Conjugated linoleic acid suplementation decreased the body fat in Wistar rats

Abstract

Conjugated linoleic acid, a group of positional and geometric isomers of linoleic acid, has been greatly investigated due to its effect on body composition, mainly the reduction of body fat. The purpose of this study was to evaluate the effect of conjugated linoleic acid supplementation on the body composition of healthy, growing Wistar rats. Forty male Wistar rats were divided into 4 groups and supplemented daily for 3 weeks with AdvantEdge® conjugated linoleic acid (EASTM) at concentrations of 1.0%, 2.0% and 4.0% of the daily feed intake, corresponding to groups AE1, AE2 and AE4, and with linoleic acid at 2.0% (control) corresponding to group C. The animals were supplemented via a stomach tube. For the body composition analyses, the gut contents were removed to obtain the empty carcass weight. The carcasses were then frozen in liquid nitrogen, chopped, dried, ground and stored at –25ºC, until analyzed for water, ash, protein and fat. The AE1 group showed higher feed intake and weight gain, but did not differ in food efficiency from the other groups (p< 0.05). In terms of body composition, body fat reduced in groups AE2 (11.2%) and AE4 (11.6%), as compared to the control (13.9%). Conjugated linoleic acid supplementation at a rate of 2.0% and 4.0% with respect to the daily feed intake, decreased body fat by 18.0% in Wistar rats.

Full text

ÁCIDO LINOLÉICO CONJUGADO E GORDURA CORPORAL | 561
Rev. Nutr., Campinas, 18(4):561-565, jul./ago., 2005 Revista de Nutrição
1Curso de Pós-Graduação em Alimentos e Nutrição, Faculdade de Engenharia de Alimentos, Universidade Estadual de
Campinas. Campinas, SP, Brasil.
2Departamento de Alimentos e Nutrição, Faculdade de Engenharia de Alimentos, Universidade Estadual de Campinas. Caixa
Postal 6121, 13083-862, Campinas, SP. Correspondência para/Correspondence to: A.C. OLIVEIRA. E-mail:
<admarco@fea.unicamp.br>.
NOTA CIENTÍFICA | NOTE RESEARCH
A suplementação com ácido linoléico conjugado
reduziu a gordura corporal em ratos Wistar
Conjugated linoleic acid suplementation
decreased the body fat in Wistar rats
Adriana Prais BOTELHO1
Lilia Ferreira SANTOS-ZAGO1
Soely Maria Pissini Machado REIS2
Admar Costa de OLIVEIRA2
R E S U M O
O ácido linoléico conjugado, um conjunto de isômeros geométricos e de posição do ácido linoléico, vem
sendo muito estudado devido ao seu efeito sobre a composição corporal, promovendo redução da massa
gorda. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação com ácido linoléico conjugado sobre a
composição corporal de ratos Wistar saudáveis em crescimento. Um total de 40 ratos, divididos em quatro
grupos, foram suplementados diariamente durante três semanas com AdvantEdge® ácido linoléico conjugado
(EASTM) nas concentrações 1,0%, 2,0% e 4,0% sobre o consumo diário de dieta, constituindo, respectivamente,
os grupos AE1, AE2 e AE4, e com ácido linoléico na concentração de 2% sobre o consumo diário de dieta,
constituindo o grupo-controle. Os animais foram suplementados por meio de entubação orogástrica. Para a
avaliação da composição corporal centesimal foi removido o conteúdo intestinal para obtenção da carcaça
vazia. Em seguida, a carcaça foi congelada em nitrogênio líquido, fatiada, liofilizada, moída e armazenada
a -25°C, até o momento das determinações de umidade, cinzas, proteína bruta e gordura. O grupo AE1
apresentou maior consumo de dieta e ganho de peso, mas não diferiu quanto à eficiência alimentar dos
demais grupos (p≤0,05). Em relação à composição corporal, constatou-se redução dos teores de gordura
corporal dos grupos AE2 (11,2%) e AE4 (11,6%), quando comparados ao teor do grupo-controle (13,9%).
A suplementação com ácido linoléico conjugado nas concentrações de 2,0% e 4,0% sobre o consumo diário
de dieta promoveu redução de gordura corporal de 18,0% nos ratos Wistar.
Termos de indexação: ácido linoléico, suplementação, ganho de peso, ratos.
A B S T R A C T
Conjugated linoleic acid, a group of positional and geometric isomers of linoleic acid, has been greatly
investigated due to its effect on body composition, mainly the reduction of body fat. The purpose of this study

562 |A.P. BOTELHOI et al.
Rev. Nutr., Campinas, 18(4):561-565, jul./ago., 2005
Revista de Nutrição
was to evaluate the effect of conjugated linoleic acid supplementation on the body composition of healthy,
growing Wistar rats. Forty male Wistar rats were divided into 4 groups and supplemented daily for 3 weeks
with AdvantEdge® conjugated linoleic acid (EASTM) at concentrations of 1.0%, 2.0% and 4.0% of the daily feed
intake, corresponding to groups AE1, AE2 and AE4, and with linoleic acid at 2.0% (control) corresponding to
group C. The animals were supplemented via a stomach tube. For the body composition analyses, the gut
contents were removed to obtain the empty carcass weight. The carcasses were then frozen in liquid nitrogen,
chopped, dried, ground and stored at –25ºC, until analyzed for water, ash, protein and fat. The AE1
group showed higher feed intake and weight gain, but did not differ in food efficiency from the other
groups (p≤ 0.05). In terms of body composition, body fat reduced in groups AE2 (11.2%) and AE4 (11.6%), as
compared to the control (13.9%). Conjugated linoleic acid supplementation at a rate of 2.0% and 4.0% with
respect to the daily feed intake, decreased body fat by 18.0% in Wistar rats.
Indexing terms: linoleic acid, supplementary, weight gain, rats.
I N T R O D U Ç Ã O
O ácido linoléico conjugado (CLA), um
grupo de isômeros de posição e geométricos com
duplas ligações conjugadas do ácido octadeca-
dienóico (C18:2), é encontrado em pequenas
quantidades em uma grande variedade de
alimentos e estima-se a existência de 56 possíveis
isômeros1,2. A discussão a respeito da suplementa-
ção com CLA tem sido acirrada, frente aos efeitos
fisiológicos reportados por muitos grupos de
pesquisa nos últimos anos. Sendo assim, são
muitas as investigações no sentido de avaliar os
efeitos benéficos do consumo de CLA, como
alterações na composição corporal, redução da
aterosclerose, prevenção e tratamento do diabetes
mellitus tipo 2, potencialização da mineralização
óssea, modulação do sistema imune e efeito
antitrombogênico1. Possíveis efeitos adversos,
como piora da resistência à insulina e aumento
da suscetibilidade à autoxidação lipídica, também
foram estudados3,4. O CLA pode ser originado no
rúmen por meio da bioidrogenação incompleta
de ácidos graxos poliinsaturados provenientes da
dieta e também endogenamente, pela dessatura-
ção do ácido graxo C18:1 trans 11. Na
bioidrogenação, o isômero cis9, trans 11 é o
primeiro intermediário formado a partir do ácido
linoléico pela ∆12 e ∆11 trans isomerase. Em
seguida, ocorrem reduções das ligações cis, até
C18:1 trans 11, que podem ainda ser reduzidas
até C18:0. Na produção endógena do CLA, o
ácido graxo C18:1 trans 11 sofre dessaturação pela
enzima ∆9 dessaturase presente na glândula
mamária e no tecido adiposo5. Um dos efeitos
mais estudados com relação à suplementação de
CLA é sua capacidade em alterar a composição
corporal, promovendo aumento da massa magra
e redução da massa gorda em diferentes espécies,
tais como: camundongos6,7, ratos8,9, hamster10,
porcos11,12, humanos13,14, entre outras. Os possíveis
mecanismos de ação que explicam esse efeito
são diminuição da proliferação e diferenciação de
pré-adipócitos evidenciadas pela inibição do
receptor ativado por proliferadores de peroxissoma
gama (PPARγ), aumento do gasto energético,
alteração da atividade das enzimas carnitina
palmitoiltransferase e lipase lipoprotéica e da
concentração de leptina15-19.
M É T O D O S
Foram utilizados 40 ratos machos saudá-
veis e recém-desmamados, da linhagem Wistar,
provenientes do Centro Multidisciplinar de
Investigação Biológica da Universidade Estadual
de Campinas. Durante todo o período experimen-
tal os animais permaneceram em gaiolas de
crescimento individuais consumindo água e dieta
AIN93G20 com concentração de proteína de 12%21
sob o sistema de livre acesso, sendo a temperatura
e a umidade do ar controladas na faixa de
22 ± 1ºC e 60%-70%, respectivamente, e ciclo
de claro/escuro de doze horas. Após um período
de sete dias de adaptação, os ratos foram
divididos aleatoriamente em quatro grupos

ÁCIDO LINOLÉICO CONJUGADO E GORDURA CORPORAL | 563
Rev. Nutr., Campinas, 18(4):561-565, jul./ago., 2005 Revista de Nutrição
(controle e experimentais) e suplementados por
21 dias. O acompanhamento do ganho de peso e
o consumo de dieta eram realizados a cada dois
dias. Os grupos receberam ácido linoléico
conjugado AdvantEdge® CLA (EASTM) nas
concentrações 1%, 2% e 4% sobre o consumo
diário de dieta, constituindo, respectivamente, os
grupos AE1, AE2 e AE4 (experimentais), e ácido
linoléico na concentração de 2% sobre o consumo
diário de dieta, constituindo o grupo C (controle).
Os animais foram suplementados por meio de
entubação orogástrica, utilizando seringa descar-
tável de 1mL e agulha de gavage. Ao final do
experimento os animais foram mortos por
deslocamento cervical e em seguida todo o trato
gastrointestinal foi limpo e devolvido à carcaça6,
que foi então congelada em nitrogênio líquido,
fatiada, liofilizada, moída e armazenada a -25ºC
até o momento das determinações de umidade
segundo método 930.15, cinzas segundo método
942.05 e proteína bruta segundo método
954.01, todos descritos pela Association of
Official Analytical Chemists (AOAC)22. A
determinação de gordura total foi feita pelo
método de Soxhlet, conforme Lees23. Os teores
de proteína, lípides, cinzas e umidade foram
também determinados na dieta. Os dados
foram submetidos à análise de variância ANOVA,
seguida de teste de Tukey, com nível de
significância de 5%. O software utilizado para a
análise foi o Statistical Analysis System (SAS). Este
trabalho foi aprovado pela Comissão de Ética
na Experimentação Animal (CEEA - IB/
Unicamp) - Protocolo nº 564-1.
R E S U L T A D O S
Os valores de consumo de dieta e ganho
de peso estão expressos na Tabela 1, na qual se
observa que apenas o grupo AE1 apresentou
valores estatisticamente diferentes (p≤0,05) em
relação aos demais grupos, mas não diferiu quanto
à eficiência alimentar.
Com relação à avaliação da composição
corporal centesimal (Figura 1), constatou-se que
os grupos AE2 e AE4 apresentaram teores de
gordura corporal de 11,17 ± 0,79% e 11,62 ± 0,93%,
respectivamente, e o grupo-controle apresentou
13,9 ± 1,23%, o que corresponde, em relação ao
grupo AE2, a uma redução de aproximadamente
20,00% da gordura corporal. Esses dados são
similares aos resultados obtidos por Delany et al.24,
que relataram uma redução de 30,00% da gordura
corporal de camundongos após suplementação
com CLA por 39 dias. Mais recentemente, Azain
et al.25 também encontraram redução de 13,00%
a 30,00% da gordura retroperitoneal em ratas
suplementadas com CLA por 35 dias. Outros
trabalhos relatam reduções mais expressivas da
gordura corporal, como o estudo realizado por
Park et al.6, em que camundongos apresentaram
redução de 60,00% da gordura corporal quando
suplementados com 0,50% de CLA durante 32
dias.
Vale ressaltar que o período de suplemen-
tação utilizado por esses autores foi superior ao
empregado neste trabalho, o que pode justificar
os maiores valores de redução de gordura corporal,
e também que os modelos experimentais utilizados
são caracterizados por acúmulo de gordura visceral
e uma leve obesidade, diferentemente dos animais
deste estudo.
Tabela 1. Valores médios ± desvio-padrão (n= 10) do consumo de dieta, ganho de peso e eficiência alimentar dos ratos dos grupos-
controle e experimentais.
241,4 ± 22,9a
285,6 ± 17,9b
243,0 ± 23,5a
230,0 ± 23,8a
78,4 ± 16,1a,b
99,0 ± 08,4b,b
83,4 ± 13,0a,b
75,8 ± 17,7a,b
a,
0,32 ± 0,04a
0,35 ± 0,02a
0,35 ± 0,03a
0,32 ± 0,04a
C
AE1
AE2
AE4
Valores com letras iguais na mesma coluna não apresentam diferença significativa (p>0,05) ao teste de Tukey.
Grupos Consumo (g) Ganho de peso (g) Eficiência alimentar
M ± DP
M ± DP M ± DP

564 |A.P. BOTELHOI et al.
Rev. Nutr., Campinas, 18(4):561-565, jul./ago., 2005
Revista de Nutrição
As suplementações com ácido linoléico
conjugado nas concentrações de 2% e 4% sobre
o consumo diário de dieta reduziram a gordura
corporal em ratos Wistar saudáveis em cresci-
mento, indicando que a suplementação com 2%
é economicamente mais viável. É importante
destacar que a utilização de ratos em crescimento,
neste trabalho, foi sustentada pela hipótese de
que o CLA age sobre a lipogênese17. Trabalhos
com períodos de suplementação mais extensos
são necessários visando uma diminuição mais
expressiva da gordura corporal, assim como um
aumento de massa magra.
A G R A D E C I M E N T O S
Ao Laboratório de Micronutrientes da Faculda-
de de Nutrição da Pontifícia Universidade Católica de
Campinas pela utilização do liofilizador. À Fundação
de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo pelo
auxílio financeiro (Processo nº 03/07648-4) e ao
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e
Tecnológico pela bolsa concedida (APB) (Processo
nº 133874/2003-6).
R E F E R Ê N C I A S
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Figura 1. Composição corporal centesimal dos ratos dos gru-
pós-controle e experimentais (n = 10).
Nota: p≤0,05 ao teste de Tukey.

ÁCIDO LINOLÉICO CONJUGADO E GORDURA CORPORAL | 565
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Recebido para publicação em 26 de julho de 2004 e aceito
em 18 de novembro de 2004.