COMPUESTOS DE HIERRO PARA SUPLEMENTACIÓN ORAL: PRINCIPIOS Y AVANCES

Abstract

A summary is presented of the main features about oral iron absorption (iron sources and pickup), and its functions in the body, focusing in the present tendency to use iron complexes formed mainly with ligands such as saccharides, amino acids and carboxylic acids of low molecular weight, for oral therapy in patients with iron deficiencies. These complexes or quelates increase the iron bio availability and reduce the adverse effects of inorganic salts in the gastrointestinal system. Also, this article describes, the more relevant findings about synthesis and characterization of this kind of compounds useful as s food supplement. Finally, some interactions between iron and other compounds of the daily diet are explained.

Full text

VITAE, REVISTA DE LA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA
ISSN 0121-4004 Volumen 13 número 1, año 2006.
Universidad de Antioquia, Medellín - Colombia. págs. 85-95
COMPUESTOS DE HIERRO PARA SUPLEMENTACIÓN
ORAL: PRINCIPIOS Y AVANCES
-REVISIÓN SISTEMÁTICA-
IRON COMPOUNDS FOR ORAL SUPPLEMENTATION :PRINCIPLES AND ADVANCES
-SYSTEMATIC REVIEW-
Lina J. PÉREZ M.1* y Gloria TOBÓN1
Recibido: Abril 07 de 2005 Aceptado: Febrero 28 de 2006
RESUMEN
Se lleva a cabo una revisión que abarca los principales aspectos sobre la absorción del hierro (fuentes y
captación) y sus funciones en el organismo, centrada en la tendencia actual de utilizar complejos o quelatos
de este metal con ligandos orgánicos para el tratamiento oral por deficiencia (monosacáridos, aminoácidos
y ácidos carboxílicos de bajo peso molecular), ya que estos compuestos aumentan la biodisponibilidad
del hierro y disminuyen los efectos adversos que presentan sus sales inorgánicas a nivel gastrointestinal.
Se describen los hallazgos más relevantes en la síntesis y caracterización de estos compuestos para uso
farmacéutico, como suplemento nutricional. Por último se explican algunas de las principales interacciones
del hierro con otros componentes de la dieta.
Palabras clave: hierro (II), ligandos orgánicos, quelatos nutricionalmente funcionales, síntesis y
caracterización
ABSTRACT
A summary is presented of the main features about oral iron absorption (iron sources and pickup), and
its functions in the body, focusing in the present tendency to use iron complexes formed mainly with
ligands such as saccharides, amino acids and carboxylic acids of low molecular weight, for oral therapy
in patients with iron deficiencies. These complexes or quelates increase the iron bio availability and
reduce the adverse effects of inorganic salts in the gastrointestinal system. Also, this article describes,
the more relevant findings about synthesis and characterization of this kind of compounds useful as s
food supplement. Finally, some interactions between iron and other compounds of the daily diet are
explained.
Key words: iron (II), organic ligands, nutritionally functional quelates, synthesis and characterization.
1 Departamento de Farmacia. Facultad de Química Farmacéutica. Universidad de Antioquia. A.A 1226. Medellín - Colombia.
* Autora a quien se debe dirigir la correspondencia: linjohnna@yahoo.com

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INTRODUCCIÓN
El hierro es un oligoelemento esencial para la
vida, cuya deficiencia puede producir eritropoye-
sis defectuosa y anemia. Según se estima, más de
500 millones de personas en el mundo, sufren de
anemia por deficiencia de este mineral en la dieta.
En Indonesia, por ejemplo, 50 a 70 millones de
personas (25–30% de la población) la padecen (1).
Entre las medidas adoptadas está la que obliga a los
empleadores a proporcionar suplementos de hierro
a sus trabajadoras (2).
Pero este no es sólo un problema de los países
conocidos como tercermundistas; en países como
Suiza se han detectado deficiencias de micronu-
trientes en las mujeres, recomendándose la suple-
mentación y la fortificación de los alimentos como
posibles soluciones al problema (3).
Las deficiencias de hierro se pueden incrementar
por el uso prolongado de anticonceptivos orales,
aspirina, antiácidos, antiinflamatorios, anticoagu-
lantes y esteroides. Adicionalmente, enfermedades
del tracto gastrointestinal (TGI) o ginecológicas,
tales como la fibrosis, aumentan el riesgo debido a la
incapacidad que ocasionan al absorberlo eficiente-
mente o simplemente incrementan las necesidades
del organismo (4).
El hierro y sus sales deben ser administrados
sólo para el tratamiento o profilaxis de anemias
por deficiencia de hierro. La ruta de administra-
ción preferida es la oral, usualmente como sales
ferrosas solubles que son mejor absorbidas que las
sales férricas. La acción astringente de las prepara-
ciones inorgánicas hasta ahora más usadas, como el
sulfato ferroso, generalmente producen irritación
gastrointestinal y dolor abdominal acompañados de
náuseas y vómito, debido a que este tipo de sales
se hidrolizan en el lumen, permitiendo el contacto
del hierro con la mucosa, lo que genera radicales
libres con acción irritante y deletérea para el tejido
(5). Estos síntomas pueden ocasionar el abandono
de la terapia.
¿Por qué es tan importante el hierro?
El hierro es un componente esencial de las
proteínas involucradas en el transporte de oxígeno,
además es necesario para la regulación del creci-
miento y la diferenciación celular. Su deficiencia
reduce la cantidad de oxígeno liberada a las célu-
las, lo que produce fatiga, reduce el desempeño y
disminuye la inmunidad. Sin embargo, su exceso
puede producir toxicidad (6).
El cuerpo de un hombre adulto contiene cerca de
50 mg Fe/kg de peso, mientras que el de una mujer
35 mg Fe/kg. Más de dos tercios se encuentran en
la hemoglobina (hierro hemo, ver Fig. 1), y un 3%
hace parte de la mioglobina en el músculo. El hierro
funcional restante se ubica en enzimas específicas
de las células para la respiración celular (4).
El comportamiento único del hierro viene de
la extrema variabilidad de su potencial redox Fe2+/
Fe3+, que puede ser finamente ajustado por los
ligandos apropiados, de forma que el hierro puede
abarcar casi todo el rango de potenciales redox,
biológicamente significativo, que va desde -0.5 V
a +0.6 V (7).
Figura 1.Unión del hierro a la molécula de globina en
la sangre (8).
¿Qué factores afectan la absorción de
hierro?
Hay dos fuentes mayores de hierro: el hierro
hemo, que deriva de la hemoglobina y por tanto se
encuentra en carnes y pescados, y el hierro no hemo
que se encuentra también en productos animales
y vegetales. Es importante considerar que estos
últimos, por poseer un alto contenido de fosfatos
o fitatos, pueden disminuir su absorción (5).
El hierro hemo es altamente biodisponible (de un
20 a un 30%), ya que se absorbe como metaloporfi-
rina intacta a través de receptores hemo específicos,
de alta afinidad, en la mucosa intestinal de borde de
cepillo. Sin embargo, como molécula aislada es po-
bremente absorbido, probablemente porque tiende
a formar polímeros macromoleculares entre sí. En
cambio, como parte de la proteína hemoglobina, es
bien absorbido ya que esta lo mantiene en su estado
monomérico. Debe tenerse en cuenta que la biodis-
ponibilidad del hierro puede verse disminuída cuan-
do los alimentos que lo contienen son sometidos a
tiempos de cocción prolongados (1).

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El hierro no hemo está sujeto a factores intralumi-
nares que pueden promover o inhibir su absorción;
entre los principales promotores del hierro no hemo
encontramos la carne, los ácidos orgánicos como
el ácido ascórbico y los aniones el malato, citrato,
lactato y tartrato. Como inhibidores del hierro no
hemo se cuentan los polifenoles y fitatos presentes
en el té, vegetales, legumbres y condimentos, además
del calcio y el fósforo que, se cree, forman con él
complejos no biodisponibles. Pero la biodisponibi-
lidad de hierro en la dieta se ve influenciada no solo
por la presencia de inhibidores y promotores de la
absorción, sino también por el pH intraluminar y la
motilidad gástrica (1), en tal forma que sólo entre
el 5 y 15% del hierro ingerido en los alimentos es
absorbido bajo condiciones normales (6).
Hay que tener en cuenta que la absorción y
almacenamiento de hierro en el organismo man-
tienen una relación recíproca. Cuando disminuye
el hierro almacenado la absorción aumenta, de tal
manera que ciertas condiciones fisiológicas que
aumentan la actividad eritropoyética y utilizan las
reservas del mineral, se relacionan con un aumento
en su absorción, siempre y cuando haya fuentes que
lo proporcionen en la dieta (1).
¿Cómo es captado el hierro a nivel
gastrointestinal ?
El hierro no hemo es captado, después de su
reducción, por una enzima ferrirreductasa apical
unida a la membrana del intestino y subsecuente-
mente transportado como Fe2+ por una proteína
transportadora conocida como DCT1 o Nramp2
como se muestra en la figura 2.
Figura 2. Modelo para el transporte de hierro a través
del intestino (13).
La proteína DCT1 también se ha asociado con la
captación rápida de hierro II de la mucosa intestinal,
transportando no sólo éste, sino otros metales diva-
lentes. Esto genera que algunos metales compitan o
saturen los sitios de unión, lo que sumado al control
ejercido por la cantidad de hierro almacenado, las
condiciones fisiológicas del individuo y la dieta,
hace aún más variable la absorción de hierro por
vía oral, conduciendo finalmente a la búsqueda
de formas alternativas que mejoren o aseguren su
absorción (1).
¿Cómo se sintetizan quelatos metálicos con
ligandos orgánicos?
Consideraciones básicas:
En la formación de compuestos entre metales y
moléculas orgánicas existen tres categorías:
• Complejos Metálicos
• Compuestos Quelato o Metal quelado
• Compuestos Organometálicos
Cuando un ión metálico se combina con un
donador de electrones, la sustancia resultante es
un complejo o compuesto de coordinación; si el
donador o agente complejante tiene dos o más
grupos donadores, de manera que se forman uno
o más anillos entre este y el metal, se forma un
quelato (este puede ser bidentado, tridentado, etc.
(Véase figura 3). De acuerdo con esto, casi todos los
metales pueden formar complejos y quelatos, pero
los agentes complejantes y quelantes se restringen
a moléculas con elementos no metálicos de los
grupos V y VI, comúnmente Nitrógeno, Oxígeno
y Azufre.
Los compuestos organometálicos son sólo aquellos
que involucran un enlace covalente entre el metal
y el Carbono; tienen propiedades muy distintas a
las de los complejos y quelatos metálicos y no se
utilizan para suplementación oral de minerales; por
tanto quedan fuera de la pertinencia y alcance de
este artículo (9).
Formación y biodisponibilidad de los
quelatos de hierro
Estudios con 14 preparaciones orales de hierro
di- y trivalente, realizadas desde 1977, muestran
una biodisponibilidad del 46 al 100% para las
preparaciones divalentes y del 6 a 29% para las
trivalentes. Considerando finalmente que las
últimas deberían ser excluídas de cualquier terapia
oral de hierro (10), esta revisión se centra en las
preparaciones con Fe II. Estudios realizados en
el 2001 reportan que ciertos ligandos orgánicos
compuestos de hierro para suplementación oral: principios y avances -revisión sistemática-

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proporcionan enlaces con hierro lo suficientemente
fuertes como para producir complejos o quelatos
que resistan el rompimiento por la digestión, o
los ataques de los inhibidores de su absorción y
que, además, puedan ser captados por la mucosa,
permitiendo la posterior utilización del metal (1).
Según el concepto HSAB (Hard-Soft Acid-
Base) de R. G. Pearson, los ácidos y bases de Lewis
se pueden categorizar como duros o suaves, de
manera que una reacción procede generalmente en
la dirección que pueda unir el ácido más duro con
la base más dura y viceversa. Los iones metálicos
se consideran ácidos duros si tienen alta densidad
de carga, un pequeño radio iónico y electrones ex-
ternos no fácilmente oxidables; lo contrario aplica
para bases duras. El hierro en su estado de oxidación
III, con una densidad de carga mayor a 200 Cmm-3,
es considerado un ácido duro, mientras que en su
estado de oxidación II, con una densidad de carga de
aproximadamente 100 Cmm-3, se categoriza como
intermedio, de manera que reacciona más favora-
blemente con bases suaves o intermedias (11, 12)
La mayoría de los quelatos forman anillos de 5 ó 6
miembros; en general el anillo de 5 es más estable
cuando está completamente saturado, pero el de 6
se favorece al haber uno o más dobles enlaces, como
se muestra en la figura 3 (13).
Figura 3. Ejemplo de un quelato bidentado que forma
anillo de 5 miembros con el metal.
En estos casos el número de coordinación más
frecuentemente encontrado para el hierro II y el
hierro III es de 6, originando una estereoquímica
octahédrica para estos complejos (ver fig 1), aunque
también se puede presentar una coordinación de 4
(tetrahédrica) y muy particularmente de 5 (trigonal
bipiramidal o cuadrado piramidal) (11).
Rutas de síntesis
En solución, la hidrólisis de una sal metálica
produce un primer complejo entre el metal y las
moléculas de agua, estas forman la primera esfera
de solvatación del metal. Durante la síntesis de un
nuevo complejo o quelato las posiciones de las mo-
léculas de agua serán desplazadas por los ligandos de
interés. Por lo tanto, las principales rutas de síntesis
de compuestos de coordinación son las reacciones
de reemplazo de ligando, oxidación-reducción y
reacciones de descomposición parcial (17). Sin
embargo, la química de estos compuestos no es
sencilla, dado que las reacciones que los generan
están dirigidas por la entropía y no por la entalpía
del sistema, lo que provoca que la distribución de
los productos obtenidos sea función de la naturaleza
del ligando, la estequiometría de los reactivos, el pH
y el tiempo de la reacción (14), como lo demues-
tran estudios de especiación que profundizan en
el tema (15).
En el caso del hierro II, es necesario mantener
una atmósfera inerte sobre los reactivos durante la
preparación de sus complejos para evitar la oxidación
a hierro III, lo que puede lograrse empleando una
cámara inerte con atmósfera de nitrógeno (16).
Constantes de estabilidad
Se ha llegado a la conclusión de que la constante
de estabilidad del quelato debe ser lo suficiente-
mente alta para permitirle atravesar el TGI con
mínima hidrólisis, y lo suficientemente baja para
que los ligandos citoplasmáticos puedan remover
el hierro del quelato absorbido. El valor de esta
constante para quelatos metal-aminoácido debe
estar entre 4 y 6, lo cual garantiza la funcionalidad
del quelato (4).
La fuerza de una constante está determinada por
el número de miembros en los anillos del quelato,
el número de anillos formados con el catión, la
fuerza básica del enlace del ligando, el tamaño y
carga del ligando, la naturaleza del metal, el efecto
de resonancia del anillo y sus orientaciones estéri-
cas. Algunos valores muestran que con un mismo
ligando, la constante es mayor para los compuestos
de hierro III que para los de hierro II, y que aumenta
al aumentar la proporción metal:ligando (17).
Sacáridos como ligandos del hierro
Los sacáridos son considerados ligandos poten-
ciales no sólo por su abundancia a nivel biológico,
baja toxicidad y alta solubilidad, sino también por
su funcionalidad multi-hidroxi y su ya bien definida
estereoquímica para la coordinación con metales
(18). Burger y Nagy han reportado la formación
de complejos oligo-polinucleares de hierro con
sacáridos simples y derivados (19).

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De los monosacáridos, solamente la D-glucosa
y la D-galactosa son absorbidos activamente en
el intestino delgado. La D-fructosa no se absorbe
activamente, pero tiene una velocidad de difusión
mayor que la esperada para una difusión pasiva.
Estos tres monosacáridos constituyen las mayores
fuentes de energía de gran parte de las células de los
mamíferos y los hace candidatos a agentes quelantes
metálicos (20).
Los dos tipos de transportadores involucrados
en la captación de carbohidratos a través de mem-
branas son: los cotransportadores Na+/glucosa
dependientes de sodio (SGLT) y los transportadores
independientes de Sodio (GLUT) (21), donde el
transportador de glucosa SGLT1 es el responsable
del transporte activo de glucosa y galactosa junto
con una cantidad equimolar de Sodio y contra un
gradiente de concentración dentro del citoplasma
del enterocito (ver figura 4) (22).
Figura 4. Esquema de las rutas de absorción de los
carbohidratos en el duodeno (23).
Los complejos de coordinación se forman en
solución acuosa por el desplazamiento de las molé-
culas de agua de la esfera de solvatación que realizan
los grupos –OH de los polioles, al parecer, por ser
los sitios donadores más fuertes de los sacáridos.
Para estos complejos se requieren al menos 3 gru-
pos –OH en un ordenamiento estérico favorable,
como el de una secuencia axial-ecuatorial-axial en
un anillo de 6 miembros en conformación de silla
(piranosa) o 3 átomos de oxígeno en 3 átomos de
carbono consecutivos (cis-cis-cis) en un anillo de
5 miembros (furanosa). De esta forma se obtienen
complejos 1:1 entre ciclitoles y azúcares con ca-
tiones metálicos, en solventes polares. El tamaño
y carga del catión parecen jugar roles vitales en la
formación de complejos (24). Los alditioles y car-
bohidratos de cadena abierta con ordenamientos
threo-threo de los grupos hidroxi, forman comple-
jos más estables que los de ordenamientos eritro;
la estabilidad relativamente baja de estos últimos
refleja su poca capacidad donadora.
La carga del metal interviene en la estructura y
estabilidad de este tipo de complejos especialmente
en solventes polares, en los cuales los átomos de
oxígeno donadores del carbohidrato tienen más
dificultad para desplazar la esfera de solvatación de
iones trivalentes que divalentes (24).
Los complejos de hierro con ligandos tipo
azúcares ácidos son moléculas potenciales para
uso farmacéutico, ya que su estabilidad es lo sufi-
cientemente alta para prevenir la hidrólisis del ión
metálico en los sistemas biológicos. Cabe agregar
que una de las funciones de los sacáridos a nivel
fisiológico, es el transporte de iones metálicos a
través de las membranas celulares. Por ejemplo, los
polisacáridos extracelulares exhiben una extraordi-
naria habilidad complejante de cationes (25).
El ácido D-galactopiranosidurónico y el malato
son algunos de los ligandos más promisorios en la
terapia oral de hierro, pero la estabilidad relativa
de los complejos con Fe III es mayor con el ácido
D-Glucónico (25). Se ha reportado, además, que
el gluconato ferroso causa mucho menos irritación
gástrica que otras sales ferrosas inorgánicas común-
mente usadas, como el sulfato ferroso (8).
Resultados recientes sobre la composición y
estructura de complejos Fe III con carbohidratos
(aldosas, cetosas, polialcoholes, azucares ácidos, di
y trisacáridos) indican que la naturaleza del ligando
orgánico, el tipo de anión de la sal de hierro usada
para la reacción (aunque no haga parte de la esfera
de coordinación), incrementos en la proporción de
los reactivos (ligando:hierro) y el pH, influencian
la cantidad de especies de hierro que reaccionan,
y pueden favorecer o no, la formación de centros
aislados de hierro. Este comportamiento se puede
explicar por el cambio en la actividad del agua en
respuesta al cambio de anión de las soluciones
concentradas (25).
Aminoácidos como ligandos del hierro
En estudios de Novell-Benjamin, (26) donde se
compararon el sulfato, el bisglicinato y el trisglici-
nato ferroso, se encontró una mayor absorción con
los dos últimos.
La absorción del hierro como quelato de ami-
noácido es mayor que su absorción como sal in-
orgánica, al parecer debido a que los aminoácidos
lo protegen de reacciones químicas que pueden
compuestos de hierro para suplementación oral: principios y avances -revisión sistemática-

90 Vitae
interferir con su absorción, reducen el potencial de
irritabilidad gástrica al evitar que entre en contacto
con la mucosa y aumentan su biodisponibilidad al
utilizar rutas alternas de absorción, proporcionan-
do un suministro rápido y seguro, lo que permite
el uso de menores dosis para lograr resultados
fisiológicos. Una vez absorbido en la mucosa, el
quelato es hidrolizado y la liberación del hierro en
el plasma y al resto de los tejidos es regulada como
para cualquier otra fuente de hierro (4).
Los aminoácidos, con o sin ligar, son captados
por un sistema de múltiples transportadores, entre
los que se destacan los sistemas heterodiméricos
HAT, y el sistema cotransportador, PAT, ubicados
en las células epiteliales del borde de cepillo (21).
El estudio de Amidon y cols. (27) sugiere que los
derivados de glicina pueden ser absorbidos por
mecanismos como la difusión pasiva, sin gasto de
energía.
La producción de un quelato metal-aminoácido
resulta de la reacción de una sal soluble de un ión
metálico con un aminoácido, en una relación molar
de un mol de metal con una a tres moles de ami-
noácido para formar enlaces covalentes coordinados
(28). La estructura real del quelato dependerá de
la relación molar metal:ligando y es generalmente
de 1:2. En la reacción, el grupo carboxilo (COOH)
forma un enlace iónico con el catión, mientras que
el grupo a-amino (NH2) dona un par de electrones
a un orbital d vacío del ión metálico, formando así
el enlace covalente coordinado (29). Para producir
un anillo estable de 5 miembros, cada ligando
aminoácido forma dos enlaces con el hierro (30)
siempre y cuando la reacción se dé a un pH por
encima del punto isoeléctrico del aminoácido. Estos
compuestos son suficientemente estables cuando
se formulan apropiadamente y pueden ser absor-
bidos intactos en el intestino delgado de todos los
mamíferos (31).
De acuerdo con la AAFCO (Association of Ame-
rican Feed Control Officials) el peso promedio del
aminoácido hidrolizado debe ser aproximadamente
150 y el peso molecular del quelato no debe exceder
800 (32). Adicionalmente, para ser nutricionalmente
funcional, el quelato debe tener una constante de
estabilidad adecuada, presentar neutralidad eléctrica
y su ligando debe ser fácilmente metabolizable por
el organismo. El glicinato ferroso cumple todos
estos requerimientos (33).
Algunos compuestos de metales y aminoácidos
exhiben las siguientes propiedades especiales: Au-
sencia de reacciones químicas normales para los
iones metálicos que contienen, diferencias en las
propiedades de las formas a, b y g, baja conduc-
tancia eléctrica, color característico; además, ha sido
posible el aislamiento de ciertas sales internas del
complejo (34).
Christensen y colaboradores (35) reportan
los mayores efectos en la absorción de hierro
con asparagina y glicina. Las constantes de es-
tabilidad de estos complejos, aunque altas, son
apropiadas, en contraste con lo que ocurre con
constantes de estabilidad extremadamente altas
como la del complejo Fe-EDTA que, además
de proteger al hierro de precipitar con fosfatos,
impiden su absorción.
Los quelatos de glicina con cationes como hie-
rro, zinc y cobre han sido ampliamente estudiados
(36) y han demostrado disminuir la competencia
entre los metales por el sitio de absorción, que se
presenta cuando estos están en su forma inorgánica
(37).
Ácidos carboxílicos de bajo peso molecular
como ligandos de hierro
Los complejos puros metal-ácido pueden
prepararse por precipitación de los hidróxidos o
carbonatos del metal, lavando el precipitado de
sales solubles, y disolviéndolo con las cantidades
estequiométricas del ácido respectivo (7).
Figura 5. Formas en que puede unirse un metal a un
grupo carboxilo (38).
Se han establecido cuatro patrones de com-
portamiento para el ligando carboxilato, con base
a determinaciones estructurales reales: iónico (I),
bidentado (III) y bidentado puenteado (IV), que
muestran cierta semejanza en el espectro infrarrojo
(IR), y unidentado (II) que exhibe una marcada di-
ferencia en el mismo espectro (ver figura 5) (38).
Ácidos como el cítrico, ascórbico, fumárico,
láctico, succínico y málico, se han empleado para
formar complejos monoméricos y solubles con

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hierro, previniendo su polimerización y por lo tanto
promoviendo su absorción (39, 40).
El hierro III forma un complejo bidentado mo-
nonuclear con el ácido cítrico, y el hierro II forma
con este un complejo tridentado, confirmado por
estudios de RMN, según lo reportado por Francis
y Dodge (41).
El ácido cítrico tiene tres protones fácilmente
disociables de sus tres grupos carboxilato, y bajo
ciertas condiciones también puede ser disociado
el protón alcohólico. En medio ácido se pueden
formar complejos entre el metal y los grupos car-
boxilo, mientras que en medio neutro o alcalino
puede interaccionar tanto con los carboxilos como
con los hidroxilos (42).
El ácido fumárico puede formar una sal de fu-
marato ferroso con el hierro. La literatura reporta
su uso desde hace ya varias décadas, indicando que
es muy estable a la oxidación o hidratación, tera-
péuticamente equivalente al gluconato ferroso y al
sulfato ferroso como hematínico y bien tolerado
por los pacientes (7).
Cómo se pueden caracterizar los complejos
metal-ligando?
Métodos comunes:
La caracterización cuantitativa de complejos
metálicos con ligando tipo azúcar es difícil cuando
se presentan en solución, dada la baja estabilidad
de los complejos en medio ácido o neutro, la pre-
sencia de equilibrio anomérico y conformacional
y las diferentes interacciones de los isómeros con
el metal (25).
La formación de quelatos entre iones metálicos
con la forma ácida de los ligandos, resulta en una
disminución del pH, la cual es mayor a medida que
aumenta la unión entre ellos, de tal forma que la
medición del pH en solución acuosa constituye un
método para determinar las constantes de estabili-
dad de los complejos formados (13).
Entre los métodos de caracterización de com-
plejos metal-ligando, se encuentran:
- Constantes de equilibrio: pH-métricos, espec-
trofotométricos y electro-químicos
- Estructurales: NMR, FTIR, EPR, Mössbauer,
Difracción de Rayos X y EXAFS
- Susceptibilidad magnética
A continuación se explican brevemente los
principios de algunas de estas técnicas.
Susceptibilidad magnética
La susceptibilidad magnética es un fenómeno
que se produce cuando se induce un momento
magnético en un objeto al aplicarle un campo mag-
nético no homogéneo; se determina por el método
de Guoy, que consiste en empacar la muestra en un
cilindro de vidrio y suspenderla del brazo de una
balanza, de forma que su extremo inferior quede
entre los polos de un electroimán (ver fig. 6). El
tubo con la muestra y la cadena que lo soporta se
pesan en ausencia del campo magnético y luego
bajo la influencia de este. Al ser el campo, máximo
en la parte inferior y mínimo en la parte superior
(campo no homogéneo), se produce una fuerza
descendente, que se mide como el peso requerido
para restablecer el equilibrio. El efecto físico del
paramagnetismo es una atracción hacia la fuente del
magnetismo. Se emplean patrones de comparación
como el FeSO4(NH4)2 (43).
El paramagnetismo puede deberse a dos causas:
una es el campo magnético asociado con el spin
del electrón y la otra es el campo asociado con el
movimiento del electrón en su orbital; ambos se
suman para cada electrón desapareado; por tanto,
toda especie paramagnética tiene un momento
magnético asociado; en cambio, los átomos que
tienen todos sus electrones apareados, tienen un
momento magnético nulo (43). Esta técnica puede
ser usada en la caracterización de los compuestos
a los que hace referencia este artículo, ya que el
grado de paramagnetismo de la sustancia depende
no sólo del tipo de metal, sino también de su estado
de oxidación, su estereoquímica y la naturaleza del
ligando. Un ejemplo de su aplicabilidad puede apre-
ciarse en el trabajo de Raman y cols. con complejos
de cobre, niquel, manganeso y zinc (44).
H: Campo magnético (45)
Figura 6. Balanza de Guoy utilizada para el método
que lleva su nombre.
Brazo de la balanza
Contenedor con muestra
Electroimán
jo
Hmáx
H0
compuestos de hierro para suplementación oral: principios y avances -revisión sistemática-

92 Vitae
EXAFS (Extended X-Ray Absorption Fine
Structure)
Mediante esta técnica pueden ser determina-
dos el número y especies de los átomos vecinos,
su distancia del átomo seleccionado y el desorden
térmico o estructural de sus posiciones. El análisis
puede ser aplicado a materiales cristalinos, nanoes-
tructurales o amorfos, líquidos y gases moleculares.
EXAFS es, en general, la única forma de estudiar el
ordenamiento de átomos en materiales sin un gran
ordenamiento, donde las técnicas de difracción
tradicional no pueden ser usadas (46).
La absorción de Rayos X puede medirse por
la atenuación del paso de los rayos X a través del
material. Cuando la energía fotónica de los rayos
es sintonizada con la energía de enlace de algún
nivel nuclear de un átomo en el material, se da un
incremento abrupto en el coeficiente de absorción
conocido como el límite de absorción. Para átomos
en una molécula o en una fase condensada, la va-
riación de este coeficiente en energías por encima
del límite de absorción muestra una estructura
fina conocida como EXAFS. Con esta técnica se
obtiene la función de distribución radial centrada en
el absorbente, que involucra sólo pares de átomos
formados por él y los otros átomos, proporcionando
información estructural local muy específica sin im-
portar la organización del material (cristalina, amor-
fa o en solución) (24). Un ejemplo lo constituyen
los estudios de K. Geetha y colaboradores donde,
mediante caracterización por EXAFS, sugieren la
formación de complejos metal-sacárido bidentados
a través de los grupos OH (47).
Espectroscopia Mössbauer
Esta técnica mide la absorción de rayos gamma
por los átomos de un sólido como función de la
energía de la radiación (por cambios en la velocidad
de la fuente). A velocidades correspondientes a los
niveles de energía resonante de la muestra, algunos
rayos son absorbidos, dando como resultado una
caída de la intensidad medida. El espectro provee
información sobre el ambiente químico del nú-
cleo absorbente y puede usarse para caracterizar
la muestra.
Los rayos gamma deben ser de la energía apro-
piada para que se den las transiciones nucleares;
además, la energía de la radiación debe ser rela-
tivamente baja, o si no el sistema tendrá una baja
fracción de retroceso, que tiene como resultado
una señal pobre. Sólo existen unos pocos isótopos
elementales para los cuales se cumple este criterio,
por lo cual la espectroscopia Mossbauer sólo puede
ser aplicada a un grupo relativamente pequeño de
átomos, incluyendo: 57Co, 57Fe (el más comúnmen-
te usado), 129I, 119Sn, 121Sb (48).
Para biomoléculas que contienen hierro, esta
técnica provee un poderoso medio para identificar
el estado del spin, estado de oxidación, sitio de si-
metría del sitio del Fe, número de coordinación y
tipo de ligando, a través de la medición de las inte-
racciones hiperfinas del núcleo 57Fe y los electrones
de su entorno (49). Nagy y Burger (1986), en un
estudio con complejos metal-sacárido, muestran
la interacción antiferromagnética entre los centros
de hierro III, por lo que sugieren la presencia de
estructuras diméricas u oligoméricas, gracias a la
espectroscopia Mossbauer (50). El conocimiento
de los estados químicos del hierro es de gran im-
portancia para determinar su efecto y/o toxicidad
en compuestos farmacéuticos como suplementos
dietarios y multivitamínicos (51).
EPR (Electrón Spin Resonance
Spectroscopy)
Cuando un átomo o molécula con un electrón
desapareado se ubica en un campo magnético, el
spin del electrón desapareado puede alinearse en la
misma dirección o en la dirección opuesta al campo
impuesto. EPR mide la absorción de la radiación de
microondas por un electrón desapareado, cuando
este es colocado en un fuerte campo magnético.
Además de un magnetismo conferido por su
spin intrínseco, un electrón puede adquirir magne-
tismo del movimiento orbital. Adicionalmente hay
un magnetismo que proviene de los protones del
núcleo; estos tienen el mismo momento angular de
spin que el electrón, pero debido a que la masa del
núcleo; es mucho mayor, su momento magnético
es mucho menor y esto no permite el estudio del
paramagnetismo por NMR. El fenómeno de reso-
nancia para electrones ocurre a frecuencias miles
de veces mayores que las usadas en NMR, debido
a que la masa de un electrón es miles de veces
menor que la del núcleo. El ancho y estructura de
las curvas de absorción de resonancia en EPR, se
deben al ambiente atómico del electrón y pueden
ser usadas para estudiar la naturaleza del centro
involucrado.
Entre las especies con electrón desapareado están
los radicales libres, complejos de metales de tran-
sición, iones lantánidos, moléculas con electrones

93
impares y moléculas en estado triplete (52). Se han
reportado estudios de complejos metal-sacárido
en los cuales esta técnica ha permitido identificar
la presencia de centros aislados o especies polinu-
cleares interactuantes de hierro, complementando
el análisis de estas estructuras (53).
¿Qué interacciones presenta el hierro con
otros componentes de la dieta?
Antagonismo
Hierro y cobre: Normalmente el hierro iónico y
el cobre iónico antagonizan en el intestino delgado,
donde un alto nivel dietario de alguno de los dos,
reduce la absorción del otro (54-59). Este antago-
nismo se manifiesta en una disminución en los
valores de hemoglobina (60).
Un estudio doble ciego con 30 adultos volun-
tarios sanos, concluyó que cuando el hierro y el
cobre se ingieren a la vez, en la forma de quelatos
de aminoácido, no hay cambios significativos en
los niveles de hemoglobina, es decir que no hay
competencia antagonista entre ellos durante su
absorción intestinal. Este mismo estudio mostró
que la absorción neta promedio de hierro dentro de
la mucosa es 4.7 a 7.2 veces mayor para el quelato
de aminoácido que para las sales inorgánicas del
metal (4).
Hierro y zinc: La deficiencia de zinc está aso-
ciada con disminución del crecimiento, pérdida
de apetito, lesiones en la piel, hipogonadismo,
maduración sexual lenta y curación de heridas y
respuesta inmune deteriorada (61). Las formas al-
tamente biodisponibles de hierro y zinc provienen
de fuentes animales, pero la competencia por la
absorción entre ellos en las paredes celulares de la
mucosa puede producir la inhibición de la capta-
ción de uno y otro (61-63). En un estudio realizado
por Christian y colaboradores (64), no se halla
evidencia de antagonismo cuando se consumen
dosis de hierro:zinc en relación de 2:1; Solomons
reporta que en una proporción Fe:Zn mayor de
2:1 el hierro inhibe la captación de zinc, mientras
que un alto consumo de zinc puede llevar a una
pobre absorción de hierro (65, 66). Otros estudios
reportan que una cantidad de hierro total superior
a 25 mg puede afectar la absorción de zinc, por lo
que se recomienda no ingerir suplementos de este
mineral con las comidas (61).
Hay que tener en cuenta que estudios recientes
muestran que alimentos fortificados con hierro en
los niveles normales, no tienen efectos adversos a
nivel gástrico sobre la absorción de zinc (31).
Agonismo
Ácido fólico: El metabolismo de estos nutrientes
está íntimamente conectado. Una deficiencia de
folato causa replicación celular anormal, particu-
larmente en el sistema eritropoyético y produce
anemia megaloblástica. Primero hay disminución
de la concentración de folato en suero, luego dis-
minuye la concentración de folato en el eritrocito
y aumenta la de homocisteína, (67) debido a que el
folato no puede cumplir su función de metilación
para convertir la homocisteína en metionina, enton-
ces baja la concentración de S-adenosilmetionina, el
principal donador de metilos para el DNA. La hi-
pometilación del DNA puede cambiar la expresión
genética e incrementar el número de rompimientos
de las cadenas de DNA. El folato también interviene
de la misma manera en la formación de timidilato,
su deficiencia cambia el balance de precursores
de DNA y puede generar una incorporación de
uridina en vez de timidina en el DNA, es entonces
cuando, por repetidos intentos de reparar enzimas
para sacar el uracilo, puede desestabilizarse el DNA
rompiéndose las cadenas y generando aberraciones
cromosómicas y transformaciones malignas.
Se reporta la asociación inversa del uso de suple-
mentación de hierro y folato en el embarazo con el
riesgo de leucemia linfoblástica aguda, cáncer más
común entre los niños de países más desarrollados
(68).
Un estudio reciente en México, para comparar
el efecto de la suplementación oral con hierro so-
lamente y de hierro con folato en casos de anemia
por deficiencia de hierro, con más de 300 mujeres
gestantes entre la 14 y 27a semana de embarazo,
mostró que la terapia combinada de hierro y folato
aumentaba los niveles de hemoglobina, indepen-
dientemente de los niveles basales de hierro en
sangre, ferritina y folato en suero, y fue más evi-
dente en mujeres con anemia más severa; por esto
se recomienda su uso concomitante (69).
Recomendaciones para la investigación
Es de gran relevancia que para la síntesis de com-
puestos tipo metal quelato, se tengan en cuenta los
requisitos citados para que sean nutricionalmente
funcionales. Además, es necesaria la medición de
su constante de estabilidad como un requisito de
calidad, ya que esta proporciona el rango de pH en
compuestos de hierro para suplementación oral: principios y avances -revisión sistemática-

94 Vitae
el que el complejo es estable. Al respecto faltan aún
estudios concluyentes.
Esta revisión muestra cómo los ligandos orgáni-
cos pueden ser usados no sólo para quelar hierro,
sino también para quelar otro tipo de metales.
Otro aspecto que se debe tener en cuenta es la
necesidad en nuestro medio de la adquisición de
nuevas tecnologías para la caracterización y el es-
tudio de los complejos y quelatos metálicos, dado
el enorme potencial que poseen y la convivencia
permanente del hombre con la necesidad de mi-
nerales, pues en la vida moderna se requiere en
muchos casos de su suplementación para prevenir
o curar enfermedades causadas por su déficit.
Recomendaciones para la salud pública
Los complejos y quelatos de hierro con ligandos
orgánicos como aminoácidos, sacáridos y ácidos
carboxílicos de bajo peso molecular, son una
excelente alternativa para formular suplementos
alimenticios o terapias en pro de reestablecer los
niveles normales de este metal en el organismo,
ya que permiten su administración concomitante
con otros metales, reduciendo la competencia por
el sitio de absorción y la quelación por parte de
otros componentes presentes en la dieta. Además,
es una alternativa segura y eficaz, ya que reduce de
manera notoria los efectos adversos que producen
sus sales inorgánicas a nivel gástrico, lo que favorece
el cumplimiento de la terapia.
Se recomienda que la suplementación oral de
hierro esté acompañada asimismo de suplemen-
tación en ácido fólico, especialmente durante el
embarazo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Crichton, Robert (2001) Inorganic biochemistry of iron meta-
bolism: from molecular mechanisms to clinical consecuences 2Ed
Jhon Whiley & Sons.
2. Benny Kodyat, Soewarta Kosen and Saskia de Pee (1998) Iron
deficiency in Indonesia: Current situation and intervention.
Nutrition Research. 18 (12) : 1953-1963
3. Eichholzer, Monika (2003) Micronutrient deficiencies in Swit-
zerland: causes and consecuences. J. of Food Engineering (56) :
171-179.
4. H. DeWayne Ashmead (2001) The absorption and metabolism
of iron amino acid chelate. Albion Laboratories, Inc. Clearfield,
Utah U.S.A. ALAN 51 supl. 1 (1) : 13-21.
5. Martindale : The complete drug reference. (1999) 32Ed The
Pharmaceutical Press, USA. p 1346-1347
6. http://ods.od.nih.gov/factsheets/iron.asp abril de 2005
7. Roger, Charles. (1961) Inorganic pharmaceutical chemistry 7th
Ed. Lea & Febige. Filadelfia. USA.
8. http://www.chemguide.co.uk/inorganic/complexions/shapes.
html#top Abril de 2005
9. Martell, Arthur (1956) Chemistry of the Metal Chelate com-
pounds. Prentice Hall, Inc. N. J.. p. 1.
10. Dietzfelbinger H. (1987) Bioavailability of bi- and triva-
lent oral iron preparations. Investigations of iron absorp-
tion by postabsorption serum iron concentrations curves.
Arzneimittelforschung. Jan., 37 (1A) : 107-12.
11. Rayner-Canham, Geoff; Overton, Tina (2003) Descriptive Inor-
ganic Chemistry. Third edition. W. H. Freeman and Company.
USA.
12. JEPPSEN, Robert (2001) Toxicology and safety of Ferrochel and
other iron amino acid chelates. ALAN. Mar., 51 (1 Suppl 1) : 26-
34.
13. Martell, A; Calvin, M. (1952) Química de los compuestos metá-
licos quelatos. Prentice Hall. New York.
14. Steinborn, Dirk and Junicke, Henrik (2000) Carbohydrate
complexes of Platimum group Metals. Chem. Rev. (100) : 4283-
4317.
15. Yaman, M; Kaya, G. (2005) Speciation of iron (II) and (III) by
using solvent extraction and flame atomic absorption spectrometry.
Analytica Chimica Acta. (540) : 77-81
16. Pérez M., L. J. (2005) Quelatos orgánicos de hierro para admi-
nistración oral: Síntesis, identificación y análisis de imagen de
partículas. Trabajo de Maestría. Fac. de Química Farmacéutica.
U. de A. Medellín, Colombia.
17. Chaberek S & AE Martell (1959) Organic Sequestering Agents.
NY, John Wiley & Sons.
18. Rao, C. et al. (2000) Transition metal saccharide chemistry and
biology: syntheses, characterization, solution stability and putative
bio-relevant studies of iron saccharide complexes. Inorganica
Chimica Acta. (297) : 373-382.
19. Burger, K. et al. (1983) A novel polynuclear iron (III) mixed
ligand complex for use in parenteral iron therapy. Inorg. Chim.
Acta (80) : 231-235
20. http://www.fao.org/docrep/w8079e/w8079e0k.htm marzo de
2005.
21. Steffansen, Bente et al. (2004) Intestinal solute carriers: an over-
view of trends and strategies for improving oral drug absorption.
European Journal of Pharmaceutical Sciences (21) : 3-16
22. http://www.fao.org/docrep/w8079e/w8079e0k.htm Marzo de
2005. (ver referencia 29)
23. Devlin, T. (1997) Textbook of Biochemistry With Clinical Co-
rrelations, Fourth Edition. Ed. Wiley-Liss Inc. Section 26.
24. Nagy, L; Szorcsik, A. (2002) Equilibrium and structural studies
on metal complexes of carbohydrates and their derivatives. J. of
Inorganic Biochemistry (89) : 1-12
25. Gyurcsik, B; Nagy, L. (2000) Carbohydrates as ligands: coordina-
tion equilibria and structure of the metal complexes. Coordination
chemistry reviews 203 : 81-149
26. Nove11-Benjamin, AC, FE Viteri & LH Al1en. (2000) Iron
absorption from ferrous bisg1ycinate and ferric trisg1ycinate
in whole maize is regu1ated by iron status. Amer J C1in Nutr.
(71) : 1563-1569.
27. Amidon, L. et al. (1982) Intestinal Absorption of Amino Acid
Derivatives: Importance of the Free a-Amino Group. J. of Pharm.
Sci. 10 (71) : 1138-1141.
28. www.zinpro.com Noviembre 2004.
29. Bailar JC, et al. (1984). Chemistry. Orlando, FL, Acadernic Press,
p. 223.
30. Bell CF. (1977) Principles and Application of Metal Chelation.
Oxford, Clarendon Press, p 17-18.
31. Davidsson, L. et al. (1995) Br. J. Nutr. Zinc absorption in adult humans:
the effect of iron fortification.; 74 pp 417-25.
32. US PATENT 6,518,240 Feb. 11, 2003
33. Ashmead, Stephen D. (2001) The chemistry of ferrous bis-glyci-
nate chelate. ALAN 51 (1 supl 1) : 7-12
34. Martell, A; Calvin, M. (1952) Química de los compuestos metá-
licos quelatos. Prentice Hall. New York.

95
35. Christensen, J. et al. (1984) Effects of Divalent Amino Acids on
Iron Absorption. J. of Pharm. Sci. 73 ( 9) : 1245-1248
36. Ashmead HD, DJ Graff & HH Ashmead (1985) Intestinal Ab-
sorption of Metal Ions and Che1ates. Springfie1d, IL, Charles C
Thomas.
37. Solomons, N. W. and Jacobs, R. (1981) Studies on the bioavaila-
bility of zinc in humans: effects of heme and nonheme iron on
the absorption of zinc. AJCN (34) : 475-487.
38. Palacios, E. G. (2004) Infrared spectroscopy of metal carboxylates
II. Analysis of Fe III, Ni and Zn carboxylate solutions . Hydro-
metallurgy (72) : 139-148.
39. A. K. Nikumbh, M. M. Phadke and A. A. Latkar (1994) Mössbauer
spectroscopic and direct current electrical conductivity study of
some iron (II) dicarboxylates. Journal of Magnetism and Magnetic
Materials 131 (1-2) : 189-198
40. Harmon B. Abrahamson, Ahmad B. Rezvani1 and J. George
Brushmiller (1994) Photochemical and spectroscopic studies of
complexes, of iron(III) with citric acid and other carboxylic acids.
Inorganica Chimica Acta. 226, (1-2): 117-127
41. Francis, A. J. And Dodge, C. J. (1993) Influence of complex struc-
ture on the biodegradation of iron-citrate complexes. Applied and
environmental microbiology 1 (59): 109-113.
42. Konigsberger, Lan-Chi et al. (2000) Complexation of iron (III)
and iron (II) by citrate. Implications for iron speciation in blood
plasma. J. of Inorg. Biochem. (78) : 175-184
43. Larsen, Edwin. (1972) Elementos de transición. Reverté S.A.
Barcelona p 22-23
44. Raman, N. et al. (2001) Synthesis and characterization of Cu, Ni,
Mn, Zn and VO Schiff base complexes derived from o-phenyle-
nediamine and acetoacetanilide. Proc. Indian Acad. Sci (Chem.
Sci.), 113 (3): 183-189.
45. http://physics.iitm.ernet.in/courses/gplab03_odd/Guoy.htm Oc-
tubre de 2005
46. http://www.p-ng.si/~arcon/xas/exafs/exafs.htm octubre de 2005
47. K. Geetha (1995) Transition-Metal saccharide chemistry: Síntesis,
spectroscopy, electrochemistry and magnetic susceptibility studies
of iron (III) compounds. Carbohydr. Res. (271) : 163-175.
48. http://encyclopedia.laborlawtalk.com/Mossbauer_spectroscopy
Octubre de 2.005
49. http://www.uga.edu/cms/Moss.html Febrero 2005.
50. Nagy L, Burger K. (1986) Iron III complexes of sugar-type ligands.
Inorg. Chimica Acta. 1 (124) : 55-59.
51. Oschtrakh M.L., Milder O.B., Semionkin V.A. (2004) Analysis of
the iron containing vitamins and dietary supplements by Moss-
bauer spectroscopy. Analytica Chimica Acta (506) : 155-160.
52. www.chemistry.adelaide.edu.au/external/soc-rel/content/epr.htm
diciembre de 2004
53. Nagy, L; Szorcsik, A. (2002) Equilibrium and structural studies
on metal complexes of carbohydrates and their derivatives. J. of
Inorganic Biochemistry, 89. (ver referencia 33)
54. Cuser W., A. Resurrecion (1982) Influence of copper, zinc, and
protein on biological response to dietary iron. Nutritional Bio-
availability of Iron. Washington, DC, American Chemical Society,
p 97.
55. Greger J., M. Storey, J. Stahl, M. Cook, S. Gentry-Roberts, J.
Lynds (1988) Zinc, iron and copper interactions in humans, rats,
and chicks. En: Trace Elements in Man and Animals. L. Hurley, C.
Keen, B. Lonnerdal, R. Rucker. NY, Plenum Press, p 231-232.
56. Howell J., J. Gaiothoma (1987) Copper in Animals and Man. Boca
Raton, FL, CRC Press, VI : p 90.
57. O’Dell, B. (1979) Copper and zinc in poultry nutrition. Copper
and Zinc in Poultry, Swine and Ruminant Nutrition. Miller, W.
Mil. West Des Moines IA NFIA p 5.
58. Bezkorovainy, A. (1980). Biochemistry of Nonheme Iron. Plenum.
N.Y. p 5.
59. El-Shobaki F., W. Rummel (1979) Binding of copper to mucosal
transferrin and inhibition of intestinal iron absorption in rats. Res
Exp Med (174) : 187-195.
60. Grassman E., M, Kirchgessner (1981) On the metabolic availability
of absorbed copper and iron. En: Trace Element Metabolism in
Man and Animals. Canberra City, Australia Academy of Science
p. 593.
61. Solomons, N. (1986) Competitive interaction of iron and zinc
in the diet: consecuences for human nutrition. J. Nutr. (116) :
927-35
62. Solomons N. RUZ M. (1997) Zinc and iron interaction: concepts
and perspectives in the developing word. Nutr. Res. (17) : 177-
85.
63. Whitaker P. (1998) Iron and zinc interactions in humans. Am. J.
Clin. Nutr. (68) : 442S-446S
64. Christian, P et al. (2001) Iron and zinc interactions among pregnant
Nepali women. Nutrition research (21) : 141-148.
65. Crofton, R. W. et al. (1989) Inorganic zinc and the intestinal
absorption of ferrous iron. Am. J. Clin. Nutr. (5) : 141-144.
66. Rossander-Hulten L. et al. (1991) Competitive inhibition of iron
absorption by manganese and zinc in humans. Am. J. Clin. Nutr.
(54) : 152-156.
67. Lukaski, Henry (2004) Vitamin and mineral status: effects on
physical performance. Nutrition (20) : 632-644.
68. Thompson, J., Fitz P., Willoughby M., Armstrong B. (2001) Ma-
ternal folate supplementation in pregnancy and protection against
acute lymphoblastic leukaemia in childhood: a case-control study.
Lancet (358) : 1935-1940.
69. Juarez, J. Bonizzonni E., Scotti, A. (2002) Iron plus folate is
more effective than iron alone in the treatment of iron deficiency
anaemia in pregnancy: a randomised, double blind clinical trial.
BJOG: An intern. J. of Obstetrics an gynaecology. 9 ( 109): 1009-
1014.
compuestos de hierro para suplementación oral: principios y avances -revisión sistemática-