Ventura

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• Article: Construção de um vetor adenoviral carregando o gene da timidina kinase de herpes simples e teste de sua eficácia em eliminar células tumorais "in vitro."

  Geraldo Santana. Magalhães, Ventura, Armando Morais
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  ABSTRACT: O tratamento de câncer usando terapia gênica é baseado em adicionar uma propriedade às células de forma a induzir sua eliminação. Uma das possibilidades para isto é o uso de genes suicidas que codificam enzimas que transformam uma prodroga em um produto citotóxico. O gene suicida mais extensivamente usado é o gene da timidina kinase de herpes simplex (TK), associado à administração da droga antiviral ganciclovir. Dentre as alternativas para introduzir genes em células, o adenovírus é um dos mais promissores candidatos devido a suas várias características biológicas. Neste trabalho, para obtermos o adenovírus recombinante nós usamos o método da a ligação direta "in vitro" de um plasmídio (contendo a maioria do genoma viral) como cassete contendo o gene TK e seus promotores. Em experimentos onde células HeLa e CCR2 foram transduzidas com este AdTK, foi observado a indução de morte celular de forma eficiente. Em nossos experimentos conseguimos detectar um fenômeno quetem sido chamado de efeito "bystander." Dissertação (Mestrado).
• Article: Modificação de adenovírus do tipo 2 através de uma mutação na proteína de capsídeo fibra para utilização em terapia gênica e imunização.

  Luiz Fernando Celidônio. Zerbini, Ventura, Armando Morais
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  ABSTRACT: Os adenovírus humanos têm sido utilizados como vetores em terapia gênica e imunização devido, entre outras propriedades, à sua capacidade de infectar diferentes tipos de células. A modificação do tropismo permitiria que estes vetores fossemcapazes de infectar somente células de interesse. A mutação de proteínas de capsídeo é uma estratégia factível que permitiria uma melhor utilização destes vetores. Neste trabalho, nós fizemos uma substituição de 44 aminoácidos da regiãoC-terminal da proteína fibra do adenovírus tipo 2, pelo domínio C4 da gp120 do vírus da imunodeficiência humana. Esta substituição foi realizada através da estratégias de subclonagem do genoma viral e PCR externo. A obtenção do vírus recobinantefoi feita pela cotransfecção, em células HEK 293, do genoma íntegro de Ad2 e de um plasmídio contendo o gene da fibra modificado. Nossos resultados mostraram a obtenção do vírus recombinante misturado ao adenovírus selvagem. O DNA viralrecombinante foi detectado em ensaio de "Southern Blot", utilizando uma sonda específica para o domínio C4 e a proteína híbrida foi caracterizada através de ensaio de imunoprecipitação, utilizando-se um anticorpo monoclonal contra o domínio C4 eum anticorpo anti-fibra. Estes dados demonstram a viabilidade do sistema descrito, para a modificação de tropismo de vetores adenovirais. Tese (Doutorado).