 50000, dt = 0.002,
ntpr = 100, ntwx = 100, ntwr = 1000
&end
&wt type='REST', istep1=0,istep2=1000,value1=1.0,
value2=1.0, &end
&wt type='END' &end
DISANG=ACTAGT.rest
LISTOUT=POUT
"*" ? $ 6% >14+ " C 9
? !P ? !P)(? J P:" + N .P:" + M P+
/Q /@Q #1#1 #1
/0 RQ#0;@ #0;1 #0;0
/0 /@Q@#1 @# @#;
/0 /Q# ; # #
/0 /Q#@ #@@ #@
/0 /#@ #@ #@
/Q /Q# , # 1 # 1
/Q /Q#,1 #,1 #,1
/Q /0#;00 #;0, #;00
/Q /@Q@#; @#0 @#
/Q /Q#@0 #@1 #@,
/Q /#;1; #;; #;;
/Q /0#0 #0 #0
/Q /Q#@@ #@@ #@@
/Q /Q#,0 #1 #,1
/Q /Q#1,, #1,1 #1,,
/Q /@Q#;@ #;0 #;
/Q /@Q#; #;, #;
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