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    ABSTRACT: Leishmaniasis represents a serious public health problem worldwide. The first line of treatment is based on glucantime and pentostan, which generate toxic effects in treated patients. We have recently shown that amiodarone, frequently used as an antiarrhythmic, possesses activity against Trypanosoma cruzi through the disruption of mitochondrial Ca(2+) homeostasis and the inhibition of parasite ergosterol biosynthesis, specifically at the level of oxidosqualene cyclase activity (G. Benaim, J. Sanders, Y. Garcia-Marchan, C. Colina, R. Lira, A. Caldera, G. Payares, C. Sanoja, J. Burgos, A. Leon-Rossell, J. Concepcion, A. Schijman, M. Levin, E. Oldfield, and J. Urbina, J. Med. Chem. 49:892-899, 2006). Here we show that at therapeutic concentrations, amiodarone has a profound effect on the viability of Leishmania mexicana promastigotes. Additionally, its effect on the viability of the parasite was greater against intracellular amastigotes than against promastigotes, and it did not affect the host cell. Using fluorimetric and confocal microscopy techniques, we also demonstrated that the mechanism of action of amiodarone was related to the disruption of intracellular Ca(2+) homeostasis through a direct action not only on the mitochondria but also on the acidocalcisomes. On the other hand, analysis of the free sterols in promastigotes incubated with amiodarone showed that this drug also affected the biosynthesis of 5-dehydroepisterol, which results in squalene accumulation, thus suggesting that amiodarone inhibits the squalene epoxidase activity of the parasite. Taken together, the results obtained in the present work point to a more general effect of amiodarone in trypanosomatids, opening potential therapeutic possibilities for this infectious disease.
    Antimicrobial Agents and Chemotherapy 02/2009; 53(4):1403-10. · 4.57 Impact Factor
  • Boletín de Malariología y Salud Ambiental 06/2008; 48(1):35-43. · 0.17 Impact Factor
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    ABSTRACT: La leishmaniasis representa actualmente un serio problema de salud pública a nivel mundial. Las drogas de primera línea para el tratamiento de esta enfermedad son los antimoniales pentavalentes glucantime y pentostan, los cuales generan graves efectos tóxicos en los pacientes tratados. Por ello, existe un interés creciente en la búsqueda de nuevas drogas para el tratamiento de esta enfermedad. La miltefosina, demostró tener una alta actividad parasiticida sobre L. mexicana, determinándose que su mecanismo de acción esta relacionado con la inhibición de la síntesis de fosfatidilcolina. Por otra parte, la amiodarona presentó un potente efecto sobre la viabilidad de T. cruzi, determinándose que afecta la homeóstasis de Ca +2 mitocondrial y la biosíntesis de ergosterol en estos parásitos. Sin embargo, no existe evidencia alguna de la relación del efecto de la miltefosina sobre la homeóstasis de Ca +2 en L. mexicana ni del efecto de la amiodarona sobre estos parásitos. En este orden de ideas, nos proponemos determinar el efecto las drogas amiodarona y miltefosina sobre de L. mexicana. A través de experimentos con los marcadores fluorescentes Fura 2-AM y Rodamina 123, demostramos que ambos fármacos son capaces de incrementar significativamente los niveles intracelulares de Ca +2 . En particular, la amiodarona genera una disrupción de la homeóstasis intramitocondrial de este catión. Mediante estudios de cromatografía de gases acoplado a un espectrómetro de masas realizados sobre parásitos incubados con ambos fármacos (individualmente y en combinación), logramos demostrar que otra vía de acción de estos sobre la viabilidad de L. mexicana es la inhibición específica de la enzima escualeno epoxidasa, esencial en la ruta de síntesis de 5-dihidroepisterol, esterol fundamental de estos parásitos. Las diversas vías de acción de estos fármacos sobre la viabilidad de este tripanosomatideo, representa una posible alternativa en el tratamiento de este grave problema de salud pública. Introducción La leishmaniasis es un serio problema de salud pública (1,3,7,8). Los agentes causales de esta enfermedad son algunas especies patógenas pertenecientes al género Leishmania sp (4,8). Estudios previos en nuestro laboratorio, evidencian la susceptibilidad de Trypanosoma cruzi a la amiodarona; antiarrítmico tipo 3 ampliamente utilizado en el tratamiento de miocardiopatias chagásicas (2). Del mismo modo se ha demostrado que los amastigotes de esta especie de parásitos son más susceptibles a la amiodarona que los epimastigotes. En nuestro laboratorio pudimos determinar que el mecanismo de acción de la amiodarona sobre T. cruzi esta relacionado con la desestabilización de la homeóstasis de Ca +2 mitocondrial de estos parásitos (2). Estudios de síntesis orgánica permitieron determinar que esta droga genera el bloqueo específico de la enzima oxidoescualeno ciclasa, involucrada en la biosíntesis de ergosterol en estos patógenos. Teniendo en cuenta estos antecedentes nos propusimos evaluar el efecto de ambas drogas sobre Leishmania mexicana así como los mecanismos de acción asociados a las mismas y su posible relación con la homeóstasis de Ca +2 intracelular y la biosíntesis de esteroles de membrana, ambos determinantes en la sobrevivencia del parásito en los hospederos en donde se desarrolla.
    Memorias del Instituto de Biologia Experimental (UCV). Caracas. Venezuela. 01/2008; 5(1):21-24.
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    ABSTRACT: Leishmaniasis is a global public health problem without adequate treatment options, hence requiring research on new drug development. Our main objective was the evaluation of a kaurenic acid (ent-kaur-16-in-19-oico), isolated from the Venezuelan plant Wedelia trilobata (Asteracea), on Leishmania (V) braziliensis both in vivo and in vitro. The in vitro assay was performed using axenic amastigotes and promastigotes as well as infected and uninfected macrophages. Parasites and macrophages were treated with concentrations of the compound varying between 10 and 250 microg/ml. The effect of the compound on cellular viability was evaluated by counting dead and living cells in a hemocytometer and by the colorimetric method using MTT (Methylthiazoletetrazolium). For the in vivo assay, Balb/c mice were infected subcutaneously with 1 x 10(6) promastigotes of L. (V.) braziliensis and afterwards treated with a daily dose of 30 mg/kg in 100 microl of kaurenic acid administered by intraperitoneal injection for one week. The compound had a lethal effect on axenic amastigotes and promastigotes with DL50 of 0.25 and 0.78 microg/ml, respectively, in 24 hours. Low toxicity was observed for J774-G8 macrophages with a DL50 of 25 microg/ml and high viability (70-92%), while a moderate viability was observed for infected macrophages (37-81%), with concentrations of 25 microg/ml or less. Additionally, a 70% reduction was observed in the size of the skin lesions in Balb/c mice with no evident toxic effect. The results indicate that this compound has a potent leishmanicidal effect on L. (V.) braziliensis.
    Biomédica: revista del Instituto Nacional de Salud 11/2006; 26 Suppl 1:180-7. · 0.32 Impact Factor
  • Biomédica: revista del Instituto Nacional de Salud 01/2006; 26(1). · 0.32 Impact Factor