A PIBF molekula tumornövekedésben, ill. a terhesség fenntartásában szerepet játszó régióinak azonosítása = Localization of the active centers accounting for the biological activity of the PIBF molecule

Abstract

Progesteron-Indukált Blokkoló Factor (PIBF) in vivo a cytokintermelés befolyásolásán keresztül valósulnak meg. A molekula fenti hatásokért felelős regióinak azonosítása céljából a PIBF különböző részeit reprezentáló konstrukciókat állítottunk elő és vizsgáltunk ezek biológiai hatásait. A PIBF az IL-4 kiváltotta jelátvitelhez hasonlóan STAT6 valamint Jak1 foszforilációt indukál és gátolja a STAT4 foszforilálódását. STAT6 deficiens sejtekben a PIBF cytoknitermelésre kifejtett hatásai nem érvényesülnek. Megállapítottuk, hogy a PIBF-indukálta jelátvitel feltétele az IL-4R alpha lánca és a GPI-horgonyzott PIBF receptor által alkotott receptorkomplex megléte. A molekula N terminális részén található PN1 peptid a PIBF-hez hasonló jelátvitelt indukált és szignifikánsan fokozta a lymphocyták IL-10 termelését. Az NK aktivitást kizárólag a 48 kDa PIBF szakasz csökkentette szignifikáns mértékben. Egereket immunizáltunk PIBF-el, ill. A peptidekkel, majd a megfelelő ellenanyagszint kialakulása után az egereket a pároztattuk, vagy intraperitonealisan SP-2 myelomasejtekkel oltottuk őket. A terhesség kimenetelére gyakorolt hatást a beágyazódott, peték számával-, a tumornövekedésre kifejtett hatást pedig a hasüregből kinyerhető élő, ill. elpusztult tumorsejtek arányával jellemeztük. PIBF neutralizáló ellenanyagok jelenléte gátolja a pete beágyazódását. A PN1 és PN3 peptiddel történő immunizálás hatására szignifikánsan fokozódott a daganatsejtek pusztulása. | The Progesterone-Induced Blocking Factor (PIBF) exerts its in vivo effects by acting on cytokine production. In attempt to identify the biologically active regions of PIBF, five costructs (PN1, PN2, PN3, PN4 and PN5), representing different parts of of the molecule were designed for further functional testing. We have shown that PIBF signaling depends on the presence of a functional heterodimer receptor, consisting of the alpha chain of the IL-4 receptor and the GPI-anchored PIBF receptor. PIBF induces the phophorylation of STAT6 and of Jak1, while the phosphorylation of STAT4 is inhibited. The cytokine effects of PIBF are significantly reduced in STAT6 deficient cells. The N-terminal PN1 peptide induced STAT6 phosphorylation, and IL-10 production of peripheral lymphocytes was significantly increased in the presence of PN1. NK activity was not affected by either of the peptides. Mice were immunized with PIBF and the constructs. When neutralizing antibodies developed, the mice were mated, or injected i.p. with SP-2 myeloma cells. The effect of anti-PIBF or anti-peptide antibodies on pregnancy was determined by counting implantation sites, whereas that on tumor cell growth- by determining the ratio of dead and viable tumor cells recovered from the peritoneal cavity. We have shown that PIBF neutralizing antibodies interfered with implantation. Anti PN1 and PN3 neutralizing antibodies significantly increased the number of dead tumor cells.