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Producción y caracterización de B-Galactosidasa de Kluyveromyces Lactis propagada en suero de leche desproteinizado

Source: OAI

ABSTRACT El objetivo de ésta investigación fue optimizar la producción de lactasa por KIuyveromyces lactis, a través de la Metodología de Superficie de Respuesta (MRS), utilizando el suero lácteo desproteinizado como medio de fermentación- Se empleó un Diseño Compuesto Central Ortogonal (DCCO) sin repetición, con cuatro factores: Temperatura, pH, Velocidad de agitación y tiempo de la fermentación, como variable respuesta la actividad enzimática (U/ml). Treinta (30) pruebas, fueron realizadas de acuerdo con el DCCO, desglosadas en veinte y cinco (25) tratamientos, con seis (6) repeticiones del punto central, en un fermentador New Brunswick BioFlo 2000 con un volumen de trabajo de 2 litros. El suero desproteinizado por termocoagulación fue analizado químicamente, por los métodos descritos en el Official Methods of Analysis (A.O..A.C.,1990), obteniéndose los siguientes resultados: Humedad 93,83%, sólidos totales 6,17%, proteína 0,44%, lactosa 4,85%, acidez 0,43% (expresada como ácido láctico) y pH 4,58. Para establecer los valores óptimos de cada factor en la producción de la enzima, se realizó el análisis estadístico, con el cual se obtuvieron las siguientes condiciones de operación: Temperatura: 30,3 ’C, pH 4,68, Velocidad de agitación: 191 r.p.m. y tiempo de fermentación: 18,5 horas, lográndose una producción de enzima de 8,3 U/ml. Se realizó la purificación parcial de la enzima con acetona, lográndose un rendimiento de 50,8% y una purificación de 7,4 veces. La enzima purificada tuvo una temperatura óptima de 60’C y un pH de 6,2. Con la realización de este trabajo se concluye que con la levadura Kluyveromyces lactis propagada en suero desproteinizado, es posible producir la enzima b-galactosidasa, y que además la MRS puede ser utilizada en la optimización de condiciones de operación en procesos microbiologicos, convirtiéndose en una herramienta útil y poderosa en el área de la biotecnología.

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