Vitamin D implications in health and pregnancy

Abstract

Vitamin D gained importance since the discovery of its steroid structure. Vitamin D participates in mineral homeostasis, regulation of gene expression, and cell differentiation. Recent advances in the study of the enzyme involved in the conversion of 25-hydroxyvitamin D3 into 1,25-dihydroxyvitamin D3 (calcitriol), as well as the discovery of it's hormone mechanism of action, have led to a better knowledge and understanding of vitamin D endocrine system, as well as it's implication in health and pregnancy.

Full text

77Díaz L et al.
La vitamina D.
Rev Invest Clin 2001; 53 (1): 77-85
RINCÓN DEL RESIDENTE
La Revista de Investigación Clínica / Vol. 53, Núm. 1 / Enero-Febrero, 2001 / pp 77-85
Versión completa de este artículo disponible en internet: www.imbiomed.com.mx
La vitamina D: implicaciones en la salud y el embarazo
Lorenza Díaz*, Cecilia Cariño*, Isabel Méndez*
* Departamento de Biología de la Reproducción. Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán.
FORMACIÓN Y EFECTOS DE LA VITAMINA D
El término genérico vitamina D (VD) se refiere a
un grupo de esteroides que se caracterizan por pre-
sentar abierto el anillo B de su núcleo esteroidal. La
vitamina D se encuentra en la sangre en dos formas:
la vitamina D
2
o ergocalciferol (VD
2
), que es de ori-
gen vegetal, y la vitamina D
3
o colecalciferol (VD
3
),
que se sintetiza en la piel, gracias a la acción de la luz
UV. Esta última también se puede obtener de la
dieta a partir del aceite de hígado de pescado, del
hígado y del huevo. La VD (VD sin subíndice se re-
fiere a ambas formas D
2
y D
3
), que fue descubierta
en 1920 por Mellanby,
1
se catalogó inicialmente
como una vitamina por que se sabía que era esencial
para la formación del esqueleto y que se obtenía ex-
clusivamente de los alimentos. Sin embargo, a prin-
cipios de la década de los 30s, gracias a los trabajos
Vitamin D implications in health and pregnancy
ABSTRACT
Vitamin D gained importance since the discovery of its steroid
structure. Vitamin D participates in mineral homeostasis, regu-
lation of gene expression, and cell differentiation. Recent advanc-
es in the study of the enzyme involved in the conversion of 25-hy-
droxyvitamin D
3
into 1,25-dihydroxyvitamin D
3
(calcitriol), as
well as the discovery of its hormone mechanism of action, have
led to a better knowledge and understanding of vitamin D endo-
crine system, as well as its implication in health and pregnancy.
Key words. Placenta. CYP27B1. 1,25-(OH)
2
D
3
. 25-OH-D-1-
α
hydroxylase. Pregnancy.
RESUMEN
La vitamina D cobró importancia desde que se descubrió la natu-
raleza esteroidea y carácter hormonal de uno de sus metabolitos:
el calcitriol. Su participación en el mantenimiento de la homeos-
tasis mineral, así como su capacidad para regular la transcrip-
ción génica y fomentar la diferenciación celular, han hecho de su
estudio un tema de gran interés. Los recientes avances en el es-
tudio de la enzima encargada de convertir la 25-hidroxivitamina
D en 1,25-dihidroxivitamina D
3
(calcitriol), así como la descrip-
ción de su mecanismo de acción, han permitido ampliar el cono-
cimiento de los factores reguladores que controlan el equilibrio
del sistema endocrino de la vitamina D, y de las implicaciones del
calcitriol en la salud en general y en el embarazo en particular.
Palabras clave. Placenta. CYP27B1. 1,25-(OH)
2
D
3
. 25-OH-D-
1α hidroxilasa. Embarazo.
de Windaus
2
y Brockmann
3
, se logró determinar la
estructura química de la VD de manera definitiva, lo
que permitió demostrar su naturaleza esteroidal, si-
tuándola finalmente dentro de la clasificación de las
hormonas esteroides. De hecho Windaus recibió el
premio Nobel de química en 1928 por sus aportacio-
nes al conocimiento de la estructura de la VD, lo cual
permitió su aplicación en el tratamiento de enferme-
dades tales como el raquitismo y otras que cursaban
con deficiencias en esta vitamina.
La estructura de la VD consiste del núcleo ciclo-
pentanoperhidrofenantreno común a las hormonas
esteroides, con el anillo B abierto entre los carbonos
9 y 10, lo que permite identificarla como secoesteroi-
de. Adicionalmente a diferencia de las hormonas es-
teroides (estradiol, testosterona) que no presentan
cadena lateral, la VD conserva ocho carbonos de la
cadena lateral del colesterol. La diferencia entre la

Díaz L et al.
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VD
2
y la VD
3
es que en su estructura la primera pre-
senta un grupo metilo en el carbono 24 y un doble
enlace entre el carbono 22 y 23. (Figura 1).
Formación y metabolismo de la vitamina D
En la piel la VD se sintetiza a partir del 7-dehidro-
colesterol. La radiación ultravioleta rompe el anillo
B dando lugar a la formación de un intermediario
inestable (previtamina D), que a través de un proce-
so fototérmico se biotransforma en colecalciferol el
cual es transportado en la sangre unido a su proteína
transportadora hasta el hígado, en donde es hidroxila-
do en el carbono 25 para convertirse en 25-hidroxivi-
tamina D
3
(25-OH-D).
4
Este metabolito, si bien es el
más abundante en el plasma, no representa la forma
activa. En el riñón la 25-OH-D es hidroxilada en el
carbono 1 para obtener la forma hormonal: la 1,25-di-
hidroxivitamina D
3
(1,25-(OH)
2
D
3
) (Figura 2).
Sistema endocrino de la vitamina D
A principios de la década de los setentas se deter-
minó la naturaleza endocrina de la vitamina D, lo
que dependió básicamente del descubrimiento de los
receptores nucleares para la 1,25-(OH)
2
D
3
en el in-
Figura 1. a) Estructura química de la vitamina D. b) Grupo alifático (R)
que caracteriza a cada una de sus dos formas D
2
y D
3
.
Figura 2. Síntesis de 1,25(OH)
2
D
3
a partir del 7-dehidrocolesterol. La luz solar rompe el anillo B para formar la vitamina D, que al hidroxilarse en el
hígado por la acción de la enzima vitamina D 25-hidroxilasa (1), se convierte en 25-OH-D
3
. La forma activa se obtiene tras una segunda hidroxilación
en el riñón, gracias a la 25-OH-D-1
α
hidroxilasa (2).
a
)
OH
21
28
22
23
24
25
26
27
CH
20
21
22
23
24
25
26
27
20
CH
2
R
D
2
D
3
b
)
A
C
D
R
CD
CH2
A
OH
a) b)
21
22
28
26
24
20
23
25
CH
3
D
2
D
3
21
27
22
26
24
20
23
25
27
AB
C
D
OH
Luz UV
Piel
OH
CH
2
Vitamina D
hígado
7-Dehidrocolesterol
OH
OH
CH
2
OH OH
OH
CH
2
riñón
(2)
(1)
25-OH-D
3
1,25(OH)
2
D
3

79Díaz L et al.
La vitamina D.
Rev Invest Clin 2001; 53 (1): 77-85
testino,
5
así como del conocimiento del papel que tie-
ne el riñón en la producción de esta hormona, y su
regulación por parte de la hormona paratiroidea
(PTH). El sistema endocrino de la vitamina D se
basa en el hecho de que la 1,25-(OH)
2
D
3
es una hor-
mona que como tal, se sintetiza en el organismo, es
transportada en sangre y activada en ciertos órga-
nos, y ejerce sus efectos biológicos interactuando con
sus receptores específicos. El funcionamiento del sis-
tema endocrino de la vitamina D depende entonces
de tres elementos principales: la presencia de los res-
pectivos citocromos P450 en el hígado y en el riñón
para biotransformar la 25-OH-D en su metabolito
activo (1,25-(OH)
2
D
3
); 2°: la presencia de proteínas
transportadoras para movilizar estas moléculas hi-
drófobas hasta sus órganos blanco, y 3°: la existencia
de receptores específicos en una variedad de tejidos.
Actualmente se conoce que la 1,25-(OH)
2
D
3
se une a
sus receptores localizados en diversas células blanco,
y que su producción y degradación son procesos re-
gulados por mecanismos de retroalimentación que
responden a factores iónicos (Ca
++
, P), polipeptídi-
cos (PTH, calcitonina), y esteroideos (1,25-(OH)
2
D
3
).
Los órganos blanco principales del calcitriol son el
riñón, el hueso y el intestino, y sus funciones fisioló-
gicas más importantes son las de mantener concen-
traciones adecuadas de calcio y fósforo, así como la
mineralización del hueso.
Mecanismo de acción y
funciones de la vitamina D
Actualmente se sabe que el calcitriol no se limita a
las funciones arriba mencionadas, y que de hecho es
una hormona muy versátil, capaz de generar res-
puestas biológicas por la vía genómica (receptores in-
tracelulares), o no genómica (receptores membrana-
les). En la primera vía participan receptores nuclea-
res o citoplásmicos: una vez que el receptor ha sido
activado por la hormona, se dimeriza con otro recep-
tor nuclear conocido como el receptor retinoide X
(RXR), y el heterodímero así formado se une a ele-
mentos de respuesta para la vitamina D (VDRE) en
la región promotora de los genes blanco. El heterodí-
mero puede reclutar coactivadores y componentes
del complejo de iniciación de la transcripción, con la
finalidad de modular la transcripción génica y provo-
car respuestas biológicas.
6
Estos efectos biológicos se
alcanzan después de tiempos relativamente largos
(horas). Algunos de los genes en donde se ha demos-
trado la existencia de VDREs en la región promotora
de sus secuencias, son los de la osteocalcina, osteo-
pontina, PTH, y 25(OH)D-24-hidroxilasa (CYP24).
7
La segunda vía para generar efectos biológicos es
a través de receptores membranales. La unión del cal-
citriol al receptor de membrana puede provocar la ac-
tivación de la proteína cinasa C (PKC), de la fosfolipa-
sa C, del adenilato ciclasa (PKA) y/o la apertura de ca-
nales de calcio mediados por voltaje.
8
Esta vía de
acción rápida se relaciona con los efectos no genómi-
cos, e involucra cambios en las concentraciones de
segundos mensajeros. Un ejemplo en donde se ha ca-
racterizado bien la vía no genómica es en el duodeno,
e implica al sistema de transporte rápido de calcio.
9
Este fenómeno es también conocido como transcalta-
quia (estimulación del transporte de calcio en 2-3
minutos), y se ha sugerido que en este sistema en
particular participan canales de calcio sensibles al
voltaje, los cuales se activan una vez que el ligando
interactúa con su receptor membranal.
10
De manera general, las funciones que se atribuyen
a la 1,25-(OH)
2
D
3
son: mantener la homeostasis de los
iones minerales, regulación de la transcripción de
ciertos genes, promoción de la diferenciación celular,
regulación de la proliferación de células normales y
malignas, estimulación del sistema inmunológico, y
los procesos relacionados con el transporte de calcio.
Además, se han localizado receptores para esta hor-
mona en tejidos tan diversos como la placenta, cere-
bro, músculo, intestino, hueso, próstata, hígado, ova-
rio, glándula mamaria, colon, epidídimo, glándula
paratiroides, útero, estómago, células del sistema in-
munológico, además de múltiples líneas celulares de
cáncer;
7
lo que hace del estudio de las funciones de la
1,25-(OH)
2
D
3
un campo amplio e interesante.
ESTRUCTURA, REGULACIÓN Y DISTRIBUCIÓN
DE LA 25-OH-D 1α HIDROXILASA
El paso limitante en la biosíntesis de la forma
activa de la vitamina D, es la hidroxilación en la
posición 1 alfa de la 25-OH-D. Esta reacción es ca-
talizada por una enzima perteneciente a la familia
de las oxidasas de la membrana interna mitocon-
drial: la 25-OH-D 1α hidroxilasa (1α(OH)asa).
Esta enzima está compuesta de tres componen-
tes: una flavoproteína (NADPH-ferredoxina re-
ductasa), una ferredoxina y el citocromo que le
confiere la especificidad: el citocromo P450 1α
que es el responsable de hidroxilar al sustrato en
la posición α del carbono 1. Cada hidroxilación
catalizada por un citocromo P450 sigue la si-
guiente reacción general:
esteroide-H + NADPH + H
+
+ O
2
e esteroide-OH + NADPH + H
2
O
Esta reacción consume dos electrones, un protón

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y una molécula de oxígeno; de la cual uno de sus áto-
mos es incorporado al sustrato, mientras que el otro
es reducido hasta agua.
11
Los electrones son transfe-
ridos de NADPH al citocromo P450 por la NADPH-
ferredoxina reductasa y la ferredoxina.
Regulación
La 1α (OH)asa renal es regulada por diversos
factores tales como el fósforo, el factor de creci-
miento similar a la insulina tipo I (IGF-I),
12-14
el
calcio, la PTH, la calcitonina
15
y la misma 1,25-
(OH)
2
D
3.
Adicionalmente se sabe que la proteína
transportadora de la vitamina D (DBP) regula indi-
rectamente a la 1α (OH)asa limitando la disponibi-
lidad del sustrato, y que los fosfolípidos también
tienen un papel limitante en la actividad de esta en-
zima.
16
Por otra parte algunos agentes antimicóti-
cos han demostrado inhibir a la 1α (OH)asa, de ma-
nera similar a como lo hacen con otras enzimas es-
teroidogénicas.
17
Cabe señalar que los estudios de
regulación de la 1α (OH)asa han sido realizados
prácticamente solo en términos de su actividad,
pues la clonación de su cADN es reciente.
18-20
Sin
embargo, actualmente se han llevado a cabo diver-
sos trabajos que toman en consideración la estruc-
tura recientemente descrita del gen de la 1α
(OH)asa. Este gen, conocido como CYP1α, P450
VD1α
,
o P450c1α, tiene como nombre oficial el de
CYP27B1 según la nomenclatura asignada por el
Comité de Nomenclatura de la Superfamilia de los
Citocromos P450.
21
Los trabajos en los cuales se
hace referencia a la estructura de CYP27B1, indi-
can que dicho gen contiene elementos de respuesta
para cAMP (CRE) en su región promotora,
22
corro-
borando observaciones previas sobre los efectos es-
timuladores de la PTH sobre la 1α (OH)asa renal, a
través de la generación intracelular de cAMP.
23
A
este respecto, Kong
22
y cols. estudiaron el patrón de
actividad transcripcional de la región 5 de
CYP27B1 construyendo porciones del promotor e
insertándolas junto con un gen reportero, en la lí-
nea celular de riñón AOK-B50. Si bien sus estudios
revelaron la presencia de CREs en la región 5 de
CYP27B1, Kong y su grupo no lograron detectar
elementos de respuesta específicos para IGF-I, ni
tampoco VDREs. El hecho de que no se hayan loca-
lizado VDREs en dicha región, despierta controver-
sia puesto que la 1,25-(OH)
2
D
3
inhibió el efecto esti-
mulatorio producido por la PTH sobre la 1α
(OH)asa, en este tipo celular, lo cual sugiere que el
calcitriol
suprime la expresión de CYP27B1 por una
cascada indirecta que interfiere con la vía de señali-
zación de la PTH, sin descartar que existan VDREs
atípicos o no conocidos, en la región promotora de
CYP27B1. Estos hallazgos y otros trabajos,
24
con-
dujeron a la hipótesis que sugiere que la inhibición
de CYP27B1 por el calcitriol es propiciada por un
mecanismo diferente del transcripcional. Muy pro-
bablemente, como lo mencionan Henry y cols,
24
la
1,25-(OH)
2
D
3
ejerce su efecto represivo sobre su
propia síntesis, inhibiendo a una proteína requeri-
da para que P450 1α funcione, como pudiera ser
una de las proteínas encargadas del transporte de
electrones del NADPH al citocromo P450 1α. Otra
opción es que la 1,25-(OH)
2
D
3
no reprime directa-
mente la actividad transcripcional de CYP27B1,
sino que enmascara su actividad, incrementando
significativamente la expresión del gen CYP24.
25
CYP24 normalmente se activa en presencia de altas
concentraciones de 1,25-(OH)
2
D
3
y/o altos niveles
de calcio en suero, como un mecanismo de regula-
ción pues es una vía metabólica de depuración del
calcitriol.
26
Sin embargo, otros trabajos presentan
resultados controversiales, lo que demuestra que la
regulación negativa de la síntesis de la 1,25-
(OH)
2
D
3
por el mismo
calcitriol es más compleja de
lo que actualmente se supone. A este respecto Take-
yama
27
y cols., en una serie de experimentos utili-
zando cepas de ratones que carecen del receptor
para la 1,25-(OH)
2
D
3
(VDR), lograron demostrar
que el complejo calcitriol-VDR es el responsable de
la inhibición de la expresión de CYP27B1. Cuando
administraba 1,25-(OH)
2
D
3
a los ratones con fenoti-
po silvestre se reprimía la expresión génica de
CYP27B1, pero no sucedía esto con los ratones que
carecían del receptor para la vitamina D. Sus resul-
tados también sugirieron que el VDR ligado a la
1,25-(OH)
2
D
3
regula positivamente la expresión de
CYP24. En apoyo a estos estudios, Murayama y sus
colaboradores
28
lograron demostrar que la presen-
cia del VDR es esencial para la regulación negativa
de CYP27B1 por la 1,25-(OH)
2
D
3
, lo cual destaca la
necesidad de estudios más profundos en lo que con-
cierne a la regulación del gen CYP27B1.
Distribución
De manera general, la 1α (OH)asa se ha localizado
exclusivamente en los túbulos proximales del ri-
ñón.
29,30
El riñón fue considerado el único sitio de
conversión de la 25-OH-D en 1,25-(OH)
2
D
3
; sin em-
bargo, estudios posteriores demostraron la conversión
extrarrenal de 25-OH-D a su forma hormonal en otros
tejidos tales como el hueso,
31,32
la próstata,
33
, la pla-
centa,
34-37
los queratinocitos,
38
y las células del sistema
inmunológico. La presencia de la 1α (OH)asa en estos
tejidos confiere a la hormona 1,25-(OH)
2
D
3
una natu-

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raleza paracrina, autocrina o ambas y abre un extenso
campo de estudio e investigación a este respecto.
LA VITAMINA D Y LA SALUD
El impacto en la salud provocado por la deficiencia
de la vitamina D ha sido motivo de varios estudios.
El raquitismo es la principal enfermedad infantil re-
sultado de la deficiencia de vitamina D. La deformi-
dad del esqueleto debido a la mineralización deficien-
te del hueso por escasez de calcio es reversible con la
administración de 1,25-(OH)
2
D
3
, calcio y fosfatos.
En los adultos, el estado patológico conocido como
osteomalacia se presenta también por la deficiencia
de vitamina D, pero con manifestaciones clínicas y
anatomórficas diferentes al raquitismo infantil. En
general, las enfermedades producidas por deficien-
cias de vitamina D se presentan por carencia dieté-
tica, absorción intestinal deficiente, falta de luz solar
o daño renal. Por otro lado, las patologías genéticas
asociadas a la vitamina D, implican mutaciones ya
sea en el gen que codifica para el VDR o en el gen
CYP27B1. El desorden genético causado por muta-
ciones en el gen que codifica para el receptor intrace-
lular de la vitamina D es conocido como raquitismo
resistente a la vitamina D o raquitismo tipo II
(VDDR II). La mutación provoca cambios en el
domi-
nio de unión al ADN, o en el dominio de unión a la
hormona,
39
por lo que este padecimiento se asocia
con la insensibilidad de los tejidos al calcitriol,
40
y se
caracteriza por la aparición de hipocalcemia, hiper-
paratiroidismo secundario, concentraciones circu-
lantes elevadas de 1,25-(OH)
2
D
3
en suero, y en algu-
nos casos alopecia.
Por otra parte, el padecimiento conocido como ra-
quitismo pseudodeficiente de vitamina D (PDDR),
también referido como raquitismo dependiente de la
vitamina D tipo I (VDDR I), es ocasionado por una
mutación en la estructura primaria de la 1α
(OH)asa. Esta enfermedad es consecuencia de un de-
fecto hereditario que se asocia con la síntesis defi-
ciente de 1,25-(OH)
2
D
3
. El PDDR se caracteriza por
presentar bajas concentraciones de calcio en suero,
debilidad muscular, hiperparatiroidismo secundario
y concentraciones disminuidas circulantes de 1,25-
(OH)
2
D
3
. La descripción de la mutación responsable
de la aparición de PDDR no se descubrió sino hasta
fechas recientes, después de la clonación del gen
CYP27B1. Con estos estudios se logró determinar
que CYP27B1 se encuentra en el cromosoma
12q13.1-q13.3,
41
y que la deficiencia de 1α (OH)asa
en PDDR es debido a la deleción en los codones 211 o
231 de CYP27B1.
18
Adicionalmente existen situaciones patológicas
cuya sintomatología incluye hipercalcemia, y que se
han relacionado con el incremento significativo en la
expresión y/o actividad de la 1α (OH)asa extrarre-
nal.
42
De estas podemos mencionar algunas enferme-
dades como la tuberculosis, la sarcoidosis, la candi-
diasis y el linfoma,
43
en donde se detectan altas con-
centraciones de calcitriol en suero. Este aumento se
ha relacionado con la sobreproducción de 1,25-
(OH)
2
D
3
por parte de células del sistema inmunológi-
co, ya sean linfocitos ó macrófagos.
43
Las concentraciones de 1,25-(OH)
2
D
3
también
sufren modificaciones con la edad: diversos estudios
indican que la concentración en suero de esta hor-
mona decrece significativamente en la vejez, lo que
se adjudica a diferentes factores, pero básicamente
se resumen en: menor producción cutánea de calci-
triol, menor ingesta en la dieta y alteraciones en la
salud que afecten la absorción o la función renal.
44-
46
Adicionalmente, la menopausia se asocia con la
reducción de las concentraciones de 1,25-(OH)
2
D
3
,
como consecuencia probable de la disminución de
los estrógenos circulantes.
47
A este respecto, exis-
ten estudios que indican que los estrógenos pro-
mueven la formación de 1,25(OH)
2
D
3
in vivo.
48,49
De hecho la reducción de estrógenos favorece la
pérdida de la masa ósea, y la administración de és-
tos en la mujer postmenopáusica incrementa las
concentraciones de calcitriol,
50
reduciendo el riesgo
de fracturas óseas en estos sujetos.
LA VITAMINA D Y EL EMBARAZO
El embarazo plantea grandes retos al organismo
materno, y uno de ellos es el de proveer de calcio al
feto sin alterar la homeostasis de dicho mineral. Al
término del embarazo el feto llega a acumular hasta
30 gramos de calcio, y para satisfacer esta demanda
el metabolismo de la vitamina D sufre ajustes que se
traducen en el aumento de las concentraciones san-
guíneas de 1,25-(OH)
2
D
3
, favoreciendo una mayor
absorción intestinal de calcio.
51
De hecho, las con-
centraciones de calcitriol se duplican a partir del pri-
mer trimestre del embarazo y se mantienen así has-
ta llegar a término.
52
La causa directa del incremen-
to en el calcitriol circulante no se explica fácilmente,
ya que este aumento no se asocia con bajas concen-
traciones de calcio o fósforo, las que en realidad se
encuentran ligeramente altas, y la regulación clásica
por la PTH tampoco se puede argumentar ya que en
el caso del embarazo los niveles de esta hormona se
encuentran dentro del rango normal.
53
Adicional-
mente el aumento de 1,25-(OH)
2
D
3
durante la gesta-

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ción es independiente de la PTH.
52
Debido a estas
observaciones, es factible suponer la existencia de
otros factores involucrados en la regulación del calci-
triol que expliquen la elevación de las concentracio-
nes circulantes de esta hormona desde etapas tem-
pranas del embarazo. Los posibles candidatos son el
estradiol, la prolactina (hPRL), el lactógeno placen-
tario (hPL), el IGF-I y el péptido relacionado con la
PTH (PTHrP). El estradiol, la hPRL, el IGF-I
12-14
y
el hPL han demostrado estimular la actividad de la
1α (OH)asa in vitro,
53
y el estradiol también in
vivo.
48,50
Por otro lado, el PTHrP activa al receptor
común para PTH/PTHrP en el riñón y el hueso, y
sus concentraciones aumentan de manera progresiva
conforme avanza el embarazo, por lo que es posible
que la PTHrP estimule la síntesis de calcitriol de
manera independiente a la PTH durante la gesta-
ción. Todos estos factores pueden explicar el incre-
mento en las concentraciones circulantes de calci-
triol en el embarazo. Además, se debe considerar la
contribución en la producción de 1,25-(OH)
2
D
3
por
parte del riñón fetal, así como la producción extra-
rrenal por la placenta. En apoyo a lo anterior, expe-
rimentos llevados a cabo en ratas preñadas anéfricas
han demostrado calcitriol de origen extrarrenal en la
circulación materna.
54
Sin embargo, es importante
mencionar que de manera general se ha considerado
que el incremento de 1,25-(OH)
2
D
3
durante el emba-
razo es consecuencia del aumento en la actividad de
la 1α (OH)asa renal materna,
53
por lo que el calci-
triol de origen extrarrenal en este periodo puede te-
ner un significado biológico de naturaleza autocrina
o paracrina.
Contribución placentaria de calcitriol
La primera evidencia sobre la síntesis extrarrenal
de 1,25-(OH)
2
D
3
, se obtuvo en ratas preñadas, en
donde la nefrectomía bilateral reducía, mas no elimi-
naba la conversión de [
3
H]25-(OH)D
3
en [
3
H]1-25-
(OH)
2
D
3
.
54
Posteriormente diversos investigadores
comprobaron la producción placentaria de calcitriol,
en lo que a la actividad de la 1α (OH)asa se refiere,
34-
36
y no fue sino hasta fechas más recientes que se lo-
gró confirmar la expresión del gen CYP27B1 en deci-
dua
55
y trofoblasto.
37
Estos trabajos permitieron definir
que la 1α (OH)asa de origen decidual, trofoblástica y re-
nal proviene del mismo gen.
El calcitriol en la placenta y el feto
Las concentraciones circulantes de calcitriol en
el feto son más bajos que en la madre, lo que pro-
bablemente se explique por el hecho de que el feto
es hipercalcémico cuando se compara con las con-
centraciones de calcio en el suero materno. Esta
situación demanda la presencia de mecanismos
que permitan el transporte de calcio madre-feto en
contra de un gradiente de concentración. La pla-
centa es el órgano encargado de transportar el cal-
cio de la madre al feto, y si bien este sistema no
está aún bien caracterizado, diversos mecanismos
que dan cuenta del transporte activo requerido,
han sido localizados en la placenta. Tal es el caso
de los canales de calcio y las proteínas acarreado-
ras de este nutrimento, como la calbindina D
9K
y la
ATPasa del calcio.
56
Esta última es la encargada
de bombear calcio desde las capas basales en la
cara fetal de la placenta hasta el fluido fetal extra-
celular. El calcitriol tiene un papel importante en
este sistema de transporte, ya que estimula el paso
transplacentario del calcio a manera dosis-depen-
diente
57
y promueve la producción del mARN de
las proteínas acarreadoras de calcio, así como favo-
rece el transporte activo de este mineral mante-
niendo la homeostasis materna y haciendo posible
que el calcio se encuentre disponible para la pla-
centa, y consecuentemente que se mineralice ade-
cuadamente el esqueleto fetal. Por otro lado, la
presencia de receptores específicos para la
1,25(OH)
2
D
3
en la placenta
58
sugiere que esta hor-
mona tiene funciones específicas en este órgano. A
este respecto, la interacción 1,25(OH)
2
D
3
-VDR ha
demostrado estimular la expresión y secreción de
hPL en sinciciotrofoblastos humanos
59
lo cual im-
plica la participación del calcitriol a través del hPL
en el crecimiento de la placenta y del feto. Adicio-
nalmente, los efectos de la 1,25(OH)
2
D
3
sobre la di-
ferenciación celular y el control de la expresión de
ciertos genes, pueden contribuir también en el esta-
blecimiento adecuado de la unidad feto-placentaria
durante las primeras etapas de la gestación. En
apoyo a esto último existen estudios en ratas que
señalan la participación directa de la 1,25(OH)
2
D
3
en la decidualización del endometrio,
60
induciendo
la diferenciación de las células endometriales a de-
ciduales, lo que representa un evento crucial en el
proceso de la implantación del blastocisto.
Por otro lado, la existencia de un modelo animal
en donde se ha modificado el dominio de unión al
ADN en el VDR, ha permitido el estudio de la au-
sencia en la actividad biológica del calcitriol in
vivo. Los ratones homocigotos (-/-) nacieron com-
pletamente normales pese a la deficiencia del VDR
durante toda la gestación, pero durante el primer
mes de vida desarrollaron hipocalcemia, hiperpa-
ratiroidismo y alopecia total. Sobrevivieron al me-
nos los primeros seis meses.
61

83Díaz L et al.
La vitamina D.
Rev Invest Clin 2001; 53 (1): 77-85
Consecuencias de la deficiencia y/o
alteraciones del metabolismo de
la vitamina D durante el embarazo
Aún cuando existen estudios que indican que es po-
sible el desarrollo de recién nacidos sanos de madres
que han cursado su embarazo con bajas concentracio-
nes de calcitriol,
62
hay muchos otros que demuestran
alteraciones. A este respecto algunas investigaciones
han reportado nacimientos de niños con hipocalce-
mia, raquitismo neonatal, o que lo desarrollan más
tarde y crecimiento intrauterino reducido en casos
donde la madre tenía concentraciones sanguíneas re-
ducidas de vitamina D.
63-65
Además, existen estudios
que indican que las concentraciones bajas de calcitriol
en el suero fetal se asocian con talla pequeña y bajo
contenido mineral en el recién nacido.
66
Adicional-
mente algunos trabajos demostraron alteraciones en
el desarrollo cardiaco o falla cardiaca neonatal como
consecuencia de la deficiencia materna de la vitamina
D.
67,68
Otros estudios han informado convulsiones e
hipocalcemia en el neonato, secundarios a la deficien-
cia materna de calcitriol;
69
y se ha propuesto que la
deficiencia materna de vitamina D impacta adversa-
mente el desarrollo del cerebro fetal.
70
Por otro lado, la patología del embarazo conocida
como preeclampsia, se asocia con bajas concentracio-
nes circulantes de 1,25-(OH)
2
D
3
;
71,72
y si bien las
causas de esto no se conocen es probable que esta ca-
racterística sea consecuencia de deficiencias en la
función endocrina de la placenta, del riñón materno
o de ambos. En este padecimiento el neonato nace
generalmente con bajo peso al nacer.
CONCLUSIÓN
Recientemente se han logrado grandes avances en
el conocimiento de la vitamina D, tanto en el campo
de la ciencia básica como en la medicina clínica. La
visión clásica de la vitamina D como una hormona
cuyos efectos se limitaban al metabolismo del calcio
y la homeostasis del hueso, se ha revolucionado ex-
tensamente. Actualmente los estudios sobre la vita-
mina D consideran las acciones recientemente des-
critas que esta hormona ejerce sobre la proliferación
y la diferenciación celular, así como sobre el sistema
inmunológico. Esto último ha abierto todo un campo
de investigación en procesos de salud, enfermedad y
embarazo, en donde la vitamina D ha cobrado rele-
vancia. Adicionalmente, el potencial terapéutico de
la vitamina D sobre diversas enfermedades ha gene-
rado una búsqueda de análogos del calcitriol con
efectos antiproliferativos, inmunosupresores y que
favorecen la diferenciación celular.
AGRADECIMIENTOS
Agradecimiento al Consejo Nacional de Ciencia y
Tecnología (CONACYT), por el apoyo económico
prestado al proyecto 31036-M y por la beca de Docto-
rado con número de registro 125094.
REFERENCIAS
1. Mellanby E. Experimental rickets. Spec Rep Med Res Council (GB)
1921; SRS61: 4
2. Windaus A, Linsert O, Lüttringhaus A, Weidlich G. Crystalline-vi-
tamin D
2
. Ann Chem 1932; 492: 226-241.
3. Brockmann H. Die Isolierung des antirachitischen Vitamins aus
Thunfischleberol. Hoppe Seylers Z Physiol Chem 1936; 241:104-15.
4. Holick MF, MacLaughlin JA, Clarck MB, Holick SA, Potts TJ, An-
derson RR, Blank IH, Parrish JA et al. Photosynthesis of previtamin
D
3
in human skin and the physiologic consequences. Science 1980;
210: 203-5.
5. Tsai HC, Norman AW. Studies on calciferol metabolism. VIII. Evi-
dence for a cytoplasmic receptor for 1,25-dihydroxyvitamin D
3
in
the intestinal mucosa. J Biol Chem 1972; 248: 5967-75.
6. Brown AJ, Dusso A, Slatopolsky E. Vitamin D. Am J Physiol 1999;
277:F157-75.
7. Bouillon R, Okamura WH, Norman AW. Structure-function relation-
ships in the vitamin D endocrine system. Endocrine Rev 1995; 16:
200-57.
8. Norman AW. Rapid biological responses mediated by 1α,25-di-
hydroxyvitamin D
3
: A case study of transcaltachia (rapid hormonal
stimulation of intestinal calcium transport). In: “Vitamin D”. USA:
Academic Press, Chap. 15, 1997: 233-256.
9. Nemere I, Yoshimoto Y, Norman AW. Studies on the mode of ac-
tion of calciferol. Calcium transport in perfused duodena from nor-
mal chicks: Enhancement with 14 minutes of exposure to 1,25-di-
hydroxyvitamin D
3
. Endocrinology 1984; 115: 1476-83.
10. Zhou L, Nemere I, Norman AW. 1,25(OH)
2
D
3
analog structure-
function assessment of the rapid stimulation of intestinal calcium
absorption (transcaltachia). J Bone Miner Res 1992; 7:457-63.
11. Hanukoglu I. Steroidogenic enzymes: Structure, function, and role
in regulation of steroid hormone biosynthesis. J Steroid Biochem
Molec Biol 1992; 43: 779-99.
12. Nesbitt T, Drezner MK. Insulin-like growth factor-I regulation of
renal 25-hydroxyvitamin D 1-hydroxylase activity. Endocrinology
1993; 132: 133-8.
13. Menaa C, Vrtovsnik F, Friedlander G, Corvol M, Garabèdian M.
Insuline-like growth factor I, a unique calcium-dependent stimula-
tor of 1,25-dihydroxyvitamin D3 production. J Biol Chem 1995;
270: 25461-7.
14. Halhali A, Díaz L, Sánchez I, Garabèdian M, Bourges H, Larrea F.
Effects of IGF-I on 1,25-dihydroxyvitamin D
3
synthesis by human
placenta in culture. Molec Human Rep 1999; 5: 771-6.
15. Kawashima H, Torikaki S, Kurokawa K. Calcitonin selectively sti-
mulates 25-hydroxyvitamin D
3
-1α-hydroxylase in proximal straig-
ht tubule of rat kidney. Nature 1981; 291: 327-9.
16. Cunningham NS, Lee BS, Henry HL. The renal metabolism of 25-
hydroxyvitamin D
3
: A possible role of phospholipids. Biochem
Biophys Acta 1986; 881: 480-8.
17. Henry HL. Effect of ketoconazole and miconazole on 25-
hydroxyvitamin D
3
metabolism by cultured chick kidney cells. J
Steroid Biochem Mol Biol 1985; 23: 991-4.
18. Fu Glenn K, Lin D, Zhang M, Bikle D, Scackleton C, Miller W,
Portale A. Cloning of human 25-hydroxyvitamin D
3
1α-hydroxyla-
se and mutations causing vitamin D-dependent rickets type 1. Mol
Endocrinol 1997; 11: 1961-70.

Díaz L et al.
La vitamina D.
Rev Invest Clin 2001; 53 (1): 77-8584
19. Monkawa T, Yoshida T, Wakino S, Shinki T, Anazawa H, DeLuca
HF, Suda T, Hayashi M Saruta T. Molecular cloning of cDNA and
genomic DNA for human 25-hydroxyvitamin D
3
1α-hydroxylase.
Biochem Biophys Res Comm 1997; 239: 527-33.
20. Glorieux FH, St-Arnaud R. Molecular cloning of (25-OH-D)-1α-
hydroxylase: An approach to the understanding of vitamin D pseu-
do-deficiency. Recent Prog Horm Res 1998; 53: 341-9.
21. Yoshida T, Yoshida N, Nakamura A, Monkawa T, Hayashi M,
Saruta T. Cloning of porcine 25-hydroxyvitamin D
3
1α-hydroxyla-
se and its regulation by cAMP in LLC-PK1 cells. J Am Soc Nephrol
1999; 10: 963-70.
22. Kong XF, Zhu XH, Pei YL, Jackson DM, Holick MF. Molecular
cloning, characterization, and promoter analysis of the human 25-
hydroxyvitamin D
3
-1α-hydroxylase gene. Proc Natl Acad Sci USA
1999; 96: 6988-93.
23. Henry HL. Parathyroid hormone modulation of 25-hydroxyvitamin
D
3
metabolism by cultured chick kidney cells is mimicked and en-
hanced by forskolin. Endocrinology 1985; 116: 503-10.
24. Henry HL, Dutta C, Cunningham N, Blanchard R, Penny R, Tang
C, Marchetto G, Chou SY. The cellular and molecular regulation of
1,25(OH)
2
D
3
production. J Steroid Biochem Molec Biol 1992; 41:
401-7.
25. Jones G, Ramshaw H, Zhang A, Cook R, Byford V, White J, Petko-
vich M. Expression and activity of vitamin D-metabolizing cyto-
chrome P450s (CYP1 alpha and CYP24) in human nonsmall cell
lung carcinomas. Endocrinology 1999; 140: 3303-10.
26. Omdahl J, May B. The 25-hydroxyvitamin D 24-hydroxylase. In:
“Vitamin D”. USA: Academic Press, Chap. 6, 1997: 69-86.
27. Takeyama K, Kitanaka S, Sato T, Kobori M, Yanagisawa J, Kato S.
25-Hydroxyvitamin D
3
1α-hydroxylase and vitamin D synthesis.
Science 1997; 277: 1827-30.
28. Murayama A, Takeyama K, Kitanaka S, Kodera Y, Kawaguchi Y,
Hosoya T, Kato S. Positive and negative regulation of renal 25-
hydroxyvitamin D
3
1alpha-hydroxylase gene by parathyroid hor-
mone, calcitonin and 1alpha, 25(OH)
2
D
3
in intact animals. Endo-
crinology 1999; 140: 2224-31.
29. Norman AW. Evidence for a new kidney produced hormone, 1,25-
dihydroxycholecalciferol, the proposed biologically active form of
vitamin D. Am J Clin Nutr 1971; 24: 1346-51.
30. Fraser DR, Kodicek E. Unique biosynthesis by kidney of a biologi-
cally active vitamin D metabolite. Nature 1970; 288: 764-6.
31. Sempere AJ, Grimberg R, Silve C, Tau C, Garabèdian M. Evidence
for extrarenal production of 1,25-dihydroxyvitamin during physio-
logical bone growth: In vivo and in vitro production by deer antler
cells. Endocrinology 1989; 125: 2312-9.
32. Turner RT, Puzas JE, Forte MD, Lester GE, Gray TK, Howard GA,
Baylink DJ. In vitro synthesis of 1α,25-dihydroxycholecalciferol
and 24,25-dihydroxycholecalciferol by isolated calvarial cells.
Proc Natl Acad Sci USA 1980; 77: 5720-4.
33. Schwartz GG, Whitlatch LW, Chen TC, Lokeshwar BL, Holick
MF. Human prostate cells synthesize 1,25-dihydroxyvitamin D
3
from 25-hydroxyvitamin D
3
. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev
1998; 7: 391-5.
34. Whitsett JA, Ho M, Tsang RC, Norman EJ, Adams KG. Synthesis
of 1,25-dihydroxyvitamin D
3
by human placenta in vitro. J Clin
Endocrinol Metab 1981; 53: 484-8.
35. Zerwekh JE, Breslau NA. Human placental production of 1α,25-
dihydroxyvitamin D
3
: Biochemical characterization and produc-
tion in normal subjects and patients with pseudohypopara-
thyroidism. J Clin Endocrinol Metab 1986; 62: 192-6.
36. Weisman YH, Edelstein S, Davis M, Spirer Z, Golander A. 1,25-
dihydroxyvitamin D
3
and 24, 25-dihydroxyvitamin D in vitro
synthesis by human decidua and placenta. Nature 1979; 281:
317-9.
37. Díaz L, Sánchez I, Avila E, Halhali A, Vilchis F, Larrea F. Iden-
tification of a 25-hydroxyvitamin D
3
1α-hydroxylase gene trans-
cription product in cultures of human syncytiotrophoblast cells.
J Clin Endocrinol Metab 2000; 85: 2543-9.
38. Bickle DD, Nemanic MK, Gee E, Elias P. 1,25-dihydroxyvitamin D
3
production by human keratinocytes. J Clin Invest 1986; 78: 557-66.
39. Hewison M, O’Riordan JL. Hormone-nuclear receptor interactions
in health and disease. Vitamin D resistance. Baillieres Clin Endocr
Metab 1994; 8: 305-15.
40. Brooks MH, Bell NH, Love L, Stern PH, Orfei E, Queener SF, Ha-
mstra AJ, DeLuca HF. Vitamin D dependent rickets type II: Resis-
tance of target organs to 1,25-dihydroxyvitamin D. N Engl J Med
1978; 298: 996-9.
41. St-Arnaud R, Messerlian S, Moir JM, Omdahl JL, Glorieux FH.
The 25-hydroxyvitamin D 1 alpha-hydroxylase gene maps to the
pseudovitamin D deficiency rickets (PDDR) disease locus. J Bone
Miner Res 1997; 12: 1552-9.
42. Monkawa T, Yoshida T, Hayashi M, Saruta T. Identification of 25-
hydroxyvitamin D3 1alpha-hydroxylase gene expression in macro-
phages. Kidney Int 2000; 58: 559-68.
43. Adams JS. Extrarenal production and action of active vitamin D
metabolites in human lymphoproliferative diseases. In: “Vitamin
D”. USA: Academic Press, 1997: 903-21.
44. Halloran BP, Portale AA. Vitamin D metabolism: The effects of
aging. In: “Vitamin D”. USA: Academic Press, 1997: 541-54.
45. Aksnes L, Rodland O, Odegaard OR, Bakke KJ, Aarskog D. Serum
levels of vitamin D metabolites in the elderly. Acta Endocrinol
1989; 121: 27-33.
46. Armbrecht HJ, Zenser TV, Davis BB. Effect of age on the conver-
sion of 25-hydroxyvitamin D to 1,25-dihydroxyvitamin D by the
kidney of the rat. J Clin Invest 1980; 66: 1118-23.
47. Sowers MR, Wallace RB, Hollis BW. The relationship of 1,25-di-
hydroxyvitamin D and radial bone mass. Bone Miner 1990; 10: 139-48.
48. Buchanan JR, Santen R, Cauffman S, Cavaliere A, Greer RB, Demers
LM. The effect of endogenous estrogen fluctuation on metabolism of 25-
hydroxyvitamin D. Calcif Tissue Int 1986; 39: 139-44.
49. Cheema C, Grant BF, Marcus R. Effects of estrogen on circulating
“free” and total 1,25-dihydroxyvitamin D and on the parathyroid-
vitamin D axis in postmenopausal women. J Clin Invest 1989; 83:
537-42.
50. Marcus R, Villa ML, Cheema M, Cheema C, Newhall K, Holloway
L. Effects of conjugated estrogen on the calcitriol response to para-
thyroid hormone in postmenopausal women. J Clin Endocrinol Me-
tab 1992; 74: 413-8.
51. Kumar R, Cohen WR, Silva P, Epstein FH. Elevated 1,25-di-
hydroxyvitamin D plasma levels in normal human pregnancy and
lactation. J Clin Invest 1979; 63: 342-4.
52. Reddy GS, Norman AW, Willis DM, Goltzman D, Guyda H, Solomon S,
Philips DR, Bishop JE, Mayer E. Regulation of vitamin D metabolism in
normal human pregnancy. J Clin Endocrinol Metab 1983; 56: 363-70.
53. Kovacs CS, Kronenberg HM. Maternal-fetal calcium and bone metabo-
lism during pregnancy, puerperium and lactation. Endocr Rev 1997; 18:
832-72.
54. Weisman YH, Vargas A, Duckett G, Reiter E, Root AW. Synthesis of
1,25-dihydroxyvitamin D
3
in the nephrectomized pregnant rat. Endocrino-
logy 1978; 103: 1992-6.
55. Glorieux FH, Arabian A, Delvin A, Delvin EE. Pseudovitamin D deficien-
cy: Absence of 25- hydroxyvitamin D 1α hydroxylase activity in human
decidual cells. J Clin Endocrinol Metab 1995; 80: 2255-8.
56. Sibley CP. Mechanisms of ion transfer by the rat placenta: A model for the
human placenta? Placenta 1994; 15: 675-91.
57. Tuane RS, Kirwin JJ, Akins RE, Wong M. In vitro study of placental tro-
phoblast calcium uptake using JEG-3 human choriocarcinoma cells. J Cell
Sci 1991; 98: 333-42.
58. Tanamura A, Nomura S, Kurauchi O, Furui T, Mizutani S, Tomoda Y.
Purification and characterization of 1,25(OH)2D3 receptor from human
placenta. J Obstet Gynaecol 1995; 21: 631-9.
59. Stephanou A, Ross R, Handwerger S. Regulation of human placental lac-

85Díaz L et al.
La vitamina D.
Rev Invest Clin 2001; 53 (1): 77-85
togen expression by 1,25-dihydroxyvitamin D
3
. Endocrinology 1994;
135: 2651-6.
60. Halhali A, Acker GM, Garabèdian M. 1.25-dihydroxyvitamin D3 in-
duces in vivo the decidualization of rat endometrial cells. J Reprod
Fert 1991; 91: 59-64.
61. Li YC, Pirro AE, Amling M, Delling G, Baron R, Bronson R, De-
may MB. Targeted ablation of the vitamin D receptor: An animal
model of vitamin D dependent rickets type II with alopecia. Proc
Natl Acad Sci USA 1997; 94: 9831-5.
62. Campbell DE, Fleischman AR. Rickets of prematurity: Controver-
sies in causation and prevention. Clin Perinatol 1988; 15: 879-90.
63. Wang LY, Hung HY, Hsu CH, Shih SL, Lee YJ. Congenital rickets,
a patient report. J Pediatr Endocrinol Metab 1997; 10: 437-41.
64. Blond MH, Glod F, Pierre f, Berger C, Guerois M, Queru MS, Ram-
poni N. Nutritional fetal rickets. A case report. J Gynecol Obstet
Biol Reprod 1997; 26: 834-6.
65. Brunvand L, Quigstad E, Urdal P, Haug E. Vitamin D deficiency
and fetal growth. Early Hum Dev 1996; 45: 27-33.
66. Namgung R, Tsang RC, Specker BL, Sierra RL, Ho ML. Reduced
serum osteocalcin and 1,25-dihydroxyvitamin D concentrations and
low bone mineral content in small for gestation age infants: Eviden-
ce of decreased bone formation rates. J Pediatr 1993; 112: 269-75.
67. Memmi I, Brauner R, Sidi D, Sauvion S, Souberbielle JC, Gara-
bèdian M. Neonatal cardiac failure secondary to hypocalcemia cau-
sed by maternal vitamin D deficiency. Arch Fr Pediatr 1993; 50:
787-91.
68. Morris GS, Zhou Q, Hegsted M, Keenan MJ. Maternal consumption
of low vitamin D diet retards metabolic and contractile development
in the neonatal rat heart. J Mol Cell Cardiol 1995; 27: 1245-50.
69. Oki J, Takedatsu M, Itoh J, Yano K, Cho K, Okuno A. Hypocalce-
mic focal seizures in a one-month-old infant of a mother with a low
circulating level of vitamin D. Brain Dev 1991; 13: 132-4.
70. McGrath J. Hypothesis: Is low prenatal vitamin D a risk-modifying
factor for schizophrenia? Schizophr Res 1999; 40: 173-7.
71. August P, Marcaccio B, Gertner JM, Druzin ML, Resnick LM, La-
ragh JH. Abnormal 1,25-dihydroxyvitamin D metabolism in pree-
clampsia. Am J Obstet Gynecol. 1992; 166: 1295-9.
72. Halhali A, Tovar AR, Torres N, Bourges H, Garabèdian M, Larrea
F. Preeclampsia is associated with low circulating levels of insulin-
like growth factor I and 1,25-dihydroxyvitamin D in maternal and
umbilical cord compartments. J Clin Endocrinol and Metab 2000;
85: 1828-33.
Reimpresos:
Biol. Lorenza Díaz
Instituto Nacional de Ciencias Médicas y
Nutrición Salvador Zubirán
Vasco de Quiroga No 15
Tlalpan 14000
México, DF.
Tel: (525)573-11-60
Fax: (525) 655-98-59
E-mail: lorenzadiaz@hotmail.com
Recibido el 26 de septiembre de 2000.
Aceptado el 05 de diciembre de 2000.