Laboratoriums Medizin

Publications in this journal

• Article: Konsensusprotokoll zur Standardisierung von Entnahme und Biobanking des Liquor cerebrospinalis

  Charlotte E. Teunissen, Axel Petzold, Jeffrey L. Bennett, Frode S. Berven, Lou Brundin, Manuel Comabella, Diego Franciotta, Jette L. Federiksen, John O. Fleming, Roberto Furlan, [......], Konrad Rejdak, Holly K. Schmidt, Vincent van Pesch, Emmanuelle Waubant, Christian Wolf, Gavin Giovannoni, Florian Deisenhammer, Harald Hegen, Bernhard Hemmer, Hayrettin T.Tumani
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  ABSTRACT: Die Erforschung von Biomarkern in Körperflüssigkeiten bei neurodegenerativen und neuroinflammatorischen Erkrankungen blickt auf eine langjährige Geschichte zurück. Dennoch werden nur wenige Liquor cerebrospinalis (Liquor)-Biomarker in der klinischen Praxis verwendet. Einer der problematischen Faktoren in der Liquorbiomarker-Forschung ist die eingeschränkte Aussagekraft von Studien aufgrund einer nicht ausreichend großer Anzahl von Proben, die in Studien von einzelnen Zentren akquiriert werden können. Deshalb ist die Kooperation zwischen mehreren Zentren erforderlich, um große Biobanken von definierten Proben zu etablieren. Standardisierte Protokolle für Biobanking sind unumgänglich, um die durch die größere Anzahl von Liquorproben gewonnene statistische Aussagekraft sicherzustellen und nicht durch mangelhafte Präanalytik einzuschränken. Hier wird ein Konsensusbericht über Leitlinien zu Liquorentnahme und Biobanking durch das BioMS-eu Netzwerk für Liquorbiomarker-Forschung in Multipler Sklerose präsentiert. Schwerpunkte des Berichts sind Liquorentnahme, präanalytische Faktoren und klinische sowie sonstige Informationen. Biobanking-Protokolle sind für Liquor-Biobanken im Rahmen der Erforschung jeder neurologischen Krankheit anwendbar.
  Laboratoriums Medizin 02/2010; 34:1-12.
• Article: DNA‐ and Plasma‐based Screening for Risk Factors in Infants and Children with Symptomatic Thromboembolism

  Ulrike Nowak‐Göttl, Andrea Kosch, R. Junker
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  ABSTRACT: Objective : Acquired and inherited prothrombotic risk factors increase the risk of thrombosis in neonates, infants and children. The aim was to determine which risk factors should be tested with respect to inherited and acquired clinical conditions, who should be tested, and when testing should be done. Methods : The study was based on reports in the literature on the presence of acquired and inherited prothrombotic risk factors in pediatric thromboembolism. Conclusions: After suffering thrombosis, pediatric patients should be screened for common gene mutations (factor V G1691A, prothrombin G20 210A and MTHFR C677T genotypes), rare inherited prothrombotic risk factors (deficiencies of protein C, protein S, antithrombin, and plasminogen), probably inherited risk factors (fibrinogen, factor VIIIC, factor XII), and new candidates (elevation of lipoprotein (a)), and fasting homocysteine concentrations. Re-testing is indicated for plasma-based assays 3 – 6 months after thrombotic onset and withdrawal of oral anticoagulation. Data interpretation is based on age-dependent reference ranges or the identification of causative gene mutations/polymorphisms with respect to individual ethnic backgrounds.Zusammenfassung:Hintergrund: Erworbene und hereditre prothrombotische Risikofaktoren erhöhen das Thromboserisiko im Neugeborenen-, Suglings- und Kindesalter. Das Ziel der vorliegenden Übersicht war es, die Bedeutung erworbener und hereditrer Risikofaktoren, sowie den Zeitpunkt eines Screenings unter Berücksichtigung der klinischen Situation zu evaluieren. Methoden: Die Untersuchung basiert auf aktuellen Daten der Literatur zu erworbenen und angeborenen prothrombotischen Risikofaktoren bei pdiatrischen Patienten mit Thromboembolien. Schlussfolgerung: Nach Manifestation einer Thrombose sollten pdiatrische Patienten auf das Vorliegen hufiger Genmutationen (Faktor V G1691A, Prothrombin G20 210A und MTHFR C677T Genotypen) sowie seltener angeborener prothrombotischer Risikofaktoren (Protein C-, Protein S-, Antithrombin- und Plasminogenmangel), auf vermutlich genetisch bedingte Risikofaktoren (Dys-/Afibrinogenmien, Faktor-VIII-Erhöhung und Faktor-XII-Mangel) und zustzlich auf neu beschriebene Risikofaktoren (Lipoprotein(a)-Erhöhung) und Nüchtern-Homocysteinkonzentrationen untersucht werden. Risikofaktoren die mittels plasmabasierter Assays nachgewiesen werden, sollten 3 – 6 Monate nach einem thromboembolischen Ereigniss sowie nach Absetzen der oralen Antikoagulation erneut getestet werden. Screeningdaten müssen auf der Grundlage altersabhngiger Normwerte oder der Identifikation von zugrundeliegenden Genmutationen/Polymorphismen unter Berücksichtigung des ethischen Hintergrundes interpretiert werden.
  Laboratoriums Medizin 10/2008; 26(5‐6):317 - 323.
• Article: Verbesserte Methode zur Untersuchung des Einflusses von Immunmodulatoren auf die zytotoxische Aktivität natürlicher Killerzellen

  Monika‐Gabriele Penz, A. Müller, S. Hofstetter, W. P. Bieger
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Ein diagnostisch wichtiges Kriterium der unspezifischen zellulren Immunitt ist die Aktivitt natürlicher Killerzellen (NK-Zellen). Diese wird überwiegend mit der kolorimetrischen MTT-Methode bestimmt. Eine neue zeitsparende fluorimetrische Methode1, 2 verbessert signifikant die Reproduzierbarkeit und Przision aufgrund standardisierbarer E:T-Verhltnisse, detektiert ausschließlich lytische Ereignisse und erlaubt zustzlich Aussagen über den Aktivierungsstatus von NK-Zellpopulationen vor und nach Stimulation. Eine optimale Testung mit Immunmodulatoren wird durch eine sensitive, multiparametrische Analyse ermöglicht. Die fluorimetrische Methode1, 2 bietet gravierende Vorteile im Vergleich zum MTT-Test, der nur die metabolische Aktivitt an Dehydrogenase wertet.Summary: One of the most important criteria of non specific cellular immunity is the activity of natural killer cells (NK cells). This is determined using the colorimetric MTT method. A new time saving fluorimetric method1, 2 significantly improves the reproducibility and precision due to standardised E:T ratios, detects only lytic events and provides additional information about NK cell populations before and after stimulation. Optimal testing with immunmodulators (BRM) is possible through sensitive, multiparameter analysis. The fluorimetric assay1, 2 offers important benefits in comparison to the MTT test, which determines only metabolic activity of the dehydrogenase.
  Laboratoriums Medizin 10/2008; 26(5‐6):347 - 353.
• Article: Arzneimittel‐Interferenzen in der Labormedizin

  O. Sonntag
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Arzneimittel-Interferenzen und Effekte durch Arzneimittel spielen in der Labormedizin und bei der Interpretation von Laborbefunden eine bedeutende Rolle. Eine CD-Version, die die Interpretation und das Aufspüren von möglichen, durch Arzneimittel verursachten Effekten oder Interferenzen bei unerwarteten Labordaten erleichtert, wird vorgestellt.Summary: Drug interferences and drug effects have an enormous impact both in laboratory medicine and in the interpretation of laboratory data. A CD-version of a database which will help to find reasons for unexpected lab results will be presented.
  Laboratoriums Medizin 10/2008; 26(5‐6):307 - 308.
• Article: Verwendung von Zitrat/Theophyllin/Adenosin/Dipyridamol (CTAD)‐Blut in Hämostaseologie und Hämatologie

  G. Töpfer, B. Zawta, F. Hornig, K. Sauer, Gisela Friedel
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  ABSTRACT: Zusammenfassung:Untersuchungsziel : Überprüfung von CTAD-Blut anstelle von Zitratblut, -plasma für Gerinnungsuntersuchungen und anstelle von EDTA-Blut für hämatologische Untersuchungen. Ergebnisse : Bei der plasmatischen Gerinnung bestehen zwischen Zitratplasma- und CTAD-Plasma-Ergebnissen ohne Heparin keine wesentlichen Differenzen. Heparinempfindliche Methoden wie Thrombinzeit und aPTT zeigen bei Heparineinfluss längere Gerinnungszeiten im CTAD-Plasma. Die Ergebnisse bei diesen Messgrößen sind nur im CTAD-Plasma stabil (etwa 4 h), während aPTT und Thrombinzeit in heparinhaltigen Plasmen schon innerhalb von 1 – 2 h Lagerzeit verkürzt werden. Die Thrombozytenaggregation mit Ristocetin verläuft im Zitrat- und CTAD-plättchenreichen Plasma etwa gleich. ADP und Kollagen lösen jedoch im CTAD-Blut keine Aggregation aus. Die Anfärbbarkeit der Blutzellen im EDTA- und CTAD-Blut unterscheidet sich nicht. Die Ergebnisse des manuellen Differenzialblutbildes sind in beiden Fällen für 3 h im Vollblut stabil. Im Differenzialblutbild am CD 3500 (Abbott) sind besonders die neutrophilen Granulozyten im CTAD-Blut stabiler. Im CTAD-Blut liegt ein kleinerer Wert für das mittlere Plättchenvolumen (MPV) vor. Die in EDTA-Blut stattfindende Vergrößerung des MPV bei Lagerung findet in CTAD-Blut selbst nach 24 h Lagerung nicht statt. Schlussfolgerungen : CTAD-Blut kommt als generelles Untersuchungsmaterial sowohl für die plasmatische Gerinnung als auch für die Hämatologie in Frage. CTAD-Blut weist bei heparinempfindlichen Methoden den Vorteil der geringeren Beeinflussung durch den Plättchenfaktor 4 auf. Für die Plättchenaggregation mit ADP und Kollagen als Induktor ist CTAD-plättchenreiches Plasma nicht geeignet, da eine vollständige Aggregationshemmung vorliegt. CTAD-Blut ist für die Erstel-lung der Blutbilder am CD 3500 lagerungsstabiler als EDTA-Blut.Summary:Objective : Comparison of plasma from CTAD blood instead of citrate blood for coagulation analyses and the use of CTAD-blood instead of EDTA blood for haematological examinations. Results : There are no differences of coagulation tests between citrate plasma and CTAD plasma without heparin therapy. Heparin sensitive methods such as thrombin time and aPTT show longer coagulation times by heparin influence in CTAD plasma. These parametrical results are only stable in CTAD plasma (approx. 4 h), while citrate plasma containing heparin shortens the coagulation time of aPTT and thrombin time even after 1 to 2 h storage. Platelet aggregation with ristocetin develops approximately the same effect in both citrate and CTAD platelet rich plasma. ADP- and collagen induced aggregation is inhibited by CTAD blood. The staining of blood cells in EDTA blood and CTAD blood shows no difference. The results in the manual differential blood count are stable for 3 h in both cases. The neutrophils in the differential blood count with the CD 3500 system (Abbott) are especially stable in CTAD blood. Mean platelet volume (MPV) is smaller in CTAD blood. The enlargements of the MPV in EDTA blood during storage, does not take place in CTAD stored blood even after 24 h. Conclusion : We conclude that CTAD blood is the sample of choice for both clotting- and haematological analysis. CTAD blood has the advantage of less influence through platelet factor 4 in heparin sensitive methods. For the platelet aggregation with ADP and collagen as an inductor, CTAD platelet rich plasma is unsuitable due to a total aggregation inhibition. CTAD blood is more stable than EDTA blood during storage for the automated blood count with the CD 3500 analyzer.
  Laboratoriums Medizin 10/2008; 26(5‐6):296 - 306.
• Article: Identifizierung der Probe: Überlegungen zu neuenEntwicklungen

  A. Grünert
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Aufgrund der intensiven Beschftigung mit pranalytischen Auswirkungen von Störgrößen und Einflußgrößen auf die Eigenschaften und die Qualitt von Probenmaterial hat der Bereich der Probenqualitt und damit auch die Qualitt der gesamten Laboratoriumsdiagnostik enorme Beachtung gefunden. Es ist ein zentrales Anliegen jeder analytisch-chemischen Untersuchung nicht nur reprsentative aliquote Proben aus zu untersuchenden Materialien zu gewinnen, sondern die Zusammensetzung und qualitativen und quantitativen Eigenschaften der Probe auf dem Weg von der Probennahme zum eigentlichen analytisch-chemischen Prozess sorgfltigst zu kontrollieren, um das Ergebnis in Bezug auf die ursprünglichen Zustnde im Gesamtmaterial abzusichern. Das breite Feld der pranalytischen Variablen und deren Einfluß auf die Eigenschaft und Qualitt von Untersuchungsergebnissen hat zu einem hohen Leistungsstandard geführt, der in der Behandlung und auf dem Weg des Probenmaterials in der Laboratoriumsdiagnostik Unsicherheiten minimiert. Das komplexe Feld der pranalytischen Variablen zeigt eine große Breite, die sich von Einflußgrößen und Störgrößen auf das Probenmaterial selbst bis hin zu Identifizierungsproblemen dann hochsteigern, wenn die Proben im Verlauf des analytisch-chemischen Prozesses über Aliquotierung und Aufteilung auf verschiedene Arbeitsprozesse eine wachsende Identifizierungsproblematik aufweisen. In der vorliegenden Übersicht wird über eine Entwicklung informiert, die über den eigentlichen Ablauf der Arbeit im Laboratorium hinausgeht und sich auch auf die Probennahme beim Patienten bezieht, wo bis heute weltweit noch die größte Unsicherheit mit unbekannter Dunkelziffer darin besteht, daß eine Kontrolle der Identitt zwischen Patient und Probe nur über Analogverfahren mit großer Unsicherheit behaftet stattfindet. In der vorliegenden Skizze wird eine Entwicklung beschrieben, die es heute ermöglicht, ein altbekanntes Problem mit einer elektronischen Datenkopie zu lösen, die zu einer durch den elektronischen Kopierprozess bedingten Eindeutigkeit in der Identitt führt.Summary: Clinical chemistry tests must be preceeded not only by the preparation of representative sample aliquots but also by a careful controlling of processes which affect the quality of samples on their way from the patient to the analytical process. The extensive knowledge of preanalytical variables which affect the the properties and quality of test results led to the establishment of standard protocols which minimize failures and uncertainties in this process. Preanalytical problems involve interferences and disturbances as well as mistakes in sample identification. One of the biggest issues is still the uncertainty of the identity of sample material since only analog procedures are known. We here discuss novel developments which are aimed at controlling sample acquisition by electronic copy processes.
  Laboratoriums Medizin 10/2008; 26(5‐6):291 - 295.
• Article: Preanalytical Prerequisites for the Quality of Samples

  H. Wisser, Th. Bertsch, D. Wisser
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  ABSTRACT: The different phases of laboratory testing vary regarding time, costs, and error frequency. All these three criteria are significantly higher for the preanalytical in comparison to the analytical and postanalytical phases. Different factors, effective in the preanalytical period, can cause changes in test results. One differentiates between in vivo influence factors and in vitro interference factors. Some of these interference factors are discussed exemplarily. Other important preanalytical factors not included in the proposed system of interference quantities are demonstrated, i. e. the correct test selection, the appropriate sample volume, the correct sample identification, and an appropriate turnaround time.Zusammenfassung: Die verschiedenen Phasen der Laborbefunderstellung unterscheiden sich in Bezug auf den Zeitaufwand, die Kosten und die Fehlerhäufigkeit. Alle drei Kriterien liegen für die präanalytische Phase im Vergleich zur analytischen und postanalytischen Phase deutlich höher. Verschiedene Faktoren führen in der präanalytischen Phase zu einer Streuung der Meßergebnisse. Man unterscheidet Einflußgrößen (in vivo Störungen) und Störgrößen (in vitro Störungen), die beispielhaft besprochen werden. Daneben werden weitere Punkte wie die der Fragestellung angemessene Testauswahl und das entsprechende Probevolumen, eine eindeutige Probenidentifikation und das Zeitverhalten, die „turnaround time” besprochen.
  Laboratoriums Medizin 10/2008; 26(5‐6):284 - 290.
• Article: High Sensitive CRP and Creatinine: Reference Intervals from Infancy to Childhood

  H. Schlebusch, N. Liappis, E. Kalina, C. Klein
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  ABSTRACT: A total of 521 serum samples was selected from cord blood, term and preterm neonates, infants and children up to the age of 15 years to establish reference intervals for high sensitive C-reactive protein and creatinine, as measured by an improved enzymatic as well as by a modified Jaffé method. Except for neonates, reference intervals for CRP are gender- and age-independent. An upper limit (95 % percentile) of 2.8 mg/L is recommended. In contrast, creatinine concentrations showed a pronounced age dependency with lowest values between 2 months and 3 years followed by a continuous increase during childhood. Due to improved specificity of the creatinine methods used, reference intervals are significantly lower than data published so far.Zusammenfassung: 521 Serumproben wurden von Nabelschnurblut, Früh- und Neugeborenen, Säuglingen und Kindern bis 15 Jahren gesammelt, um Referenzbereiche für hoch-sensitives CRP und Kreatinin zu etablieren. Kreatinin wurde dabei mit einem verbesserten enzymatischen Test und nach einer modifizierten Jaffé-Methode gemessen. Außer für Neugeborene sind die Referenz-Intervalle für CRP geschlechts- und altersunabhängig. Ein oberer Grenzwert (95 % Perzentile) von 2,8 mg/L wird empfohlen. Im Gegensatz dazu zeigten die Kreatinin-Konzentrationen eine deutliche Altersabhängigkeit mit den niedrigsten Werten für Kinder im Alter von 2 Monaten bis 3 Jahren und einem kontinuierlichen Anstieg danach. Wegen der besseren Spezifität der eingesetzten Kreatinin-Methoden sind die Referenzintervalle signifikant niedriger als bislang publiziert.
  Laboratoriums Medizin 10/2008; 26(5‐6):341 - 346.
• Article: Internet‐Seite der gemeinsamen Arbeitsgruppe „Autoimmundiagnostik” der Deutschen Gesellschaft für Klinische Chemie und der Deutschen Gesellschaft für Laboratoriumsmedizin

  M.D. Kramer
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  ABSTRACT: Zusammenfassung:In der vorliegenden Mitteilung wird eine Internet-Seite zum Thema „Autoimmundiagnostik” vorgestellt; ein Projekt der interdisziplinären Arbeitsgruppe „Autoimmundiagnostik” der Deutschen Gesellschaft für Laboratoriumsmedizin (DGLM) und der Deutschen Gesellschaft für Klinische Chemie (DGKC). Dabei werden das zugrunde liegende Konzept, der Stand der Arbeiten und die nächsten Ziele vorgestellt.
  Laboratoriums Medizin 06/2008; 26(5‐6):354 - 355.
• Article: Präanalytische Variable und ihr Einfluß auf die Qualität von Laboratoriumsbefunden

  S. Narayanan, W. G. Guder
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  ABSTRACT: Zusammenfassung:Whrend analytische Qualittsstandards durch die Richtlinien der Bundesrztekammer wohl definiert sind, fehlen weitgehend solche Standards für die pranalytische Phase. In den letzten Jahren sind mehrere Empfehlungen zur Definition der Qualitt von Untersuchungsmaterialien erschienen. Diese befassen sich mit Antikoagulantien und Probengefßen, der Wahl des optimalen Probenvolumens, den Stabilittskriterien whrend Transport und Lagerung von Untersuchungsmaterial sowie dem Umgang mit hmolytischen, lipmischen und ikterischen Proben. Technische Empfehlungen bezüglich der Probennahme, der Probenidentifikation und der pranalytischen Behandlung im Labor sind schon vor lngerer Zeit in internationalen Gremien und Konsensusorganisationen definiert worden, unterliegen jedoch aufgrund technischer Weiterentwicklungen raschen Vernderungen. Die Entwicklung eines pranalytischen Qualittsmanuals wird daher als essentieller Bestandteil zur Erreichung der Ziele des auch die extraanalytischen Phasen umfassenden Qualittsmanagements gesehen. Anhand klinischer Beispiele wird die Bedeutung pranalytischer Fehler im Laboralltag bewußt gemacht. Die Erkennung möglicher Fehler wird als kritische Voraussetzung für die Vermeidung pranalytischer Variabler angesehen.
  Laboratoriums Medizin 06/2008; 26(5‐6):263 - 266.
• Article: Neue Peptid‐ und Proteinmarker zur Diagnose der myokardialen Ischämie und der ischämischen Myokardschädigung

  Angelika Hammerer-Lercher, J. Mair, B. Puschendorf
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Die Frühdiagnose einer Myokardischämie wird immer noch anhand des Elektrokardiogramms gestellt, da die konventionellen kardialen Marker in den ersten 4 Stunden nach Symptombeginn nicht sensitiv genug sind. Außerdem sind nur die kardialen Troponine herzspezifisch, die deshalb von den kardiologischen Gesellschaften als der neue „Goldene Standard” zur Labordiagnose von Myokardschädigung vorgeschlagen wurden. Kardiale Troponine sind jedoch erst 10 – 12 Stunden nach Symptombeginn verlässliche Ausschlussparameter einer Myokardnekrose. Frühe, sensitive und spezifische Laborparameter, die innerhalb von 4 Stunden ansteigen und Patienten mit Angina pectoris-Symptomatik korrekt identifizieren, wären hilfreich, um rechtzeitig durch geeignete therapeutische Maßnahmen größere Nekrosen zu verhindern. Ein neuer Ischämiemarker, Ischämie-modifiziertes Albumin (IMA), scheint dabei vielversprechend zu sein. Durch Ischämie wird das N-terminale Ende von Albumin innerhalb von kurzer Zeit so modifiziert, dass das Übergangsmetall Kobalt nicht mehr binden kann. IMA erreicht bei akuten Koronarsyndrom-Patienten nach 3 – 4 Stunden eine hohe Sensitivität von über 0,80. Ein weiterer aussichtsreicher Kandidat mit ähnlicher Sensitivität (0,77) wie IMA ist die Glykogenphosphorylase BB (GPBB), die durch Ischämie aus ihrem unlöslichen Komplex gelöst wird. Allerdings muss die Membranpermeabilität erhöht sein, damit die GPBB in die Blutzirkulation gelangen kann, sodass die GPBB keinen reinen Ischämiemarker darstellt. B-Typ natriuretisches Peptid (BNP) ist ebenfalls ein Parameter, der früh nach akutem Myokardinfarkt signifikant ansteigt. Die Abgrenzung zwischen kardialer Ischämie und Ventrikeldysfunktion ist bei diesem Marker jedoch schwierig, da die kardiale Ischämie häufig eine ventrikuläre Dysfunktion verursacht und BNP je nach Schweregrad einer Herzinsuffizienz aus dem Myokard ausgeschüttet wird. IMA, GPBB und BNP sind drei vielversprechende Marker, die zu einer frühzeitigen und kosteneffizienten Diagnosefindung bei Patienten mit kardialen ischämischen Geschehen beitragen können.Summary: The early diagnosis of myocardial ischaemia is still performed by the electrocardiogram, because the conventional cardiac markers are not sensitive enough during the first 4 h after symptom onset. Only cardiac troponins are heart specific and were therefore proposed by the cardiological societies as new criterion standards for the laboratory diagnosis of myocardial necrosis. However, cardiac troponins can reliably exclude myocardial necrosis only 10  –  12 h after symptom onset. Early, sensitive and specific laboratory parameters that increase rapidly during the first 4 h would be helpful for initiating therapeutic interventions in time to prevent more extended myocardial necrosis. A new parameter for ischaemia, ischaemia-modified albumin (IMA), seems to be promising. Ischaemia causes a very rapid modification of the N-terminus of albumin. As a consequence, the transition metal cobalt is no longer able to bind. In acute coronary syndrome patients, IMA reaches a sensitivity of 0.80 within 3  –  4 h. A further candidate with similar sensitivity (0,77) to IMA is glycogen phosphorylase BB (GPBB), which is detached from its insoluble complex by ischaemia. However, GPBB can only reach the blood circulation when the cell membrane permeability is increased; therefore, GPBB is not a pure marker of ischaemia. B-type natriuretic peptide (BNP) is another parameter that increases very early after acute myocardial infarction. The differentiation between cardiac ischaemia and left ventricular dysfunction is difficult, because cardiac ischaemia causes ventricular dysfunction and BNP is released from the myocardium in relation to the severity of heart failure. IMA, GPBB and BNP are three promising markers that can help to identify patients with cardiac ischaemia very early and cost efficiently.
  Laboratoriums Medizin 12/2003; 27(11‐12):412 - 422.
• Article: Aspekte der Pathogenese, Therapie und Diagnostik der Leberfibrose

  A. M. Gressner, E. Yagmur
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Parenchymzellschädigungen unterschiedlicher Ätiologien und konsekutive Entzündungsreaktionen initiieren eine reaktive Bindegewebsneusynthese (Fibrogenese), die bei chronischen Lebererkrankungen zur Fibrose führt. Sie ist durch eine 3- bis 10fache Konzentrationszunahme der Komponenten der extrazellulären Matrix, durch deren histologische Umverteilung (perisinusoidale Fibrose) sowie durch Veränderungen der strukturellen Mikroheterogenität und des Matrixprofils gekennzeichnet. An der exzessiven Neusynthese der extrazellulären Matrix sind überwiegend leberspezifische Perizyten, die hepatischen Sternzellen (auch Ito-Zellen genannt), im subendothelialen Disse-Raum, beteiligt, die durch zelluläre Interaktionen, besonders mit Kupffer-Zellen, Thrombozyten und Hepatozyten aktiviert werden und zu Myofibroblasten transdifferenzieren. Myofibroblasten synthetisieren nicht nur ein breites Spektrum von Kollagenen und anderen Matrixproteinen, sondern auch ein umfangreiches Repertoire an inflammatorischen und anti-inflammatorischen Zytokinen, Chemokinen und Wachstumsfaktoren. Unter diesen nimmt TGF-β als profibrogenes Masterzytokin eine dominierende Rolle ein, da es nicht nur die Transdifferenzierung von hepatischen Sternzellen zu Myofibroblasten, sondern auch die Matrixsynthese stimuliert, den Abbau der Matrix vermindert und Apoptose der Hepatozyten bewirkt. Erfolgreiche experimentelle Therapiestrategien sind deshalb auf eine Inaktivierung des TGF-β gerichtet, entweder durch adenoviral vermittelte Überexpression von löslichen TGF-β Rezeptoren als scavenger, intrazelluläre Überexpression von die Signaltransduktion inhibierenden Molekülen (Smad7) oder durch Hemmung der Neusynthese von TGF-β mittels Antisense-Strategien. Zur Diagnostik und Verlaufskontrolle der Fibrogenese werden systemische Kenngrößen wie spezifische Prokollagenfragmente, Hyaluronan, Matrix-Metalloproteinasen (MMPs) und deren Inhibitoren (TIMPs) sowie Kombinationen konventioneller klinisch-chemischer Parameter in Form des „Fibrotestes” bzw. „Actitestes” eingesetzt. Die biochemischen Parameter sind jedoch noch nicht valide genug, um die invasive Methode der histologischen Beurteilung von Leberbiopsien ersetzen zu können. Es ist zu erwarten, dass in den nächsten Jahren effektive antifibrotische Therapiestrategien nicht nur für die Leberfibrose, sondern auch für zahlreiche andere Organfibrosen in die Humanmedizin eingeführt werden.Summary: Parenchymal cell injury of various aetiologies and consecutive inflammatory reaction initiate de novo synthesis of connective tissue elements (fibrogenesis), which leads to fibrosis in chronic liver diseases. Fibrosis is characterized by a 3- to 10-fold increase of the components of the extracellular matrix, by histological redistribution (perisinusoidal fibrosis) and by changes in the structural microheterogeneity and in the matrix profile. The excessive synthesis of extracellular matrix is mainly managed by liver-specific pericytes, i. e. hepatic stellate cells (Ito cells), which are located in the subendothelial space of Disse and are activated by cellular interactions, in particular with Kupffer cells, platelets and hepatocytes. This leads to their transdifferentiation into myofibroblasts, which synthesize not only a broad array of collagens and other matrix proteins, but also a great spectrum of inflammatory and anti-inflammatory cytokines, chemokines, and growth factors. Among them TGF-β acts as a profibrogenic master cytokine because it stimulates not only the transdifferentiation of hepatic stellate cells into myofibroblasts, but also their matrix synthesis, inhibits matrix degradation and induces apoptosis of hepatocytes. Successful experimental therapeutic strategies are focused on inactivation of TGF-β either by adenoviral-mediated overexpression of soluble TGF-β receptors as scavengers, by intracellular overexpression of mediators inhibiting signal transduction, or by inhibition of the synthesis of TGF-β by use of antisense strategies. For diagnosis and monitoring of fibrogenesis, various systemic parameters are suggested such as specific fragments of procollagens, hyaluronan, matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs) but also combinations of more conventional clinical-chemical parameters known as ‘fibrotest’ and ‘actitest’, respectively. The validity of biochemical parameters, however, is not yet sufficient to replace the invasive method of histological examination of liver biopsy specimens. We expect in the coming years the introduction of effective antifibrotic therapeutic strategies, which cure liver fibrosis and other fibrotic organ diseases.
  Laboratoriums Medizin 12/2003; 27(11‐12):423 - 430.
• Article: Sepsis und Sepsismarker – Update

  H. G. Wahl, I. Herzum, H. Renz
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Im Rahmen der Diagnostik akuter inflammatorischer Prozesse bewegt sich die Laboratoriumsmedizin in dem immunologischen Spannungsfeld zwischen Hyper-Inflammation und Immunparalyse. Die zentralen Aufgaben einer modernen immunologischen Diagnostik sind die frühe Erkennung und möglichst auch die Vorhersage sowohl überschießender als auch unterdrückter Immunantwort. Gerade im Rahmen der Sepsis ist das Scheitern neuer Therapieanstze oft eng mit den Defiziten einer nicht adquaten laborchemischen Diagnostik verknüpft. Eine allgemein akzeptierte Definition von Sepsis sowie deren Marker und Mediatoren mit der Möglichkeit einer validen Stadieneinteilung sind Grundvoraussetzungen für eine spezifische und überprüfbare Sepsistherapie.Summary: The laboratory diagnosis of acute inflammatory processes reflects the immunological balance between hyperinflammation and immunoparalysis. Major tasks of modern immunological diagnostics are the early detection and prediction of exaggerated or, on the other side, suppressed systemic immunological response. Failure of newer therapy concepts for sepsis may be due to inadequate laboratory diagnostics. Basic requirements for mediator-directed therapies are more rigorous approaches to disease description and stratification. The success of future clinical trials strongly depends on a widely accepted definition of sepsis, its mediators and markers that can be used for a solid staging.
  Laboratoriums Medizin 12/2003; 27(11‐12):431 - 439.
• Article: Laboratory Diagnostics of HLA Antibodies

  Brigitte Flesch
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  ABSTRACT: Antibodies directed against human leukocyte antigens (HLA) are involved in graft failure, as well as in platelet refractoriness. Therefore, HLA antibody screening prior to renal transplantation is mandatory. Since the introduction of the complement-dependent cytotoxic test in the 1960s, this assay has become the gold standard of HLA serology. It is based on complement fixation and cell lysis provoked by cytotoxic HLA class I antibodies. Non-cytotoxic antibodies will not be detected. In the meantime, additional methods based on different analytical approaches have been developed. Today, particularly enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) are commercially available for HLA antibody screening and specificity determination. HLA class I- and/or class II-specific antibodies can be detected. Flow cytometry had been introduced early as a method for HLA antibody detection, but was not widely applied as a routine method for a long time. Similarly, this applies to the immune phagocytosis inhibition test, which is successfully performed in only a handful of laboratories. The different assays are based on distinct mechanisms and therefore only partly detect the same antibodies. All, except for the complement-dependent cytotoxic test, detect both cytotoxic and non-cytotoxic antibodies. Selective detection of antibodies of the IgG class or restricted detection of HLA class I antibodies are further limiting parameters of some of the methods. In this review, a survey of the methods for the detection of HLA antibodies is provided, and the advantages and disadvantages of each method are discussed.Zusammenfassung: Antikörper gegen Humane Leukozyten Antigene (HLA) sind sowohl an der Transplantatabstoßung wie auch an Refraktärzuständen nach Thrombozytentransfusionen beteiligt. Aus diesem Grund ist ein HLA-Antikörper-Screening vor einer Nierentransplantation unerlässlich. Seit der Einführung des Komplement-abhängigen zytotoxischen Testes in den Sechziger Jahren hat sich dieser Test zum Goldstandard der HLA-Serologie entwickelt. Er basiert auf der HLA-Antikörper-induzierten Komplement-Fixierung mit anschließender Zytolyse. Nicht-zytotoxische Antikörper werden auf diese Weise nicht erfasst. In der Zwischenzeit wurden zusätzliche Tests entwickelt, die auf unterschiedlichen methodischen Ansätzen beruhen. Insbesondere Enzymimmunoassays (ELISA) für das HLA-Antikörper-Screening und zur Spezifitätsbestimmung sind mittlerweile kommerziell erhältlich. Sowohl HLA-Klasse I-, wie auch HLA-Klasse II-spezifische Antikörper können mit solchen Testen nachgewiesen werden. Die Durchflusszytometrie wurde bereits früh als Methode zum Nachweis von HLA-Antikörpern beschrieben, allerdings blieb ihr der Einzug als Routinemethode lange versperrt. Dies gilt auch für Immunphagozytose-Inhibitions-Teste, die erfolgreich in wenigen Laboren angewendet werden. Da die verschiedenen Teste auf unterschiedlichen Mechanismen beruhen, weisen sie auch nur zum Teil dieselben Antikörper nach. Mit Ausnahme des Komplement-abhängigen zytotoxischen Testes weisen alle anderen Teste sowohl zytotoxische, wie auch nicht-zytotoxische Antikörper nach. Weitere Einschränkungen einzelner Teste beziehen sich auf den selektiven Nachweis von Antikörpern der IgG-Klasse oder den ausschließlichen Nachweis von HLA-Klasse I-spezifischen Antikörpern. Im Folgenden soll eine Übersicht über die verschiedenen Methoden zum serologischen Nachweis von HLA-Antikörpern gegeben werden und die Vor- und Nachteile der einzelnen Testverfahren diskutiert werden.
  Laboratoriums Medizin 11/2003; 27(9‐10):351 - 358.
• Article: Liquordiagnostik‐Ausbildung und Fachqualifikation: Richtlinien der Deutschen Gesellschaft für Liquordiagnostikund Klinische Neurochemie (DGLN)

  H. Reiber, M. Uhr
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Wir berichten über die neuen Richtlinien der Deutschen Gesellschaft für Liquordiagnostik und klinische Neurochemie (DGLN) zur Erlangung der Fachqualifikation Liquordiagnostik (Liquorzertifikat), der Ausbildungsberechtigung und zur Spezifikation von Ausbildungslabors. Empfehlungen der DGLN zur internen und externen Qualitätskontrolle (Ringversuch) werden angesprochen und eine Erweiterung der Richtlinien der Bundesärztekammer bezüglich der Einführung von Liquor/Serum-Konzentrationsquotienten vorgeschlagen. Die Strukturbedingungen eines Routinelabors für Liquordiagnostik, wie qualifizierte Zytologie, integrierter Befundbericht und adäquate Asservierung der Liquor/Serum-Proben wird diskutiert.Summary: The German Society for CSF Diagnosis and Clinical Neurochemistry (DGLN) has developed guidelines for the education and qualified performance of CSF analysis. The guidelines specify the conditions for obtaining a personal certificate or a certificate for a qualified training laboratory. This article refers also to the recommendations of the DGLN regarding internal and external quality control (CSF survey) and a proposal for the extension of the current guidelines of the ‘Bundesärztekammer’ to include CSF/serum concentration quotients. The structural conditions of a routine laboratory for CSF analysis are discussed regarding qualified cytology, integrated CSF data report and careful asservation of the CSF samples.
  Laboratoriums Medizin 11/2003; 27(9‐10):322 - 328.
• Article: Empfindlichkeitsprüfung von Candida Species unterAnwendung des kommerziellen Agardiffusionsverfahrens mit LD 2‐Ringen für die Routinediagnostik

  Sabine Dankmeier, Bilal Al-Nawas, P.M. Shah
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Die steigende Zahl von Pilzinfektionen, die Entwicklung und Einführung neuer antimykotischer Substanzen sowie die Möglichkeit der Resistenzentwicklung unter Therapie mit Antimykotika haben in der Vergangenheit zu einem ständig wachsenden Bedarf an standardisierten Verfahren zur Empfindlichkeitstestung von pathogenen Pilzen geführt. Hierbei entstand unter anderem eine Vielzahl kommerzieller Testverfahren, bei denen mit Hilfe vorgefertigter Testkits eine einfache und schnelle Durchführung der Empfindlichkeitsprüfung erzielt werden soll. Eine dieser Methoden, welche in manchen Laboratorien in Deutschland angewendet wird, ist das so genannte LD 2 Ring-Verfahren, welches auf dem Prinzip der Agardiffusion beruht unter Verwendung vorgefertigter, antimykotika-beschichteter Papierringe. In der vorliegenden Arbeit wird dieses Verfahren auf seine Reproduzierbarkeit bei der Testung von zehn Qualitätskontrollstämmen hin überprüft. Die Ergebnisse zeigen eine starke Schwankungsbreite und somit eine schlechte Reproduzierbarkeit, so dass dieses Verfahren zwar für die Bearbeitung von wissenschaftlichen Fragestellungen, nicht jedoch für die Routinetestung als geeignet angesehen werden kann. Des Weiteren erfolgte eine Untersuchung auf das Vorliegen eines so genannten „minor error”, man erhält für einen sensiblen Stamm das Ergebnis „resistent”, „major error”, man erhält für einen intermediären Stamm das Ergebnis „sensibel”, und „very major error”, man erhält für einen resistenten Stamm das Ergebnis „sensibel”. Hierbei kam es in 16,25 % der untersuchten Fälle zum Vorliegen eines „minor errors”. Ein „major error” wurde nicht beobachtet.Summary: The increasing number of fungal infections, development and introduction of new antifungal agents as well as the possibility of development of resistance under therapy with antifungal agents led to a constantly increasing demand for standardized methods for susceptibility testing of pathogenic yeasts in the past. A large number of commercial tests was developed, aimed at fast and easy handling of susceptibility testing with the help of prepared test kits. One of these methods used in some routine laboratories in Germany is the so-called LD 2 rings-method, which is based on the principle of agar diffusion using prepared paper rings coated with the antifungal agent. In the following study, this method is investigated as to its reproducibility by testing ten quality-control strains. The results show great variations and consequently a bad reproducibility, so that although this method can be used for investigating scientific questions, it cannot be considered suitable for routine susceptibility testing. Additionally, the “minor error” (the test result for a sensitive strain is “resistant”), “major error” (the test result for an intermidiate strain is “sensitive”), and “very major error” (the test result for a resistant strain is “sensitive”) was analysed. Here for, 16,25 % of the investigated cases showed the existence of a “minor error”. No “major error” was observed.
  Laboratoriums Medizin 11/2003; 27(9‐10):401 - 407.
• Article: Neutralisierende Antikörper gegen Interferon‐betain der Therapie der Multiplen Sklerose

  Claudia Gneiss, F. Deisenhammer
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Rekombinantes Interferon-beta (IFN-β) ist als Therapie der ersten Wahl bei schubförmig verlaufender Multipler Sklerose (MS) etabliert. Drei verschiedene IFN-β-Prparate, davon zwei IFN-β-1a-Produkte (Avonex® und Rebif®) und ein IFN-β-1b-Produkt (Betaferon®), sind für diese Indikation zugelassen. Ein großer Nachteil dieser Therapie ist das mögliche Auftreten neutralisierender Antikörper (NAB) gegen IFN-β in bis zu einem Drittel der Patienten. NAB reduzieren die biologische Aktivitt von IFN-β, indem sie die Bindung von IFN-β am Rezeptor blockieren. Zahlreiche Studien belegen, dass die Anwesenheit von NAB zu einer Reduktion der klinischen Wirksamkeit von IFN-β führt. Whrend sich NAB meist zwischen dem sechsten und achtzehnten Monat nach Therapiebeginn mit IFN-β entwickeln, zeigt sich die negative Auswirkung auf den klinischen Effekt erst ab dem zweiten bis dritten Behandlungsjahr. Trotz Fortführung der IFN-β-Therapie zeigen NAB die Tendenz, sich nach Jahren wieder zurückzubilden und unterliegen somit einer natürlichen Dynamik. Es gibt Hinweise, dass dieser natürliche Rückbildungsprozess durch verschiedene Maßnahmen beschleunigt werden kann. Es gilt daher durch frühzeitiges und regelmßiges NAB-Screening Patienten zu identifizieren, welche in zu planende klinische Studien eingeschlossen werden sollten, um effektive Strategien für NAB-positive Patienten entwickeln zu können. Darüber hinaus müssen die derzeit noch zu unterschiedlichen NAB-Testverfahren vereinheitlicht werden.Summary: Interferon-beta (IFN-β) is established as first-line therapy in patients with relapsing multiple sclerosis. Three different IFN-β preparations, two IFN-β-1a (Avonex® and Rebif®) products and one IFN-β-1b (Betaferon®) product, have been licensed for this indication. One disadvantage related to this treatment is the potential occurrence of neutralizing antibodies (NABs) against IFN-β in up to one-third of patients. NABs reduce the biological activity of IFN-β by blocking the receptor binding of IFN-β. Several studies have demonstrated that NABs also reduce clinical efficacy. While most patients develop NABs between 6 and 18 months of therapy, the negative influence on the clinical effects is delayed and does not occur before the second or third year of IFN-β therapy. NAB-positive patients show the tendency to revert to NAB-negative status even though treatment is continued, and therefore NABs underlie a dynamic process. There is evidence that the reversion to NAB-negative status may be accelerated by different factors. We advocate an early and continuous NAB screening to identify NAB-positive patients in order to plan clinical studies and develop effective strategies for these patients. Currently, NAB detection methods are too diverse and therefore need to be standardized.
  Laboratoriums Medizin 11/2003; 27(9‐10):339 - 346.
• Article: Aktueller Stand des Nachweises von Toxoplasma gondii‐DNA mittels qualitativer und quantitativer PCR

  U. Reischl, H. Wolf, Dominique Krüger
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Durch die Entwicklung und den zunehmenden Einsatz moderner real-time Detektionsverfahren konnte die Zuverlässigkeit, die Genauigkeit sowie die Empfindlichkeit der Toxoplasma-Diagnostik deutlich gesteigert werden. Mit der Auswahl geeigneter Primer und Sondensequenzen gelingt hier unter optimierten Reaktionsbedingungen bereits der spezifische Nachweis von weniger als einem Genomäquivalent von T. gondii pro PCR-Reaktion. In Verbindung mit der sehr hohen Spezifität moderner real-time PCR-Verfahren kann diese extreme analytische Sensitivität in vielen Fällen (z. B. bei der Fruchtwasseruntersuchung bei Verdacht auf konnatale Toxoplasmose oder zur Detektion des Erregers im Blut von immundefizienten Patienten) einen, wenn nicht sogar den entscheidenden zeitlichen Vorsprung bei der therapeutischen Intervention darstellen. Im Gegensatz zu den qualitativen Testsystemen, die in der Regel auf maximale Empfindlichkeit abgestimmt sind, muß die eigentliche Wertigkeit von quantitativen Ergebnissen aber noch im Rahmen zukünftiger Studien evaluiert werden. Hier ist vor allem die Frage zu klären, ob und bei welchen klinischen Manifestationen der Toxoplasmose eine Korrelation mit der ermittelten Erregermenge im Untersuchungsmaterial besteht. Trotz der Verfügbarkeit von quantitativen Ergebnissen wird es aber vermutlich keine Normbereiche für das Vorliegen einer latenten, einer aktiven oder reaktivierten T. gondii-Infektion geben können. Es steht jedoch außer Zweifel, daß in bestimmten Konstellationen die quantitative Bestimmung von T. gondii-DNA aus definiertem Probenmaterial eine hilfreiche Zusatzinformation bei der Beurteilung von serologischen bzw. histologischen Befunden oder zur Abschätzung des Risikos der Entwicklung einer aktiven Toxoplasmose bei immunsupprimierten Transplantationspatienten darstellen kann. Neben rein diagnostischen Aspekten kann die quantitative Erfassung des Erregers zudem auch für das Therapiemonitoring oder bei der Entwicklung von neuen pharmazeutischen Wirk- und Impfstoffen von zentraler Bedeutung sein.Summary: Application of modern real-time PCR technology has led to a significant increase in specificity and sensitivity of molecular test systems for the detection of Toxoplasma gondii. Using optimized primer and probe sequences, and targeting a specific, highly conserved multicopy DNA target sequence, less than one genome of T. gondii can be reliably detected in body fluids, e.g. in blood, amniotic or cerebrospinal fluid. This may be of importance for the early initiation of adequate treatment, when connatal infection or reactivation of toxoplasmosis in the immunocompromised host is assumed. However, the correlation between parasite burden and medical manifestation needs further evaluation, and standard ranges discriminating between latent, active or reactive toxoplasmic infections cannot be expected. Nevertheless, quantitative determination of Toxoplasma in body fluids may provide valuable supportive information for the interpretation of serological and histological results and has proven to be useful in quantifying parasitaemia and monitoring therapy in immunodeficient patients. The method may also be suited for the development and testing of antiparasitic agents.
  Laboratoriums Medizin 11/2003; 27(9‐10):393 - 397.
• Article: Labordiagnose der zystischen und alveolärenEchinokokkose

  M. Frosch
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  ABSTRACT: Zusammenfassung: Für die Diagnose der zystischen (ZE) und alveolren Echinokokkose (AE) hat die serologische Diagnostik neben bildgebenden Verfahren (Sonographie, Computertomographie) einen hohen Stellenwert. In den vergangenen Jahren wurden mit der Einführung neuer Testverfahren und der für den Antikörpernachweis im Serum verwendeten Antigene erhebliche Verbesserungen hinsichtlich Spezifitt und Sensitivitt der Serodiagnostik erzielt. Für die Indikationsstellung einer serologischen Untersuchung und deren Befundinterpretation müssen jedoch auch Aspekte der Epidemiologie sowie klinische Charakteristika berücksichtigt werden.Summary: The diagnosis of cystic and alveolar echinococcosis depends on serological tests and imaging techniques (sonography, computerized tomography). In recent years, specificity and sensitivity of the serodiagnosis have been significantly improved by the introduction of novel tests, which are based on well-characterized antigens for serum antibody detection. However, indications for their application and the interpretation of test results require knowledge about the epidemiology of the parasitosis and the clinical course of the disease.
  Laboratoriums Medizin 11/2003; 27(9‐10):389 - 392.
• Source

  Available from: mediprotrans.net

  Article: HLA Diagnostic Sequencing –Conception, Application and Automation

  R. Blasczyk
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  ABSTRACT: Sequencing gives the most reliable and accurate information of the DNA sequence of a gene and is therefore of particular interest for fully characterising the genetic complexity and allelic diversity of the HLA genes. The full complexity of allelic diversity in HLA class I and class II genes, as well as recent improvements in the convenience and quality of automated sequencing, makes sequencing the method of choice for HLA low- and high-resolution typing. HLA typing by means of sequencing should be done whenever the HLA type of an individual is needed. The current developments with regard to HLA-sequencing systems, sequencing instruments and software solutions for data interpretation have made sequencing equally simple and robust, providing formats for each level of throughput and automation in order to match each laboratory's individual requirements. Modern sequencing is based on direct sequencing of PCR products from genomic DNA with the help of fluorescent-labelling methods using dye terminator cycle sequencing chemistries with specialised DNA polymerases and automated capillary sequencers. The presently available HLA sequencing systems differ mainly in regard to their PCR amplification strategies and software solutions for allele identification. As the diversity of all HLA loci developed through extensive sequence exchanges, resulting in chimeric structures of each HLA allele, the allele-specific sequencing approach is the most successful for high-resolution typing (4 digits), as it is capable of determining the cis linkage of sequence motifs. This is achieved by applying multiple group-specific amplifications in parallel, thus splitting the alleles into individual groups. This approach increases the capacity for cis linkage definition and in turn decreases the number of ambiguities. When sequencing shall be established as the only method for 4-digit HLA typing, these group-specific approaches must be used. When sequencing shall be used also for 2-digit HLA typing, a gene-specific amplification approach for sequencing of both alleles simultaneously should be applied. Thus, the progress made in diagnostic HLA sequencing now offers a real alternative to the conventional molecular typing techniques, and will increasingly replace them for the patients' benefit.Zusammenfassung: Die Sequenzierung liefert die zuverlssigste und genaueste Information über die DNA-Sequenz eines Gens und ist daher für die Charakterisierung der genetischen Komplexitt und allelischen Vielfalt der HLA-Gene von besonderem Interesse. Die hohe Komplexitt der allelischen Diversitt der HLA Klasse I und II Gene und die aktuellen Verbesserungen in der Anwendung und Qualitt der automatischen Sequenzierung machen die Sequenzierung zur Methode der Wahl für niedrig- und hochauflösende HLA-Typisierungen. Eine Sequenzierung sollte daher immer in Betracht gezogen werden, wenn eine HLA-Typisierung erforderlich ist. Die modernen Entwicklungen der HLA-Sequenziersysteme, Sequenziergerte und Softwarelösungen zur Dateninterpretation haben die Sequenzierung gleichermaßen einfach und robust werden lassen, bieten jede gewünschte Stufe für Hochdurchsatz und Automatisierung und können die individuellen Anforderungen jedes einzelnen Labors erfüllen. Die moderne Sequenzierung beruht auf der direkten Sequenzierung von PCR-Produkten aus genomischer DNA unter Verwendung von Fluoreszenzmarkierungen mit 4-Farben-Terminatoren, Zyklus-Sequenzierungen mit spezialisierten DNA-Polymerasen und automatischen Kapillarsequenzierern. Die zur Zeit verfügbaren HLA-Sequenziersysteme unterscheiden sich hauptschlich hinsichtlich ihrer PCR-Amplifikationsstrategien und der Software-Lösungen für die Allelidentifizierung. Da die Diversitt aller HLA-Gene durch intensive segmentale Rekombinationen entstanden ist, stellt jedes HLA-Allel eine Chimre anderer HLA-Allele dar. Die Allel-spezifische Sequenzierung ist daher für eine hochauflösende (4-stellige) Typisierung am besten geeignet, da sie die cis-Kopplung der Sequenzmotive erkennt. Eine Allel-spezifische Sequenzierung wird erreicht, indem multiple Gruppen-spezifische Amplifikationen parallel durchgeführt werden und dadurch die beiden Allele einer Probe in zwei Gruppen getrennt werden. Dieser Ansatz steigert die Fhigkeit eines Sequenziersystems die cis-Kopplungen von Sequenzmotiven zu definieren erheblich und minimiert auf diese Weise die Anzahl uneindeutiger Sequenzierergebnisse. Wenn die Sequenzierung als alleinige Methode für 4-stellige HLA-Typisierungen etabliert werden soll, müssen Gruppen-spezifische Amplifikationen verwendet werden. Wenn die Sequenzierung auch für 2-stellige HLA-Typisierungen eingesetzt werden soll, können Genort-spezifische Amplifikationen zur simultanen Sequenzierung beider Allele verwendet werden. Die Fortschritte der diagnostischen Sequenzierung bieten daher bereits jetzt eine wirkliche Alternative zu konventionellen molekularen Typisierungstechniken und werden diese zum Wohle des Patienten zunehmend ersetzen.
  Laboratoriums Medizin 09/2003; 27(9‐10):359 - 368.