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Intein-mediated in vitro synthesis of lipidated Ras proteins

Chair of Chemical Biology, Technische Universität Dortmund, Dortmund, North Rhine-Westphalia, Germany
Chemical Communications (Impact Factor: 6.72). 02/2006; DOI: 10.1039/b511736d
Source: PubMed

ABSTRACT Fully functional lipid-modified Ras proteins suitable for the study of Ras-membrane interactions and embodying exclusively native amide bonds can be synthesized in preparative amounts by means of Expressed Protein Ligation.

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    ABSTRACT: Native chemical ligation (NCL) is a chemoselective reaction that joins synthetic or recombinant peptide and protein fragments through a native peptide bond. Advances in generating the required peptide and protein components for NCL have enabled the homogeneous incorporation of unnatural amino acids, fluorescent probes, and other modifications into protein domains and full-length proteins. The resulting semisynthetic proteins, which can be made in multi-milligram quantities, may be used in biophysical and biochemical studies to address challenging biological problems not accessible with traditional methods. This chapter provides an overview of NCL, including relevant design considerations and technological advances, and a discussion of recent applications that apply protein-based probes accessed through NCL.
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    ABSTRACT: Protein modifications are often required to study structure and function relationships. Instead of the random labeling of lysine residues, methods have been developed to (sequence) specific label proteins. Next to chemical modifications, tools to integrate new chemical groups for bioorthogonal reactions have been applied. Alternatively, proteins can also be selectively modified by enzymes. Herein we review the methods available for site-specific modification of proteins and their applications for therapeutic antibodies.
    02/2014; 9(14):e201402001. DOI:10.5936/csbj.201402001
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    ABSTRACT: Die chemische Biologie kann als das Studium biologischer Vorgänge mit chemischen Methoden definiert werden. Hierbei werden durch Analyse biologischer Phänomene und ihrer strukturellen Grundlagen ungelöste Probleme erkannt und mithilfe kombinierter Techniken aus der Chemie und der Biologie zu lösen versucht. Im Zuge solcher Studien werden neue Synthesemethoden und -strategien entwickelt und zur Herstellung von Verbindungen verwendet, die zur Erforschung biologischer Vorgänge eingesetzt werden. Mit dieser Definition als Leitmotiv fassen wir in diesem Aufsatz die neuesten Erkenntnisse auf dem Gebiet der chemischen Biologie lipidierter Ras- und Rab-Proteine zusammen. Festphasensynthesen haben sich als die bevorzugten Methoden zur Synthese lipidmodifizierter Peptide erwiesen, die über chemisch-biologische Methoden chemoselektiv an Proteine der Ras-Superfamilie ligiert werden können. Mithilfe dieser synthetischen Peptide und Proteine ist es gelungen, ungelöste Fragen auf dem Gebiet der Ras-Superfamilie der GTPasen aufzuklären, die durch chemische oder biologische Methoden alleine nicht zu erschließen waren.
    Angewandte Chemie 10/2006; 118(40):6774 - 6798. DOI:10.1002/ange.200600855