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ABSTRACT: Se estudió la respuesta de anticuerpos inducida por la vacuna antimeningocócica cubana VA-MENGOC-BC® contra la cepa deNeisseria meningitidis B:4:P1.19,15 mediante el Ensayo Bactericida del Suero (EBS) y ELISA de tipo indirecto, para medir anticuerpos contra vesículas de membrana externa (VME) de N. meningitidis B a 184 adolescentes de un politécnico de Ciego de Ávila que fueron inmunizados en campañas masivas 12 años antes. Se realizaron extracciones de sangre antes de aplicar la primera dosis (T0), 4 semanas después de ésta (T1) y 4 semanas después de la segunda dosis (T2). Transcurridos 12 años de esta vacunación el 42% de los adolescentes presentó títulos bactericidas ≥ 1:4 frente a la cepa homóloga (B:4:P1.19,15) y el 98% mostró anticuerpos detectablescontra las VME. En el EBS; el porcentaje de seroconversión T1/T0 fue del 57% y T2/T0 del 60%. Mediante ELISA la seroconversiónfue del 59% y 54%, respectivamente, por lo que se demostró que la aplicación de una sola dosis después de 12 años indujo unarespuesta inmune importante que puede sugerir una respuesta anamnésica.
VacciMonitor. 01/2006;
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ABSTRACT: Como parte de los estudios de caracterización de la respuesta inmune inducida en vacunados con vax-SPIRAL (Vacuna Antileptospirósica Trivalente) se vacunaron 109 y 69 voluntarios pertenecientes a la Universidad Agraria y al Centro de Sanidad Agropecuaria respectivamente, pertenecientes al municipio San José de Las Lajas,provincia La Habana. Se realizaron dos muestreos de sangre: antes de la aplicación de la primera dosis (T0) y 21 días después de la segunda dosis (T1). La IgG específica fue medida mediante un ELISA indirecto cuantitativo y su efecto protector se midió mediante un ensayo de protección pasiva en hámster. De acuerdo con el nivel deIgG específica medido por ELISA, se prepararon cuatro mezclas de sueros a evaluar. Entre las 18-24 h de inoculados los sueros, los hámsters se retaron frente a 1 000 -10 000 DL50 de los serovares canicola,copenhageni y mozdok, siendo observados durante 14 días. Coeficientes de correlación de 0,94 y 0,97 indicaron una fuerte relación entre el nivel de IgG y protección en el caso de canicola y mozdok respectivamente, para copenhageni se obtuvo un coeficiente de correlación de 0,83 indicativo de una moderadamente fuerte relación. El nivel de IgG específica medido en el suero de personas expuestas al riesgo natural está relacionado con la protección.
VacciMonitor. 01/2001;
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ABSTRACT: Con el objetivo de evaluar la respuesta inmune inducida por la vacuna cubana vax-SPIRAL se desarrollaron tres ELISAs de tipo indirecto para la cuantificación de IgG humana antileptospira, en el cual se emplearon como antígenos de captura las células enteras de Leptospira interrogans de los serovares canicola canicola,icterohaemorrhagiae copenhageni y pomona mozdok, inactivadas con formaldehído y posteriormente desecadas a 33 °C durante 16-20 h en placas para ELISA. Para la cuantificación se empleó un suero estándar al que se le asignaron unidades rbitrarias,correspondientes al recíproco del título obtenido por microaglutinación (MAT).Estos fueron 31, 12 y 58 U/mL respectivamente para los tres serovares señalados que se incluyen en el preparado vacunal. Se utilizó un conjugado anti IgG humana-peroxidasa, el cual se une a los anticuerpos específicos contra cada serovar, la reacción se evidencia por la acción de la enzima sobre la mezcla sustratocromógeno (ortofenilendiamina) que genera color. El método normalizado se validó para los tres serovares; la precisión intra e interensayos fueron excelentes, con coeficientes de variación inferiores al 10%. Las desviaciones de la recuperación y linealidad fueron también inferiores al 10%. El suero control se ubicaron paralos tres serovares en la zona de mayor interés para las muestras. Los ELISAs mostraron un 100% de sensibilidad para los tres serovares y se obtuvieron valores de 93,33% de especificidad para los serovarescanicola canicola e icterohaemorrhagiae copenagheni y de 100% para el serovar pomona mozdok. El límite de detección para cada uno de los serovares fue de 0,478; 0,127 y 0,632 U/mL respectivamente.
VacciMonitor. 01/2001;
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Juan F. Infante,
Jorge E. Mayo,
Sifontes Sergio,
Pedroso Eslie,
Muñoz. Enrique,
Fariñas Mildrey,
Gutiérrez Mercedes, Ochoa Rolando,
Juan C. Martínez,
Annet Aida,
María A. Camaraza
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ABSTRACT: La alta incidencia mundial de meningitis meningocócica por Neisseria meningitidis serogrupo B (N. meningitidis)movilizó los recursos de la ciencia hacia su enfrentamiento en un período corto de tiempo. Para el estudio de esta enfermedad fue imprescindible desarrollar modelos experimentales que posibilitaran caracterizar no sólo lacapacidad inmunogénica y protectora de los candidatos vacunales, sino también la toxigenicidad del producto.El estudio basado en el modelo ratón Balb/c con la utilización de factores estimulantes de la virulencia, posibilitó el desarrollo experimental de la enfermedad. Consistió en la aplicación de diferentes esquemas de dosis y diluciones de la vacuna (1/2, 1/4, 1/8, 1/16) en solución salina fisiológica 0,85%. Se conformaron 15 grupos de ocho animales cada uno que previamente recibieron Dextrana Férrica (IMEFA) y mucina gástrica de cerdo 8% en un volumen total de 0,4 mL, y un grupo control al que le fue administrada la vacuna pura. Se empleó para el reto la cepa 385 de N. meningitidis con una concentración del inóculo de 107 UFC/mL. El esquema de vacunación contempló grupos vacunados con 1, 2, y 3 dosis a los 0,15 y 30 días. Se administraron 0,2 mL del inóculo de N. meningitidis por vía intraperitoneal. Se determinó la dosis letal media (DL50), anticuerpos bactericidas, respuesta serológica por el método de ELISA y se calculó la protección conferida. Se aplicó elmétodo de Log rank para la comparación de los tiempos de sobrevivencia y para el ensayo de ELISA se aplicó el método de superficie ajustada por SPLINE. Hemos demostrado la utilidad del biomodelo ratón Balb/c para comprobar la eficacia de la vacuna VA-MENGOC-BC®. Quedó demostrada la correlación entre los niveles deanticuerpos y la protección conferida por la vacuna, comprobándose además por los ensayos de reto. Se logró obtener una aproximación con respecto a los límites de eficacia de VA-MENGOC-BC® mediante diluciones consecutivas del producto en la línea de ratones Balb/c.
VacciMonitor. 01/2001;
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ABSTRACT: Para medir el grado de protección inducido por vacunas antimeningocócicas se ha establecido el Ensayo Bactericida en Suero (EBS) y se perfeccionan otros ensayos inmunobiológicos, sin embargo, es necesario contar con pruebas sencillas como el ELISA, capaz de evaluar un gran número de muestras. Se estimó el nivel de cortede los ELISAs para la cuantificación de IgG humana contra los antígenos de VA-MENGOC-BC, vacuna antimeningocócica compuesta por vesículas proteicas de membrana externa de meningococo B y polisacárido capsular de meningococo C, con respecto a un panel de muestras de suero de lactantes, caracterizado por Ensayo Bactericida en Sangre Total (EBST). Los valores correspondientes a la máxima sensibilidad y especificidad fueron respectivamente; 2 µg/mL y 12 µg/mL para antipolisacárido C, y 1000 U/mL y 7000 U/mLpara antiproteínas de membrana externa. La mayor coincidencia se obtuvo con 6 µg/mL y 2500 U/mL. Se evaluó otro panel de muestras de suero de adolescentes entre 14 y 18 años, por ELISA y EBS para Neisseria meningitidis serogrupos B y C, alcanzándose una buena concordancia. Doce años después de la inmunización con VA-MENGOC-BC persiste una importante concentración de anticuerpos contra los antígenos vacunales en los sueros estudiados.
VacciMonitor. 01/2001;
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ABSTRACT: La respuesta IgG sérica inducida por la aplicación de la vacuna antileptospirósica trivalente (canicola,copenhageni, mozdok) vax-SPIRAL fue evaluada en dos poblaciones de riesgo del municipio San José de Las Lajas, La Habana, Cuba. Fueron determinados los niveles de anticuerpos IgG antes y después de la vacunación mediante ELISA, empleando como antígeno de recubrimiento células completas inactivadas de los serovares componentes de la vacuna. Se definió como criterio de respuesta el incremento en dos veces de laconcentración de IgG posterior a la vacunación. La vacuna indujo una respuesta de anticuerpos IgG similar para los tres serovares en ambas poblaciones, obteniéndose entre 63,77% y 70,04% de respuesta. Se observó una elevada seroprevalencia de anticuerpos contra los tres serovares antes de la vacunación. Se obtuvieron ademásdiferencias estadísticas significativas (p<0,05) entre los niveles de IgG antes y después de la vacunación en las dos poblaciones. Estos resultados constituyen la primera demostración de la capacidad inmunogénica de vax-SPIRAL en población de riesgo expuesta y una evidencia de que la respuesta está influenciada, entre otrosfactores, por el contacto previo con el germen.
VacciMonitor. 01/2001;
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ABSTRACT: Se realizó una revisión sobre la estandarización de técnicas inmunoenzimáticas para ensayos preclínicos y clínicos de vacunas, elaborándose una guía práctica. Se analizan los principios a usar y los pasos a seguir para la optimización de un ensayo, incluyendo la preparación de estándares y controles. Se exponen nuestrasexperiencias.
VacciMonitor. 01/2000;
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ABSTRACT: Se realizó una revisión y actualización sobre la importancia de la validación de los inmunoensayos cualitativos usados para evaluar la inmunogenicidad de vacunas, sus principios y procedimientos. Se discutieron los principales parámetros empleados para evaluar estas técnicas. Se analizaron detalladamente los procedimientos para estudiar la sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos, valor de discriminación y zona gris. Se exponen nuestrasexperiencias.
VacciMonitor. 01/2000;
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ABSTRACT: En este trabajo se utilizaron cinco detergentes para restaurar las proteínas de membrana externas (PME) del meningococo dañadas por el efecto del calor y de agentes reductores utilizados en el Inmunoblotting. La acción de los detergentes fue evaluada en la solución de lavado, en el diluente de la muestra y del conjugado. Lasbandas de proteínas, reconocidas por la IgG del suero, fueron identificadas usando un conjugado anti IgG humana peroxidasa. Los antígenos reconocidos por el control positivo se corresponden con las proteínas P1, P3, P4 y P5 atendiendo a su peso molecular. Además, fueron reconocidas bandas de 80, 70, 24 kDa y otra con pesomayor a 150 kDa. En general el reconocimiento de todas las PME, excepto esta última de alto peso molecular (APM), se vieron favorecidas con la utilización del Tween 20, con el que se logró un incremento del número y la intensidad de las bandas así como la disminución de los fondos con respecto al resto de detergentes evaluados (Empigen BB, Triton X-100, Nonidet NP-40 y CHAPS). El reconocimiento de la proteína de APM (>150 kDa) sevio afectado por la presencia de detergente como el Tween 20 y Empigen BB. Los lavados con Tween 20 constituyeron los pasos más importantes en la renaturalización de los sitios de unión de la IgG a las PME.
VacciMonitor. 01/2000;
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ABSTRACT: Se desarrolló un ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA) de tipo indirecto para la cuantificación de antitoxina tetánica en suero humano, con el empleo de un estándar previamente calibrado. Las imprecisiones intra e interensayo fueron de alrededor del 10%. Este ensayo mostró una excelente exactitud, con valores derecuperación entre 90% y 110%. Las desviaciones del paralelismo estuvieron por debajo del 10%; éstas se evaluaron mediante diluciones que involucraban el rango de trabajo de la curva estándar. El límite de detección fue 0,0016 Unidades Internacionales por mL (UI/mL). El ensayo mostró una buena correlación con la prueba de neutralización (R2=0,9862). La ecuación de ajuste lineal fue: ELISA = 0,993 ensayo de neutralización – 0,2143.Se cuantificó la antitoxina tetánica en muestras de suero de 408 niños entre 1 a 5 años de edad, aleatoriamente seleccionados en Ciudad de La Habana y cada edad se analizó por separado. La mayor respuesta se alcanzó a los 2 años de edad, al completarse el esquema básico de inmunización. Todos los niños presentaron valoressuperiores al nivel mínimo protector (0,01 UI/mL).
VacciMonitor. 01/2000;
